全 文 ：·766· 中草芮ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第5期2006年5月
白术药材HPLC色谱指纹图谱研究
于 超1，阳 勇3，刘世尧2，白志川2，张小梅3，王婷婷3
(1．重庆医科大学，重庆400016；2．西南农业大学，重庆400716；3．重庆市中药研究院，重庆400065)
摘 要：目的 应用HPLC法建立酉阳规范化种植白术的指纹图谱，为白术药材的质控提供依据。方法采用
SymmetryC18色谱柱(250mmX4．6mm，5肛m)；以甲醇一水(65％～100％)连续梯度洗脱，体积流量0．8mL／
min；在254nm波长下检测。测定11批药材的色谱图，确立标准指纹图谱。结果白术药材有11个共有峰，多数
峰可以达到较好分离。该分析方法具有很好的精密度、重现性和稳定性，各批次间共有峰的相对保留时间的RSD
均小于1％，相对峰面积符合指纹图谱相关要求。结论建立的指纹图谱检测标准可以作为白术质量评价和品种鉴
别的主要依据之一。
关键词：白术；高效液相色谱；指纹图谱
中图分类号：R282．7 文献标识码：A 文章编号：0253～2670(2006)05—0766一04
FingerprintofRhizomaAtr cty·lodisMacrocephalaebyHPLC
YUCha01，YANGon93，LIUShi—ya02，BAIZhi—chuan2，ZHANGXiao～mei3，WANGTing—tin93
(1．ChongqingUn versityofMedicalSciences，Chongqing400016，China；2．South—WestAgricultureUniversity，
Chongqing400716，China；3．ChongqingAcademyofChineseMateriaMedica，Chongqing400065，China)
Abstract：ObjectiveToestablishthec romatographicfingerprintofRhizomaAtractylodisMacro-
cephalae(RAM)fromG PbaseatY uyangbyHPLCforthequalitycontr01．MethodsWithSymmetry
C18colunm(250mm×4．6mm，5肛m)，gradientelutionwasperformedby obilephasecontainingMeOH-
H20(65％一1000A)．Theflowratewas0．8mL／mina detectionwavelengthwas254nm．Elevenbatch—
asofRAMfromvariousproducingareaswerecomparativelyanalyzedtO stablishafingerprint．Results
ElevenMutualpeakswereselectedinchromatography．Amongtheobtainedfi erprint，themosofthe
detectedp akswereseparatedeffectively．Theaccuracy，repeatability，andstabilityof hismethodwere
satisfied．TheRSDofrelativeretentionmeofmutualpeakswhichexistedina11sampleswalessthan
1％．Ther sultsofpeakareawereinaccordancewiththerequestoffingerprint．ConclusionThesta-
blishedfingerprintcanbeusedforthequalitycontrolandspeciesdentifyingofRAM．
Keywords：RhizomaAtractylodisMacrocephalae(RAM)；HPLC；fingerprint
白术AtractylodesmacrocephalaKoidz．原名
“术”，又名贡术，菊科多年生草本，始载于《神农本草
经》，列为上品，为常用大宗中药材品种，以根茎供药
用，能健脾燥湿，治脾虚食少、腹泻、水肿、胎动不安。
最新的临床研究表明，白术具明显的抗衰老作用，其
应用前景十分广阔口]。野白术产于浙江於潜、昌化、
天目山一带，以於潜所产品质最佳，称为“於术”。现
白术多为栽培，已少有野生，主产浙江、安徽、湖南、
湖北、江西、福建、重庆等地。重庆产白术主要引种于
浙江。白术的主要成分为白术内酯I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ及杜
松酯、棕榈酸、p香树素醋酸酯、丫一谷甾醇、p谷甾醇
及含有较高的挥发油成分。白术有效成分的量因产
地、采收季节、储藏、炮制方法、提取工艺等条件不
同，会发生变化。为了能够有效控制药材质量，根据
其所含化学成分的特性和指纹图谱研究方法[2’3]，通
过方法考察，建立白术药材特征性色谱指纹谱图，为
白术建立稳定、可靠、全面的质量控制方法提供科学
依据。
1仪器与试药
1．1 仪器与试剂：WATERS600E--996高效液相
色谱仪(996PDA检测器，7225i手动进样器，柱温
箱，Millennium32化学工作站)；AW220(岛津)万分
之一电子天平；H66005超声清洗机；电热恒温水浴
锅(北京长源实验设备厂)；MiniQplus超纯水仪
(密里博)。甲醇(色谱醇，默克公司)，氯仿(上海化
学试剂总厂)，石油醚、丙酮(重庆市东方试剂厂)，
收稿日期：2005—07—31
基金项目：重庆市自然科学基金资助项目(7351)
作者简介：于超(1963一)，男，博士，从事中药化学研究。Tel：(023)68485915E—mail：yuchao@cqu．edu．cn
万方数据
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乙醚(上海马陆制药厂)，均为分析醇。
1．2药材：白术药材来源于重庆市酉阳县GAP规
范化种植基地，为《中国药典》品种菊科植物白术
Atractylodesac，．ocephalaKoidz．的干燥根茎(由
赵素云研究员鉴定)。样品编号S1～S11。
2方法与结果
2．1 色谱条件：SymmetryC18色谱柱(250mm×
4．6mm，5ptm)；柱温28cC；甲醇一水(65％～
100％)为流动相，连续梯度洗脱；体积流量0．8
mL／min，检测波长254nm；进样量10肛L。
2．2供试品溶液的制备：取供试品粉碎，过30目
筛，精密称取白术样品细粉约1．0g，置于三角瓶
中，加入石油醚20mL超声处理20min，滤过，残渣
用甲醇洗涤3次，每次加5mL，合并滤液和洗涤
液，减压浓缩至于，用甲醇溶解，置5mL量瓶中至
刻度，取上清液用微孔滤膜(0．45弘m)滤过，滤液
置棕色量瓶中，即得。
2．3 HPLC分析：取样品溶液10弘L，注入高效液
相色谱仪，记录色谱图(图1)和各色谱峰的保留时
间，以面积归一化法计算各色谱峰的相对峰面积
(AR)，各谱图中峰面积最大的11个峰为11强峰。
2．4方法学考察
2．4．1精密度试验：按样品制备方法，随机抽取同
一批白术药材制咨供试液，连续进样5次，测定
HPLC色谱图，选择j1个共有峰进行比较，结果表
明各共有峰相对保留时间RSD为0．18％～
1．85％，各共有峰相对峰面积的RSD为0．33％～
2．5％，表明仪器精密度良好。
2．4．2重现性试验：随机取同一批白术药材，按样
品制备方法平行操作，制备5份白术药材供试品溶
液，测定其HPLC色谱图。结果各共有峰相对保留
时间RSD<1％，各共有峰相对峰面积RSD为
2．1％～3．9％。
2．4．3稳定性试验：取同一批白术药材的供试品溶
液，分别于0、2、4、8h测定HPLC色谱图，对11个
共有色谱峰进行比较。结果各共有峰相对保留时间
RSD<1％，各共有峰的相对峰面积RSD为
1．1％～4．2％，表明样品在8h内稳定性良好。
2．5色谱指纹谱的构建
2．5．1相对保留时间a的计算：选择一个出峰时间
较居中、在各样品中均存在的组分作为参照峰(a一
1)。求出样品所有峰的相对保留时间为：fR。／￡R。，式中
￡ni为各组分的出峰时间，￡R。为参照峰的出峰时间。
2．5．2参照峰的选择：通过色谱图比较，可知各样
品色谱图中2、3、4号峰为强信号峰，选取色谱图中
的第3个强峰(4号峰)为参照峰，计算各峰的相对
保留时间a。
2．5．3a值窗口的设定：计算各样品色谱图中同一
峰位值的a平均值，作为每个色谱峰的标准a值。计
算每个峰位a值的RSD值，所有a值的RSD均小
于1％。所以设定窗口a≤1，同一窗口内的色谱峰认
定为同一a值的色谱峰，予以归并，可信限范围
在±1％。按国家食品药品监督管理局“中药注射剂
指纹图谱研究的技术要求”，研究测定了11批白术
药材的色谱图谱，并制定了以内参比峰为参照物的
标准指纹图谱，见图1，11批药材指纹图谱的相似性
见图2。
I
4(S)
1
I腹一8 L9一々上⋯．．一．一
0．oo 1250 2500 37．49 49．99 6249 74．99
，／rain
图1 白术药材标准色谱指纹图谱
Fig．1FingerprinteakofRAM
0．00 1250 2500 3‘750 5UClU 625U 75．【)U
t|rain
图2 11批白术药材色谱图
Fig．2Fingerprinteakof11batchesofRAM
2．5．4共有峰的标定：记录75min的色谱图，通过
比较各峰的保留时间选择每一个图谱都产生的共有
峰。采用相对保留时间标定共有指纹峰，以图谱中保
留时间为(28土0．14)min(4号峰)的峰为参照物
(s)，将各指纹峰保留时间与同一图谱中参照物的保
留时间比较，其比值为各指纹峰的相对保留时间。计
万方数据
·768· 中草芮ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第5期2006年5月
算11批药材指纹图谱中各指纹峰的相对保留时间
(表1)，标定白术药材的共有峰为11个。11批药材
中各共有峰的a值的RSD均<1％。
2．5．5共有峰的相对面积：据“中药注射剂指纹图
谱研究的技术要求”规定，各共有指纹峰的面积比值
必须相对固定：单峰面积占总峰面积≥20％，其差
值<20％；单峰面积占总峰面积≥10％而<20％，
其差值<25％；单峰面积占总峰面积<10％，面积比
值不作要求，仅需检定相对保留时间。结果只有峰一
2、峰一3单峰面积占总峰面积的百分比>20％，其他
峰均小于lo％，设定第3个强峰(峰一4)为参照峰，
结果符合指纹图谱研究的技术要求。见表2。
表1 自术药材共有峰相对保留时间测定结果
Table1 ResultsofrelativeretentionmeofmutualpeaksonRAM
样品 相对峰面积
编号 峰一l 峰一2 峰一3 峰一4(s) 峰一5 峰一6 峰一7 峰一8 峰一9 峰一10 峰一11
S1 0．29416 5．96805 6．18056 1．0000 0．39263 0．08856 0．57596 0．21720 0．34323WO．13897 0．09536
S2 0．46190 8．37258 5．80258 I．00000 0．43947 0．25490 0．95828 0．25741 0．4077 0．2342 0．25405
S3 0．66670 8．22290 6．44745 1．00000 1．03377 0．92459 1．78048 0．40070 0．60766 0．8723 0．20723
S4 0．43763 7．28l89 4．90367 1．00000 0．75937 0．58549 1．24874 0．69837 0．56032 0．97060 0．49594
S5 0．85204 7．56106 5．68708 1．00000 0．97540 0．43220 0．05107 0．36221 1．31655 1．03I88 0．32274
S6 0．47614 6．52670 4．85404 1．00000 0．33486 0．16856 0．9556t 0．26799 0．51491 0．31576 0．2448
S7 0．80784 8．78201 6．67468 1．0000 1．17225 0．44213 1．04806 0．39806 0．76485 0．3302 0．32867
S8 0．4838 8．26504 6．28802 I．0000 0．4426l 0．42405 9．34431 0．66313 0．79129 0．21292 0．16651
S9 0．51388 8．75371 6．50914 1．00000 0．82929 0．69317 1．67793 0．82981 0．66245 2．23629 0．206Zl
S10 0．19327 5．93791 4．82890 1．00000 0．15427 0．12043 0．】6978 0．10307 0．43239 0．48014 0．19276
S11 0．17954 6．23339 4．64780 1．00000 0．25222 0．09263 0．20083 0．09404 0．2117 0．19041 0．15992
平均0．48786 7．44593 5．71127 1．00000 0．61692 0．38425 1．63737 0．39018 0．6015 0．63760 0．24308
2．5．6非共有峰面积：通过对11批白术药材供试
品的测定，统计各批非共有峰面积比，其结果为非共
有峰面积百分比在5．5％～9．7％，符合指纹谱研究
规定小于lo％的检测要求。见表3。
2．5．7共有峰的相似度计算：选取色谱图中的11
个共有峰，由中药色谱图分析和数据管理软件辅助
自动进行峰匹配，确定11个共有峰。以2号样品色
谱图做模板，利用相关系数法n1和夹角余弦法[5]计
算指纹图谱的相似度，结果见表4。两种计算方法全
图谱相似度均≥93％，这表明所建立指纹图谱的技
术指标稳定，重现性好。
3讨论
表3 II批白术药材非共有峰面积
Table3 Unmutualpe kareaoR11 batchesofRAM
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第5期2006年5月·769·
表4色谱图相似性分析结果(参照模板：s2)
Table4 Resultsofcomparabilityofchromatogram(controltempla e：S2)
从色谱图上比较，虽各批样品成分的量有差异，
但色谱图概貌一致，说明该药材群体成分的一致性
(包括成分种类和相对质量分数的一致性)，且稳定，
制定的指纹图谱可对白术药材组分群体特征的一致
性作出判断。白术指纹图谱有自身化学条码的特征，
是其内在化学成分种类与数量的反映。在白术药材
指纹图谱的共有特征峰中，整体分离度比较好；不同
批次药材指纹图谱概貌也有较好的一致性，能充分
反映白术药材化学成分的特征。
采用996PDA二级管阵列检测器，在分析时进
行全波长紫外扫描，同时得到不同波长下全数据。结
果显示，检测效果受波长影响较大，经比较后表明在
254nm色谱峰形最好，出峰数目适中，各色谱峰相
互之间分离度较好，故检测波长定在254nm。
在供试品溶液制备方法考察中，对提取条件
(溶媒、提取方法)及色谱条件(流动相、流速、进样
量)进行了单因素平行研究。不同溶媒(石油醚、氯
仿、甲醇、50％甲醇)中以石油醚提取物共有峰相
对稳定，绝对峰面积和总峰数均最高。故确定提取溶
剂为石油醚；超声提取较索氏提取、回流等方法操作
方便，提取时间短且效率高，但为了防止溶剂挥发和
有效成分损失，提取时应注意水浴温度不宜过高。
本研究首次将HPLC色谱法运用到自术药材
的鉴定与质量评价中，能更加有效地评价药材化学
成分的多样性与复杂性；通过使用国家药典委员会
2004年出版的中药色谱指纹图谱相似性分析软件
进行相似度评价，为指纹图谱研究成果运用于中药
材生产和市场流通中具体环节的质量检验，提供一
个新的方法。对科研与生产实践的结合，具有重要的
指导意义。
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刺五加的体细胞胚胎发生研究
邢朝斌1，沈海龙2，赵丽娜1，王明艳1，陈正恒1
(1．华北煤炭医学院生物科学系，河北唐山063000；2．东北林业大学林学院，黑龙江哈尔滨150040)
摘要：目的 用不同质量浓度2，4-D和外植体类型对刺五加体细胞胚胎诱导进行研究，为刺五加的资源保护和
遗传工程提供理论依据。方法 以刺五加的萌发3周幼苗和层积处理种子合子胚的胚根、下胚轴和子叶为外植体，
收稿日期：2005—07—01
基金项目：国家“十五”科技攻关子课题(2001BA51080801)
作者简介：邢朝斌(1975一)，男，河北省定州市人，讲师，硕士，主要从事药用植物细胞工程的研究。
Tel：(0315)3725859E—mail：xingzhb@mail．edu．cn
万方数据
白术药材HPLC色谱指纹图谱研究
作者： 于超， 阳勇， 刘世尧， 白志川， 张小梅， 王婷婷， YU Chao， YANG Yong， LIU Shi-
yao， BAI Zhi-chuan， ZHANG Xiao-mei， WANG Ting-ting
作者单位： 于超,YU Chao(重庆医科大学,重庆,400016)， 阳勇,张小梅,王婷婷,YANG Yong,ZHANG
Xiao-mei,WANG Ting-ting(重庆市中药研究院,重庆,400065)， 刘世尧,白志川,LIU Shi-
yao,BAI Zhi-chuan(西南农业大学,重庆,400716)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(5)
被引用次数： 7次

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