全 文 ：度是影响 Pn 的主要环境因子。黄芩植株出现光合
“午休”现象时 ,光照强度变化不是很大 ,光强可能不
是导致光合速率中午降低的直接原因 ,但它是引起
日气温和湿度等变化的主要因素 ,从而间接地影响
光合作用。
314 　黄芩 Gs 与 P n 的关系 :植物的光合作用受气
孔调节与非气孔调节的共同影响 ,但在不同的植物
中其作用不等[ 5 ] 。本研究表明 ,黄芩叶片气孔阻力
在一天中呈现规律性变化 ,并且同步同向对应着 P n
的日变化 ,两者之间呈极显著正相关 ,表明黄芩植株
P n与气孔调节是密切相关的。
315 　黄芩植株 P n 与生态因子的灰色关联分析 :本
研究表明 , PPFD、空气湿度是影响黄芩植株 P n 的
主要生态因子。由于 PPFD 依赖于自然条件的变
化 ,不易控制 ,而空气湿度则可以通过技术措施加以
改变。因此生产上在 7～8 月高温干旱季节应加强
黄芩田间水分管理 ,合理灌溉 ,增加土壤水分 ,提高
空气相对湿度 ,以提高叶片光合能力 ,增加光合作用
日同化量。同时在有条件地区推广喷灌技术 ,创造
人工小气候 ,从而减少或避免“午休”现象的出现 ,为
药材产量的提高奠定基础。
参考文献 :
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出版社 , 19981
广东土牛膝 HPLC指纹图谱的研究
张 　军1 ,张晓琦2 ,汤 　毅3 3 ,林雪颖1 ,邓鲲鹏1
(11 广州中医药大学新药开发研究中心 ,广东 广州 　510405 ; 21 暨南大学中药及天然药物研究所 ,广东 广州 　510632 ;
31 广州中大创新公司 ,广东 广州 　510070)
摘 　要 :目的 　采用 HPL C 法对广东土牛膝进行指纹图谱研究 ,为广东土牛膝药材质量控制提供依据。方法 　实
验采用 Kromasil C18柱 (250 mm ×416 mm ,5μm) ,以乙腈2水为流动相梯度洗脱 ,体积流量 110 mL/ min ,柱温 25
℃,检测波长 230 nm。结果 　建立广东土牛膝药材 HPLC 指纹图谱 ,确定 13 个共有峰 ,确定其相对保留时间和相
对峰面积。结论 　在选定的条件下所建立的指纹图谱为广东土牛膝药材质量控制提供依据。
关键词 :广东土牛膝 ; HPLC 指纹图谱 ;泽兰素
中图分类号 :R28217 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0620964204
Fingerprint of Eupatorium chinense by HPLC
ZHAN G J un1 , ZHAN G Xiao2qi2 , TAN G Yi3 , L IN Xue2ying1 , D EN G Kun2peng1
(11 New Drug R &D Center , Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine , Guangzhou 510405 , China ;
21 Institute of Chinese Materia Medica and Natural Product s , Jinan University , Guangzhou 510632 , China ;
31 Guangzhou Zhongda Innovation Company , Guangzhou 510070 , China)
Abstract : Objective 　To establish t he H PL C fingerp rint of Eu p atori um chi nense1 Methods 　The ana2
lysis was performed on a Kromasil C18 column (250 mm ×416 mm , 5μm) wit h acetonit rile2water as mobile
p hase in a gradient mode1 The flow rate was 110 mL/ min1 The column temperat ure was 25 ℃and t he de2
tection wavelengt h was 230 nm1 Results 　The fingerp rint of E1 chi nense wit h common 13 peaks was estab2
lished1 The relative retention time and t he ranges of relative area of t he common peaks were determined1
Conclusion 　The established fingerp rint could be used for t he quality cont rol of E1 chi nense1
Key words : Eu p atori um chi nense L1 ; HPL C fingerp rint ; euparin
·469· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 6 期 2009 年 6 月
3 收稿日期 :2008209218　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
作者简介 :张　军 (1971 —) ,男 ,山东淄博人 ,副研究员、硕士 ,研究方向为中药新药药学研究。　
Tel : (020) 39358519 　E2mail :zhjxsh @yahoo1com1cn3 通讯作者　汤　毅　Tel :13352816718 　E2mail :tigertang @21cn1com
　　广东土牛膝为菊科植物华泽兰 Eu p atori um
chi nense L1 的干燥根 ,具有清热解毒、凉血利咽的
功效 ,收载于《广东省中药材标准》[ 1 ] ,是广东地区常
用的喉科要药。广东土牛膝含黄酮苷、氨基酸、有机
酸、酚类、生物碱、挥发油[2 ] 。现代药理研究表明 ,广
东土牛膝具有抗菌[3 ,4 ] 、中和毒素和抗炎镇痛作
用[5 ] 。本品的质量标准研究仅见性状鉴别、显微鉴
别及 TL C 鉴别 ,本实验以泽兰素为对照品 ,建立广
东土牛膝 HPL C 指纹图谱 ,为广东土牛膝的质量控
制提供依据。
1 　仪器与试药
111 　仪器 :Dionex Summit 高效液相色谱仪 ;电子
分析天平 ( Shimadiu Libror A EG—220 ; Sartorius
CP225D) ; KQ2200 超声波清洗器 (昆山超声仪器有
限公司) 。
112 　试药 :甲醇、乙腈均为色谱纯 ,液相用水为高纯
水。其余试剂为分析纯。泽兰素对照品 (质量分
数 > 98 % ,由暨南大学中药及天然药物研究所提
供) 。广东土牛膝 (产地 :广东、广西) ,来源见表 1 ,
经广州中医药大学中药学院中药鉴定教研室黄海波
教授鉴定 ,均为菊科植物华泽兰 E1 chi nense L1 的
干燥根及根茎。
表 1 　广东土牛膝药材样品产地
Table 1 　Habitats of E1 chinense samples
批　次 产　地 批　次 产　地
1 广东从化 6 广东清远
2 广东清远 7 广东清远
3 广西来宾 8 广东清远
4 广东清远 9 广东清远
5 广东韶关 10 广东从化
2 　方法与结果
211 　色谱条件与系统适用性试验 :色谱柱为 Kro2
masil C18柱 (250 mm ×416 mm ,5μm) ;乙腈2水为
流动相梯度洗脱 : 0 ～ 15 min ,乙腈 10 %递升至
36 % ,15～20 min ,乙腈 36 %递升至 38 % ,20～25
min ,乙腈 38 %等度 ,25～70 min ,乙腈 38 %递升至
100 % ;体积流量 110 mL/ min ;柱温 :25 ℃;检测波
长 :230 nm ,理论板数按泽兰素计算应不低于3 000。
212 　对照品溶液的制备 :精密称取泽兰素对照品适
量 ,加甲醇制成质量浓度为 012 mg/ mL 的溶液 ,即得。
213 　供试品溶液的制备 :取本品粉末 (过 20 目筛)
约 110 g ,精密称定 ,置具塞锥形瓶中 ,精密加入甲醇
100 mL ,称定质量 ,回流提取 1 h ,冷却至室温 ,再称
定质量 ,用甲醇补足减失的质量 ,摇匀 ,滤过 ,精密吸
取续滤液 50 mL ,回收甲醇 ,残渣加甲醇使溶解并转
移至 5 mL 量瓶中 ,定容至刻度 ,摇匀 ,再以 0145μm
微孔滤膜滤过 ,取续滤液 ,作为供试品溶液。
214 　测定方法 :精密吸取对照品溶液与供试品溶液
各 10μL ,注入液相色谱仪 ,测定记录广东土牛膝色
谱图 ,以供试品溶液中泽兰素为参照峰 (12 号峰) 分
别计算各峰的相对保留时间和相对峰面积的比值 ,
采用国家药典委员会相似度对比软件 2004A 版进
行相似度计算。
215 　方法学考察
21511 　精密度试验 :取同一供试品溶液 ,连续进样
5 次 ,以上述色谱条件测定其 H PL C 图谱。采用中
药色谱指纹图谱相似度评价系统计算相似度均在
0199 以上。各主要色谱峰的相对保留时间的 RSD
小于 2 % ,相对峰面积的 RSD 小于 2 % ,符合指纹图
谱研究技术的要求[ 6 ] 。
21512 　稳定性试验 :取同一供试品溶液 ,分别在 0、
4、8、12、24 h 进样测定 ,各主要色谱峰的相对保留
时间的 RSD 小于 2 % ,相对峰面积的 RSD 小于
4 % ,符合指纹图谱研究技术的要求[6 ] ,表明供试品
溶液在 24 h 内稳定。
21513 　重现性试验 :分别精密称取同一批药材粉末
(过 20 目筛)共 5 份 ,按照 213 项制备供试品溶液 ,
以上述色谱条件测定其 HPL C 图谱。采用中药色
谱指纹图谱相似度评价系统计算相似度均在 0199
以上。各主要色谱峰的相对保留时间的 RSD 小于
2 % ;相对峰面积的 RSD 小于 3 % ,符合指纹图谱研
究技术的要求[6 ] 。
216 　指纹图谱各项技术参数 :按上述方法测定 10
批广东土牛膝药材的指纹图谱与对照品的 HPL C
图谱 ,结果见图 1、2。共有峰相对保留时间和相对
峰面积见表 2、3。
217 　指纹图谱相似度计算 :将 10 批广东土牛膝样
品指纹图谱的 A IA 数据文件导入 2004 年国家药典
委员会开发的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统
研究版 (2004A)》,计算各样品指纹图谱与生成的对
照图谱 R 的相似度 ,结果见表 4。经鉴定 ,第 1 批药
材为菊科植物华泽兰的干燥根及根茎。与其他批次
药材相比较 ,在相同的色谱条件下 ,指纹共有峰的相
对保留时间一致。因第 1 批药材 1 # 、5 # 、11 # 相对
峰面积较大 ,导致了相似度偏低。这种成分之间量
的比例差异可能是因药材的生长环境 ,采收加工 ,储
存等各种因素的影响 ,但现有的研究基础无法确定
其具体因素。
218 　广东土牛膝根与茎的指纹图谱比较 :依据所设
·569·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 6 期 2009 年 6 月
图 1 　土牛膝的对照图谱
Fig11 　Reference f ingerprint of E1 chinense 图 2 　10 批广东土牛膝指纹图谱Fig12 　HPLC Fingerprint for ten batches of E1 chinense
表 2 　广东土牛膝指纹图谱共有峰相对保留时间
Table 2 　Relative retention time of HPLC f ingerprint common peaks
峰号
相对保留时间
1 # 2 # 3 # 4 # 5 # 6 # 7 # 8 # 9 # 10 #
RSD/ %
1 01 047 01047 01046 01 047 01 046 01046 01047 01 046 01 046 01048 11201
2 01 081 01076 01076 01 076 01 077 01076 01076 01 076 01 076 01074 21082
3 01 174 01178 01177 01 177 01 179 01177 01177 01 177 01 178 01173 01938
4 01 249 01248 01249 01 249 01 252 01250 01249 01 249 01 249 01250 01363
5 01 340 01339 01339 01 339 01 342 01340 01339 01 340 01 340 01340 01205
6 01 380 01379 01380 01 380 01 381 01380 01380 01 380 01 380 01380 01144
7 01 438 01437 01437 01 437 01 439 01438 01438 01 438 01 438 01438 01135
8 01 529 01529 01527 01 528 01 529 01528 01528 01 528 01 527 01528 01118
9 01 565 01565 01563 01 564 01 565 01564 01564 01 564 01 563 01564 01138
10 01 834 01834 01834 01 834 01 834 01834 01834 01 834 01 833 01834 01027
11 01 943 01943 01943 01 943 01 944 01944 01942 01 943 01 944 01943 01046
12 11 000 11000 11000 11 000 11 000 11000 11000 11 000 11 000 11000 01000
13 11 050 11049 11050 11 048 11 050 11049 11048 11 049 11 050 11048 01074
表 3 　广东土牛膝指纹图谱共有峰相对峰面积
Table 3 　Relative peak area of HPLC f ingerprint common peaks
峰号
相对峰面积
1 # 2 # 3 # 4 # 5 # 6 # 7 # 8 # 9 # 10 #
1 21 722 01945 01 745 01244 11 429 01252 01 591 01449 01524 01 433
2 01 075 01101 01 026 01027 01 067 01047 01 080 01042 01020 01 126
3 01 444 01318 01 498 01121 01 819 01166 01 068 01147 01428 01 126
4 01 124 01132 01 066 01026 01 136 01060 01 026 01030 01068 01 035
5 21 302 11661 01 776 01155 11 861 01458 01 056 01228 01616 01 471
6 01 092 01068 01 050 01016 01 096 01029 01 012 01019 01041 01 032
7 01 232 01143 01 216 01044 01 495 01095 01 023 01119 01030 01 094
8 01 663 01720 01 314 01093 01 822 01256 01 032 01149 01413 01 188
9 01 276 01373 01 116 01047 01 277 01129 01 016 01058 01158 01 073
10 01 552 01858 01 879 01785 01 622 01889 01 825 01706 01309 01 792
11 01 600 01104 01 077 01017 01 218 01046 01 014 01027 01043 01 043
12 11 000 11000 11 000 11000 11 000 11000 11 000 11000 11000 11 000
13 01 139 01166 01 051 01022 01 142 01071 01 012 01029 01049 01 041
表 4 　相似度分析结果
Table 4 　Analytic result of similarity
编号 相似度 编号 相似度
1 01534 6 01971
2 01873 7 01919
3 01973 8 01968
4 01933 9 01862
5 01840 10 01956
色谱条件 ,对 2 批广东土牛膝的茎进行 H PL C 测
定 ,与广东土牛膝对照图谱比较 ,相似度分别为
01327 和 01390。见图 3。
3 　讨论
311 　检测波长的确定 :在对供试品溶液进行指纹图
谱条件摸索时 ,考察了 203、230、240、260 nm 检测
波长下的色谱图。其中 230 nm 波长下检测色谱峰
较多 ,因此确定测定波长为 230 nm。
312 　色谱条件的选择 :实验过程中选择了多种流动
相系统甲醇2水、甲醇2014 %磷酸水溶液、乙腈2水、乙
·669· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 6 期 2009 年 6 月
图 3 　土牛膝根及茎 HPLC图谱( S1 ,S2 为茎 ,S3 为根)
Fig13 　HPLC Chromatogram for root and stem
of E. chinense ( S1 and S22stem; S32root)
腈2013 %磷酸水溶液、乙腈2012 %磷酸水溶液等度
和梯度洗脱方式 ,并对梯度洗脱程序进行优化 ,结果
表明以乙腈2水系统为最佳。各色谱峰分离度较好 ,
峰型尖锐 ,保留时间适中。
313 　供试品溶液制备条件的选择 :考察了回流、超
声提取方式及甲醇、95 %乙醇、70 %乙醇提取溶剂。
结果表明 ,回流提取方式得到的色谱峰峰面积大 ,峰
数多 ,优于超声提取。甲醇提取的色谱峰最多 ,提取
完全。故供试品溶液制备采用甲醇回流提取 1 h。
314 　指纹图谱的建立 :通过指纹图谱整体图形、共
有特征峰、相对保留时间等参数可对药材进行鉴定 ,
通过各共有峰相对峰面积可对药材的质量进行评
价。10 批广东土牛膝药材指纹图谱中 ,13 个共有峰
相对保留时间符合程度较好 ,说明不同来源的广东
土牛膝药材中组分有其一致性。但是 10 批药材共
有峰相对峰面积有一定的差异 ,说明 10 批药材的质
量是有差异的。
315 　广东土牛膝根茎指纹图谱比较 :在收集样品的
过程中 ,发现市售部分药材含有茎 ,个别甚至以茎为
主 ,因此本实验对广东土牛膝的茎进行 H PL C 测
定。结果表明 ,与广东土牛膝对照图谱差异显著 ,说
明广东土牛膝根和茎成分差异较大。
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　　(上接第 914 页)
图 1 　黄连明目丸( A) 、盐酸小檗碱对照品( B)和缺黄连的阴性样品( C)的 HPLC图谱
Fig. 1 　HPLC Chromatorams of Huanglian Mingmu Pills ( A) , berberine hydrochloride reference substance ( B) ,
and negative sample ( C)
6 份 ,分别精密称定 ,制备供试品溶液 ,进样测定盐
酸小檗碱峰面积 ,计算得盐酸小檗碱的质量分数为
11313 mg/ g ,其 RSD 为 1112 %。
219 　回收率试验 :取批号 080801 黄连明目丸样品
5 份 ,每份 0125 g ,精密称定 ,加入 01277 4 mg 盐酸
小檗碱对照品 ,制备供试品溶液 ,进样测定 ,计算 ,结
果平均回收率为 10011 % ,RSD 为 018 %。
2110 　样品测定 :取 3 批黄连明目丸样品 ,制备供试
品溶液。分别精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液与供
试品溶液各 5μL 注入液相色谱仪 ,测定 ,计算 ,结果
见表 1。
3 　讨论
　　采用加盐酸2甲醇 (1 ∶100) 直接超声处理15 、 表 1 　黄连明目丸中盐酸小檗碱的测定结果 ( n = 3)Table 1 　Determination of berberine hydrochloridein Huanglian Mingmu Pills ( n = 3)批　号 盐酸小檗碱/ (mg ·g - 1)080801 11 31080802 11 38080803 11 3930 min、预浸 30 min 后超声 30 min、预浸 60 min 后超声60 min ,2 倍溶剂预浸 60 min 后超声 30 min 方法提取对盐酸小檗碱的影响 ,结果显示上述方法测定结果无明显差异 ,为保证提取完全 ,选择超声提取 30 min。参考文献 :[ 1 ] 　丘文珍1 HPLC 法测定障眼明片中盐酸小檗碱 [J ]1中草药 ,2007 ,38 (7) :1030210311
·769·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 6 期 2009 年 6 月