全 文 ：·426· 中革菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第3期2006年3月
株，通过与二倍体杂交获得三倍体后代，以拓宽育种
资源。进一步研究不同倍性材料的生物学性状和薯
蓣皂苷元量，筛选出高产、高薯蓣皂苷元量的最适倍
性，有望解决目前盾叶薯蓣人工栽培后有效成分量
下降的问题，振兴皂素工业。
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山东产瓜蒌不同农家品种的RAPD研究
孙稚颖1”，周风琴1
(I．山东中医药大学药学院。山东济南250014}2．山东师范大学生命科学学院，山东济南250014)
摘要：目的探讨瓜蒌不同农家品种的遗传多样性和亲缘关系，对其进行分子标记鉴定。方法用25个随机引
物对山东瓜萎不同农家品种、野瓜蒌及对照湖北栝楼进行RAPD分析。采用NTSYSpc软件计算瓜萎各农家品种
(及种)间的Jaceard遗传相似系数，按非加权配对算术平均法(UPGMA)建立各品种问的聚类图。结果共扩增出
256个条带，其中多态带为232条，占87．2％。聚类图显示，对照湖北栝楼与瓜萎各农家品种和野生种阃的差异最
大，牛心瓜蒌与仁瓜萎、大瓜萎与八棱瓜蒌、小光蛋与野瓜蒌彼此间亲缘关系较近。结论RAPD分子标记法可以
在分子水平上规范、整理和鉴定瓜萎的不同农家品种，揭示了瓜蒌种质资源的亲缘关系以及遗传背景，为山东道地
药材瓜萎的栽培育种及资源保护提供了重要参考。
关键词：瓜萎；农家品种；RAPD；亲缘关系；遗传多样性
中圈分类号：R282．7 文献标识码；A 文章编号：0253—2670(2006)03042 — 4
RAPDAnalysisonfarmcultivarsoffruitsofrrichosanthes
kirilowiifromShandongProvince
SUNZhi—yin91～，ZHOUFeng—qinl
(1．CollegeofPharmacy，ShandongUniversityfTraditionalChineseMedicinetJinan250014，Chinai
2．CollegeofLifeScience，ShandongNormalUniversity，Jinan250014，China)
Abstract：ObjectiveToexploreth geneticd versityandrelationshipofdifferentcul ivarsofthe
fruitsofTrichosantheiskirilowii．anddeterminetheminmolecularlevel．MethodsDifferentframculti—
varsandfruitsinwildplantofT．kirilowiifromShandongProvinceandT．hupehensisweredetectedby
鉴鐾是皙：酱菜客车崔药管理局课题(编号：。。叽一。。)
作者简卉2袭等嚣器?冕五乏杰’鬯变妻莲罂烹篙霎罂j毫孽博士’主要从事植物资源分类学研究工作。
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万方数据
中革番ChineseTraditionalandHerhDrugs第37卷第3期2006年3月·427·
randomlyamplifiedpolymorphicDNA(RAPD)markerswith25randomizedprimers．TheJaccardcoeffi—
cientwasworkedOutbyusingNTSYS—pcsoftware，andaclusterndrogramofdifferentsampleswaes—
tablishedbasedonunweighedpair—groupmethodwitharithmeticmean(UPGMA)．ResultsTh25e—
lectedprimersp oduced266bandsamongwhich232bands(87．2％)werepolymorphic．Intheclusterd n—
drogram，T．hupehensiswasfarfromthedifferentcul ivarsandfruitsinwildplantofT．kirilowii，but
therewasclosergeneticrelationshipbetweenNiuxinGualouandRenGualou，DaGualou，andB leng
Gualou．aswellasXiaoGuang—danGualouandwildsample．ConclusionRAPDMarkerscanbeusedtO
standardize，arrange，anddeterminefarmcultivarsoffruitsofT．kirilowiiinmolecularlevel，andindicate
thegeneticrelationshipandbackground，thenprovidemportantinformationforseedbreedinga dre—
sourseprotectionofT．kirilowii．
Keywords：thefruitsOfTrichosantheskirilowiiMaxim．；farmcultivars；RAPD；geneticrelationship；
geneticd versity
瓜萎是山东重要道地药材，为葫芦科栝楼Tri-
chosantheskirilowiiMaxim．的干燥果实“J，药用历
史悠久。临床具有清热涤痰、宽胸散结及润燥滑肠之
功效，为中医常用治胸痹之要药，近年来又用于治疗
糖尿病，用途广泛。栝楼是一种雌雄异株、异花授粉
的植物，在山东各地具有悠久的栽培历史，长期的自
然选择和人工选育，在各地形成了一系列的农家栽
培品种，其中包括山东优质瓜蒌农家品种“仁瓜蒌”、
“牛心瓜萎”等。近年来，由于市场经济的灵活性，一
些地区和药农盲目引种外省的瓜萎品种，如“地瓜
蒌”等，致使山东瓜萎的种质资源出现混乱，瓜萎药
材的外观性状和内在质量也发生了较大变化，从而
大大地威胁着山东优质瓜蒌农家品种的纯度，甚至
生存。到目前为止，对瓜蒌农家品种的鉴定尚缺乏准
确可靠的方法，对各农家品种的遗传背景和亲缘关
系也了解甚少。
RAPD分子标记技术自20世纪90年代以来，
被证明是一种在动植物遗传多样性研究以及属下、种
下系统学研究方面甚为便捷和有效的方法口’3]。本研
究在全面调查山东瓜萎种质资源的基础上，采用
RAPD分子标记技术分析瓜蒌各农家品种问的亲缘
关系，并与野生栝楼和山东误引种的湖北栝楼作对
比，提供DNA分子水平的鉴定资料，为明确山东道
地药材瓜蒌种质资源的遗传多样性、鉴定山东瓜萎不
同的农家品种以及合理保护和利用提供理论依据。
1材料和方法
1．1材料：收集山东产瓜萎各农家品种的成熟果
实，取出种子，洗净晾干，次年3月份种于山东中医
药大学药圃。取新鲜嫩叶，每品种取5个以上个体，
混合。供试样品来源见表1。样品经山东中医药大学
药学院周凤琴教授鉴定，1～8号为山东产瓜萎的农
家栽培品种，原植物为栝楼T．kirilozwiiMax m．，9
号为栝楼野生种的果实，采自山东长清马山小山坡，
10号为湖北栝楼T．hupehensisC．Y．Chenget
Yueh的果实。
衰1实验材料的来源
Table1 Sourceofmaterialstested
1．2仪器和试剂：冰冻超速离心机(BECKMAN，
J2—21M型)、离心机(EppendorfCentrifuge5417R，
德国)、数显恒温水浴锅(HH一2型，国华电器有限公
司)、PCR仪(System一9700仪，德国)、电泳仪(DYY
Ⅲ型电泳仪，北京六一仪器厂)、GeneG nius凝胶
紫外成像系统(SYNGENE公司)、dNTP、TaqDNA
聚合酶、随机引物(上海博亚公司)、100bpMarker
(大连赛恩斯公司)、琼脂糖、EB(上海Sangon公
司)，其余试剂均为分析纯。
1．3 DNA的提取：采用CTAB法口]。
1．4 PCR扩增及产物检测：反应体系为25pL：含
20ngDNA，1．0ttmol／L引物，2．5HL10xTaq缓
冲液(100mmol／LTris—HClpH8．4，500mmol／L
KCl，15mmol／LMgCIz，1mg／mLBSA)，200
}tmol／LdNTP(dATP、dGTP、dCTP、dTTP)，1U
Taq酶。反应程序：94℃、5min，94℃、1min，36
℃、1min，72℃、2rain，45个循环后于72℃延伸10
万方数据
中革鸯ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第3期2006年3月
min，扩增完成后置于4c保存。扩增产物于l，5％
琼脂糖(内含1gg／mLEB)凝胶电泳检测(5V／era，
1～2h)，用100bpDNALadderMarker作相对分
子质量标记，观察记录结果，分析扩增谱带。
1．5数据分析及品种的鉴定；每个样品的扩增带按
有或无记录，“有”赋值为1(包括强带和重复性好的
弱带)，“无”赋值为0，从而得到原始数据矩阵，计算
多态性条带比率，用NTSYS—pc软件(Version2．oo)
计算各品种间的Jaecard遗传相似系数，按非加权配
对算术平均法(uPGMA)建立各品种问的聚类图。
2结果
2．1 RAPD扩增结果：从200多个Operon公司的
随机引物中筛选出25个能扩增出清晰且具多态性
条带的引物，用以对lo份材料进行扩增，结果扩增
出266个条带，其中多态带为232条，占总扩增条带
数的87．2％。扩增条带长度范围多集中在300～
l500bp。
2．2瓜蒌不同品种的聚类分析(图1)：由聚类图看
出，野瓜蒌和所有瓜萎农家品种均与湖北栝楼相差很
远，在遗传相似系数为0．40处即分开，表明不同的物
种遗传差异较大。农家品种牛心瓜蒌与仁瓜蒌、大瓜
蒌与八棱瓜蒌、小光蛋l与小光蛋2彼此首先聚在一
起，表明亲缘关系较近。在遗传相似系数为0．82处，
各品种被分为4组，第1组包括牛心瓜蒌与仁瓜蒌；
第2组为明皮；第3组为大瓜蒌与八棱瓜蒌；第4组
包括地瓜蒌、小光蛋1与小光蛋2以及野瓜萎。
0A’0’’’’0’54。’。。o爵’’’。oil。’’‘0。94
围l瓜婪不同品种基于RAPD分析数据的聚类囤
Fig．1Clusterd ndrogramofdifferentcul ivarsof
fruitsofT．kiriIowiibasedOilRAPDdata
2．3瓜萎农家品种的分子鉴定：从RAPD扩增带
谱中，发现瓜萎各农家品种对于不同引物或多或少
都有自己的特有谱带，重复实验汪明，稳定性良好。
如图2，引物为OPO03，明皮在550、1000bp处、地
瓜蒌在800bp处各有一扩增产物，而其他品种在此
3处都无扩增产物；大瓜萎与八棱瓜萎在300、350
bp处各有两条特异扩增带，此外，除了特异扩增带，
还有特异缺失带，如牛心瓜蒌与大瓜蒌在l550bp
处都有一条缺失条带，这为瓜蒌农家品种的鉴定提
供了一定的分子依据，但能否作为各品种分子鉴定
的特异标记，尚待进行个体取样研究重复，以进一步
确证。
圉2引物OPO一03扩增的RAPD带谮
Fig．2RAPDBandsamplifiedbyPrimerOPO-03
3讨论
3．1 RAPD技术在瓜萎农家品种研究中的应用：
RAPD扩增结果表明，瓜蒌农家品种问多态性较
高，具有丰富的遗传多样性，这正是栝楼形成多农家
品种的分子基础，RAPD分子标记作为一种有效鉴
别工具，可以在分子水平上规范、整理和鉴定瓜蒌的
农家品种，揭示瓜蒌种质资源的亲缘关系以及遗传
背景，对于指导今后瓜蒌的栽培育种工作及资源的
合理保护无疑是十分有意义的。
3．2 仁瓜蒌与牛心瓜蒌：仁瓜萎是山东著名的道地
药材，产量大、质量优，历来是道地产区药农推崇的
优质瓜蒌农家品种。药材表面棕红色至橙红色，果皮
皱缩，果瓤及种子多，体重，糖分足。牛心瓜萎是道地
产区仁瓜蒌田内较少见的一个农家品种，果实形似
仁瓜蒌，但先端渐尖，形似牛心，故名。产区药农根据
经验，认为牛心瓜萎与仁瓜蒌一样，也是优质农家品
种。聚类分析结果仁瓜萎与牛心瓜蒌最先聚在一起，
表明仁瓜蒌与牛心瓜蒌亲缘关系最近，这与王敏
等“]的报道一致。二者与野瓜蒌的距离甚远，说明通
过长期的人工栽培和驯化，人工选择和自然选择使
两个农家栽培品种的遗传基因在野生种的基础上发
生了相当大的变化，突显了植物体的优良特性，使外
观特征及内在质量等遣传性状稳定，形成了优质的
农家栽培品种。实验结果为仁瓜蒌和牛心瓜萎优质
万方数据
中革蒋ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第3期2006年3月
农家品种的划分与鉴定提供了分子水平的依据。
3．3小光蛋、野生瓜蒌与明皮：，J、光蛋是山东产区
药农对栽培栝楼中个小色黄、类球形、果皮光滑、种
子及果瓤少的一类农家品种的称呼。小光蛋1与小
光蛋2是来自不同产地的同一农家品种，RAPD研
究结果表明，二者的遗传相似性系数极高，达到
0．94，这说明瓜萎农家品种内的差异远远小于农家
品种间的差异，同时也证明了RAPD分子标记技术
用于种下农家品种分类上的可靠性，实验结果支持
了不同产区对小光蛋这个农家品种划分的标准。
野瓜萎外形和质量极似小光蛋，在各产区民问
使用。实验结果表明野瓜蒌与小光蛋的亲缘关系最
近，它们最先聚在一起，说明它们体内遗传物质的相
似程度最大。是否可以这样理解，小光蛋是由野生栝
楼经药农人工栽培而形成的较为初级的、原始的农
家品种类型，其进化方式和遗传背景尚待研究。
明皮是山东产区形似小光蛋的一类农家品种，
果实类球形，个较小，色橙黄至橙红，果皮光滑，有的
产区由于其外形似小光蛋也把其归人小光蛋类型，
使其名称混乱。RAPD分子标记分析表明，明皮是
明显区别于小光蛋的一个独立的农家品种类型，聚
类分析结果明皮与小光蛋的亲缘关系甚远，而与仁
瓜萎和牛心瓜萎的亲缘关系较近。实际上，明皮常混
种于仁瓜蒌产区，大小似仁瓜蒌，干燥后体较重，药
农因其果皮不皱缩而光滑特称其为明皮，一般认为
质量次于仁瓜蒌和牛心瓜蒌。因此，明皮应明确为一
个农家栽培品种，不能与小光蛋混为一谈。
3．4大瓜蒌与八棱瓜蒌：大瓜蒌与八棱瓜蒌是山东
产区两个栽培品种，大瓜萎特点是个大，椭圆形或类
球形，果皮橙黄色或黄色，光滑无皱，果皮薄，果瓤
少，水分大，种子少，干燥后体轻。八棱瓜蒌表面具有
八条纵棱或凹沟。RAPD分子标记分析表明，大瓜
萎与八棱瓜蒌亲缘关系最近，在整个聚类分析中，位
于明皮和地瓜蒌之间，分子水平的分析与这两类农
家品种的外观质量相吻合。这说明药材的质量可以
直接受到遗传基因的影响。
3．5地瓜蒌：地瓜萎是山东产区引自河北安国的一
个农家品种，山东原不产。原产地通常采用与小麦轮
种，不搭架，直接种于麦田中，生长期短于山东产区，
即麦收后种植至种麦前采收。由于生长期短，药材通
常不成熟就采收，质量差。引种到山东后多搭架栽培
或种于院墙篱笆旁，生长期增长，山东产区常加工成
瓜蒌仁和瓜蒌皮。果实呈宽纺锤形，两端稍尖，果皮
棕色或棕红色，租糙，凹凸不平，果瓤及种子较多，干
燥后果皮厚，不皱缩，体轻。药农认为质量远不如山
东的仁瓜蒌和牛心瓜蒌。RAPD分子标记结果的聚
类分析表明，地瓜蒌应属于仅次于小光蛋的一个较
初级，较原始的农家栽培品种，亲缘关系与小光蛋和
野瓜蒌最近，而远离仁瓜蒌和牛心瓜篓。
3．6湖北栝楼：湖北栝楼T．hupehensis产于湖北、
湖南以及四川。山东各地有误种，其集中引种地为菏
泽、泰安等，由于本种地下块根生长迅速，产区称其
为“改良栝楼”，误将其作为“天花粉”，种子作为“瓜
蒌仁”，分别称为“改良天花粉”和“改良瓜萎子”。但
二者均有毒，尤其是根，服后有不良反应，不宜药
用口]。本实验也证明湖北栝楼与栝楼的野生种及各
农家品种之间的遗传背景差异极大，两个不同的种
很早即被分开。这表明RAPD分子标记法用于种问
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《 欢迎订阅《中草药》杂志2002年增刊
0 2002年第33卷增刊以“中药现代化”和“中药指纹图谱”为主要内客，收栽论文107篇，共218
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万方数据
山东产瓜蒌不同农家品种的RAPD研究
作者： 孙稚颖， 周凤琴， SUN Zhi-ying， ZHOU Feng-qin
作者单位： 孙稚颖,SUN Zhi-ying(山东中医药大学药学院,山东,济南,250014;山东师范大学生命科学学
院,山东,济南,250014)， 周凤琴,ZHOU Feng-qin(山东中医药大学药学院,山东,济南
,250014)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(3)
被引用次数： 3次

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