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Isolation, purification, and biological activities of ray cartilage glycosaminoglycans

魟鱼软骨多糖的分离纯化及生物活性的研究



全 文 :·1210· 中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月
三羧酸循环是葡萄糖、甘油、脂肪酸及某些氨基
酸彻底氧化分解的共同途径。异柠檬酸脱氢酶3是
三羧酸循环的关键酶,其活性受许多变构剂调节。线
粒体ATP合酶是在细胞氧化磷酸化过程中,利用
横跨线粒体内膜的质子电化学梯度来催化ATP合
成的酶。本研究显示,芍药苷能显著上调异柠檬酸脱
氢酶和ATP合酶在HFCL的表达,促进能量代谢,
改善骨髓基质细胞的功能。
本研究结果表明,芍药苷作用于骨髓基质细胞
多种蛋白质靶点,促进细胞结构蛋白质的合成和蛋
白质分子伴侣的表达,促进HFCL的能量代谢,抑
制HFCL凋亡,间接发挥补血作用。本课题组将在
进一步工作中研究芍药苷作用的量效关系,并对目
标蛋白质进行深入的生物学功能研究,为阐明芍药
苷补血作用的分子机制提供依据。
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鱼工鱼软骨多糖的分离纯化及生物活性的研究
郭斌1,韩冠英2,李智p
(1.中国医科大学基础医学院天然药物研究室,辽宁沈阳 110001;2.锦州医学院,辽宁锦州121001)
摘要:目的研究红鱼软骨多糖(raycartilageglycosaminoglycans,RCG)的提取、分离与纯化方法,并初步探讨
其生物活性。方法采用盐酸胍提取、丙酮分级沉淀、膜超滤、Sephadex凝胶柱色谱分离、纯化获得缸鱼软骨多糖,
由HPLC确定其相对分子质量和质量分数;建立Lewis肺癌小鼠模型,将实验分为生理盐水(Saline)组、不同剂
量(500、250、125mg/kg)红鱼软骨多糖组、环磷酰胺(CTX.60mg/kg)组,观察小鼠肿瘤生长情况,绘制肿瘤生长
曲线,计算原发瘤与肺转移灶数抑瘤率,免疫组织化学染色计数肿瘤组织微血管密度(MVD),采用RT—PCR检测
瘤组织血管内皮生长因子(VEGF)基因表达。结果经HPLC检测,该组分为单一多糖,其质量分数达99%以
上。生物活性检测结果表明,与生理盐水组比较,该多糖各剂量组小鼠的肿瘤生长曲线平缓,原发瘤抑瘤率、肺转移
灶数与生理盐水组比较差异显著(P<0.05、0.01);与生理盐水组比较,红鱼软骨多糖各剂量组MVD显著减少、
VEGFmRNA表达水平显著降低(P移,并可抑制肿瘤的血管形成。
关键词:红鱼软骨多糖;Lewis肺癌;微血管密度(MVD);血管内皮生长因子(VEGF)
中图分类号:R286.91;R979.1文献标识码:A 文章编号:0253—2670(2006)08—1210—05
Isolation,purification,andbiologicalactivitiesofraycartilageglycosaminoglycans
GUOBinl,HANGuan—yin92,LIZhil
(1.DepartmentofEthnopharmacology,BasicMedicalCo lege,ChinaMedicalUniversity,Shenyang110001,China;
2.JinzhouMedicalCo lege,Jinzhou121001,China)
Abstract:ObjectiveToexplorethmethodsfextraction,isolation,purification,andbiolog lac—
tivitiesofraycartilageglycosaminoglycans(RCG).MethodsRCGwaspurifiedbyguanidinehydrochlo—
ridextraction,acetonefractio alpr cipitation,ultrafiltration,andSephadexcolumnchromatography.The
purityandmolecularmassofRCGweremeasuredbymeansofHPLC.ThemodelofmousewithLewis
收稿日期:2006—01—05
基金项目:辽宁省教育厅基金资助项目(202173371)
作者简介;郭斌(1969一),男,辽宁锦州人,副主任药师,博士,研究方向为天然药物开发。
Tel:(0416)4140066E—mail:jyguobin@126.corn
*通讯作者李智Tel:(024)23256666—5319E—mail:lizhijia@263.net
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月·1211·
lungcarcinomawas de,theexperimentalmicewererandomlydividedintonormalsa inegroup,RCG
(500,250,and125mg/kg)groups,andCTX(60mg/kg)group.Tumorgrowths atesofmicewereob—
served,tumorgrowthcurvewasdescribed,inhibitoryratesofprimarytumorandnumberoflungmetasta—
sisfocusweremeasured;microvesseldensity(MVD)wasquantit tedbyimmunohistochemistryusing
monoclonalantibodiesofCD31;theexpressionofvascularendothelialgrowthfactor(VEGF)mRNAwas
determinedwithRT—PCR.ResultsUsingHPLC,asingleglycosaminoglycanswithmolecularmass9.7×
104wascollectedanditspurityexceededninty—ninepercent.TumorgrowthcurvesinRCGgroupswere
smoothcomparedwithsalinegroup.Thereweresignificantdifferencesofinhibitoryratesofprimarytu—
mor,numberoflungmetastasisfocusandMVDbetweenRCGgroupsandsalinegroup.VEGFmRNAex—
pressionlevelsinRCGgroupswerereducedsignificantlyomparedwithsalinegroup.ConclusionRCG
couldeffectivelynhibitthegrowthandmetastasisofprimaryLewislungcarcinomainC57BL/6mouseand
angiogenesis.
Keywords:raycartilageglycosaminoglycans(RCG);Lewislungcarcinoma;microvesseldensity
(MVD);vascularendothelialgrowthfactor(VEGF)
红鱼为脊椎动物门,软骨鱼纲,板鳃亚纲,鳐目
(或红鱼目),虹科(Dasyatidae),属暖温类底层鱼。
据《本草纲目》记载“状如盘及荷叶,大者围七八尺,
无足无鳞,背青腹白,口在腹下,目在额上,尾长有
节,蜇人甚毒,尾有毒,主治齿痛”。红鱼内骨骼均为
软骨,软骨是动物体内一种高度特化的致密结缔组
织,主要由软骨细胞和含有胶原纤维及大量蛋白多
糖的细胞外基质组成。蛋白多糖是一类由一个核心
蛋白和与其共价相连的糖胺聚糖构成的复杂的高分
子化合物。以往的研究表明,蛋白多糖在细胞黏附、
细胞间相互交流、信息传递、调节细胞增殖与分化等
方面扮演重要角色。本研究以红鱼软骨为原料,对存
在于红鱼软骨中的多糖进行提取、分离与纯化,并初
步探讨其生物学活性。
1材料与方法
1.1材料:缸鱼购自锦州市水产公司,经锦州海洋
药业研究开发中心贾玉海教授鉴定为赤红Dasyatis
akajei(MUlleretHenle)。C57BL/6J小鼠,清洁级,
体重18~22g,中国医学科学院实验动物研究所提
供,动物合格证号SCXK(京)2004—0001。Lewis肺
癌瘤株,中国医学科学院药物研究所提供。标准相对
分子质量DextranT系列葡聚糖标准品,Pharmacia
公司;三氟乙酸、DMSO,Fluka公司;CD31、血管内
皮生长因子(VEGF)单克隆抗体及免疫组化试剂
盒,北京中杉金桥生物技术服务有限公司;环磷酰胺
(CTX),江苏恒瑞医药公司;Trizol试剂、引物,上海
生物工程技术服务有限公司;RT—PCR试剂盒,宝
生物工程(大连)有限公司;其他试剂均为国产分析
纯。GL一21M型高速冷冻离心机,长沙天创仪器制
造有限公司;FS010K10C型超滤系统,美国Pall公
司;台式冷冻干燥机,美国Kinetics公司;一86℃
超低温冰箱,日本三洋;相对分子质量50000、1000
滤膜,美国Pall公司;SephadexG一75,Pharmacia
公司;高效液相系统,Angilant公司,高效液相泵为
BIO—RADl330型,柱为ShodexKS一805。
1.2方法
1.2.1红鱼软骨多糖的提取、分离与纯化:取干燥
缸鱼软骨,加入2mol/L盐酸胍,0.02mol/LMES
(2一N一吗啡啉磺酸)pH6.0的溶液,于室温下搅拌
提取24h,4000r/min离心分离,上清液用相对分
子质量1000的滤膜脱盐,再用相对分子质量
50000滤膜超滤,取膜上部分滤液冷冻干燥,粉末
溶于双蒸水,置相对分子质量3500透析膜内,对水
充分透析,上清液丙酮分级沉淀,依次用95%乙
醇、无水乙醇、丙酮洗涤脱水,低温烘干得白色粉末,
加适量水溶解,滴加10%三氯乙酸,有少量沉淀析
出,4000r/min离心15min,上清液对水透析24h
后,经SephadexG一75凝胶柱色谱分离,蒸馏水洗
脱,体积流量为0.5mL/min。冷冻干燥即得。
1.2.2红鱼软骨多糖质量分数和相对分子质量测
定:将虹鱼软骨多糖及各种标准相对分子质量Dex—
tr nT系列葡聚糖标准品分别称量并溶解于双蒸
水中,质量浓度为1mg/mL,0.45弘m微孔滤膜滤
过,10000r/min离心10min,上清液进样量为20
肛L,流动相为水,体积流量0.8mL/min,示差检测
器检测,柱温40℃。记录样品及各种标准相对分子
质量葡聚糖色谱曲线和保留时间。以洗脱体积
[(Ve—Vo)/(Vi—Vo),Ve表示流经体积,Vo表示
外水体积,Ⅵ表示内水体积]的值为横坐标,以相
对分子质量的对数为纵坐标,绘制标准曲线。根据标
万方数据
·1212· 中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月
准曲线计算缸鱼软骨多糖相对分子质量,根据峰的
对称性判断质量分数。
1.2.3鲤鱼软骨多糖对小鼠Lewis肺癌生长的影
响:取接种Lewis肺癌10~14d的C57BL/6J荷瘤
小鼠,脱颈椎处死,无菌条件下取瘤组织,按肿瘤质
量(g)与生理盐水(mL)1:3制备匀浆液,调整细
胞数l×107/mL备用,另取C57BL/6J小鼠(18~
20g)40只,随机分为5组:生理盐水(90mg/kg)
组、缸鱼软骨多糖高、中、低剂量(500、250、125rag/
kg)组、环磷酰胺(CTX,60mg/kg)组。各组小鼠于
右腋皮下接种匀浆液,每只0.2mL。各组接种后第2
天开始ip给药,环磷酰胺组每周1次,其他各组每日
1次,连续21d。接种后每3天测量1次荷瘤小鼠肿
瘤最长径和最短径,计算肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲
线。第2l天脱颈椎处死各组小鼠,取皮下肿块称质
量,计算肿瘤生长抑制率(抑瘤率)。完整取出双肺,并
在解剖显微镜下计数双肺形成的转移瘤灶数目。
肿瘤体积=短径2×长径/2
抑瘤率一(生理盐水组平均瘤质量一治疗组平均瘤质
量)/生理盐水组平均瘤质量×100%
1.2.4缸鱼软骨多糖对Lewis肺癌小鼠瘤组织微
血管密度(MVD)的影响:取部分肿瘤组织,10%
中性甲醛固定,常规脱水,石蜡包埋后连续切片,
CD31抗体为I抗,阴性对照用磷酸盐缓冲液
(PBS)代替I抗,按照试剂盒说明书进行SABC法
免疫组化染色。CD31阳性内皮细胞被染成棕黄色,
计数时以血管密度区为准,避免硬化区和坏死区,切
片中任何与周围组织明确区分的棕染内皮细胞及细
胞团均按独立的微血管分别计数,是否有管腔、红细
胞不作为计数血管标志。显微镜下计数6个视野内
肿瘤微血管数目,以平均每高倍镜(×200)下视野微
血管个数表示MVDnl结果。
1.2.5红鱼软骨多糖对Lewis肺癌小鼠瘤组织
VEGF表达的影响:采用Trizol一步法提取瘤组织
总RNA,提取的RNA经紫外分光光度计测量260
nm和280nm吸光度(A)值,由260nmA值计算
出RNA浓度。按照宝生物工程(大连)有限公司
RT—PCR试剂盒(AMV)说明进行PCR扩增。RT—
PCRVEGF引物为:5,-AGACAATGGGAT—
GAAAGG一3
7
(sense),5’一AGATGAGGAAGG—
GTAAGC一37(antisense),扩增片段大小为554bp;
a-actin引物为:57一CCCATCTACGAGGGCTAT一3’
(sense),57一TGTCACGCACGATTTCC一3
7
(anti—
sense),扩增片段大小为145bp。反转录反应参数设
置如下:42℃、30min,99oC、5min;然后进行30
个周期的PCR扩增反应,PCR扩增反应参数设置
如下:94℃、2min预变性1个循环,每个周期为94
℃、变性30S,55‘C退火30S,72℃延伸2min。取
PCR产物置于2%琼脂糖凝胶中电泳,溴化乙啶染
色,电泳条带经电泳图像分析扫描仪扫描,得到
VEGF与p-actin条带的各自峰面积积分值,以
VEGF与p-aetin比值作为VEGF表达参数,对
VEGFPCR产物相对定量。
1.2.6统计学分析:采用SPSS统计软件包,多组
样本均数比较采用方差分析(AVONA)。
2结果
2.1 红鱼软骨多糖质量分数和相对分子质量:以洗
脱体积(Ve—Vo)/(Vi—Vo)的值为横坐标,以相
对分子质量的对数为纵坐标,得标准曲线,曲线方程
Y一一3.5349X+6.3794,r一0.9987。该组分在
HPLC中呈现单一对称峰,表明其为均一多糖组分。
从峰面积计算其质量分数达99%以上。由其洗脱
时间16.40min,从标准曲线上求得其相对分子质
量为9.7×104。该多糖在水中极易溶解,高浓度时
为黏稠胶体,其0.5%水溶液测得比旋光度
[a]一+51.8。。
2.2红鱼软骨多糖对荷Lewis肺癌小鼠的影响:
用药21d后,红鱼软骨多糖各剂量组瘤质量均显著
低于生理盐水组(P小鼠原发瘤抑制率分别为43.36%、26.34%、
15.10%。红鱼软骨多糖对荷Lewis肺癌肺转移的
影响实验结果表明,生理盐水组肺转移灶形成大而
且多,有的甚至融合成大的融合灶,红鱼软骨多糖各
剂量组肺转移灶小而少,差异非常显著(P结果见表1。从各组移植瘤生长曲线来看,生理盐水
组生长曲线陡直,虹鱼软骨多糖各剂量组生长曲线
位于生理盐水组下方,且高、中剂量红鱼软骨多糖组
曲线平缓,结果见图1。表明红鱼软骨多糖对小鼠
Lewis肺癌生长和转移具有明显的抑制作用。
2。3 虹鱼软骨多糖对荷Lewis肺癌小鼠瘤组织
MVD的影响:镜下结果和统计分析表明,与生理盐
水组比较,缸鱼软骨多糖各剂量组Lewis肺癌瘤组
织MVD明显减小,差异非常显著(P见表2。说明红鱼软骨多糖可抑制Lewis肺癌原发
瘤组织微血管形成。
2.4 鲤鱼软骨多糖对Lewis肺癌小鼠瘤组织
VEGFmRNA表达的影响:RNA经紫外分光光度
计测定260nm和280ElmA值的比值均为1.8~
万方数据
中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月·1213·
表1 虹鱼软骨多糖对荷Lewis肺癌小鼠瘤质量及
肺转移的影响(x±s,聆一8)
Table1 EffectofRCGonweightof umorandhum—
bersofmetastasisfocusinmicewithLewis
lungcarcinoma(x±s,n一8)
组别 剂量/(rag·kg-1)瘤质量/g 抑瘤率/% 肺转移灶/个
与生理盐水组比较:’尸<0.05一P。P§




—一◆一生理盐水
+自I鱼软骨多糖500mg·蚝一
十鱼工鱼软骨多糖250mg·kg一
+鱼工鱼软骨多糖125mg-kg一
—卜CTX60mg.kg一·么
9 12 15 18 Zl
f,d
图1刍工鱼软骨多糖对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长的影响
Fig.1EffectofRCGongrowthofLewislung
carcinomainmice
表2刍工鱼软骨多糖对荷Lewis肺癌小鼠瘤组织MVD和
VEGFmRNA表达的影响。士s)
Table2 EffectofRCGonMVDandVEGFmRNA
expressionintumortissueofmicewith
Lewislungcarcinoma(x±s)
剂量/ MVD VEGFmRNA表达
粤别 (mg.kg1) (丹一6) (vEGF/[3咀ctin,”一8)
与生理盐水组比较:一Pd0.01
。。P2.0。与生理盐水组比较,红鱼软骨多糖各剂量组荧
光强度逐渐降低。结果见图2。各用药组VEGF灰
度与B—actin内参灰度比值较生理盐水组明显减少,
差异显著(尸糖对Lewis肺癌小鼠瘤组织VEGFmRNA表达具
有抑制作用。
3讨论
血管生成(angiogenesis)与肿瘤的生长和转移
关系密切,以肿瘤血管为靶点抗血管生成是目前肿
M—Marker1一CTX2一生理盐水
3~5一红鱼软骨多糖(125、250、500mg/kg)
M—Marker1一CTX2-normalsaline
3—5-RCG(125,250,and500mg/kg)
图2刍工鱼软骨多糖对Lewis肺癌小鼠瘤组织VEGF
mRNA表达的影响
Fig.2EffectofRCGonVEGFmRNAexpressionin
tumortissueofmicewithLewislungcarcinoma
瘤治疗研究领域的热点课题[2]。在胚胎发育时期生
物个体软骨中含有血管,而在个体出生后软骨中血
管消失,并仍可抵御新生血管入侵,推测软骨组织中
可能含有某种物质能抑制新生血管生成。1983年,
Lee和Langer首先发表了鲨鱼软骨含有抗肿瘤血
管增生成分的研究论文[3],开创了软骨抗肿瘤研究
的先河。
本实验从红鱼软骨提取多糖成分,经高效液相
色谱法测定其为相对分子质量9.7×104的单一多
糖。选择Lewis肺癌作为研究模型,是因为Lewis
肺癌为自发性肺内未分化上皮样癌,其移植后的增
殖、侵袭、转移基本类似于人类肿瘤从生长到移植瘤
形成的全部过程。生物活性研究结果表明,应用红鱼
软骨多糖可使荷Lewis肺癌的C57BL/6J小鼠肿瘤
体积生长曲线平缓,原发瘤抑瘤率增加,肿瘤肺转移
灶减少,且具有剂量依赖性。采用免疫组织化学方法
检测肿瘤MVD,定量肿瘤血管,能反映肿瘤血管生
成情况,且可预测肿瘤转移、复发和预后[4]。红鱼软
骨多糖的各剂量组MVD均低于生理盐水组,表明
红鱼软骨多糖在一定程度上能抑制Lewis肺癌的
微血管形成。
VEGF是目前发现的最重要的促血管生成因
子,能增加微血管的通透性,促进不同来源的内皮细
胞分裂、增殖、迁移和血管构建。VEGF在包括肺癌
在内的多种肿瘤中有较高表达,在肿瘤发生、转移过
程中发挥重要作用,可作为肿瘤的一个独立可靠的
预后因素。本研究表明,红鱼软骨多糖在基因水平上
抑制了肿瘤组织VEGF表达,抑制了肿瘤血管形
万方数据
·1214· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月
成,进而抑制了肿瘤的生长和转移。
现代医学认为,肿瘤的侵袭与转移是一个多因
素参与、多步骤的复杂过程。抗血管生成仅是刍工鱼软
骨多糖抑制肿瘤生长和转移的机制之一,本课题组
将进一步筛选对红鱼软骨多糖敏感瘤株,并深入探
讨其抗肿瘤作用机制。
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樟柳碱在Beagle犬血清中的药动学研究
黄 萤1’2,只德广2,徐为人2,刘昌孝2
(1.。中国医学科学院中国协和医科大学放射医学研究所,天津300192;2.天津药物研究院
天津药代动力学与药效动力学省部共建国家重点实验室,天津300193)
摘 要:目的 建立高效液相色谱一质谱联用(LC—MS)测定Beagle犬血清中樟柳碱的分析方法。方法采用沉淀
及萃取相结合的方法提取样品,LC—MS分析方法,选择负离子测定模式,测定Beagle犬单剂量iv樟柳碱0.2rag/
kg后樟柳碱的血药浓度。结果该方法线性、回收率和重现性良好,批内、批间变异系数均在10%以内,样品提取
后24h内稳定,灵敏度可达到1ng/mL,出峰时间为3.1min,C⋯为(145.07±32.63)ng/mL,t一为(0.04±
0.06)h,AUC(o⋯为(361.10士26.01)mg·h/mL,CL为(5.56±0.41)L/h,ti/2为(1.67±0.34)h,Vd为
(13.39±3.05)L。结论此方法简便、快速,专属性强,灵敏度高,能够准确测定血中氢溴酸樟柳碱,有实际意义。
关键词:樟柳碱;高效液相色谱一质谱联用;药动学;血药浓度
中图分类号:R285.61 文献标识码:A 文章编号:0253—2670(2006)08—1214一04
PharmaeokinetiesofanisodineinBeagledogsserumbyLC—MS
HUANGYin91”,ZHIDe—guan92,XUWei—ren2,LIUChang—xia02
(1.InstituteofRadiationMedicine,ChineseAcademyofMedicalScienceandPekingUnionMedicalCo lege,Tianjin
300192,China;2.TianjinStateK yLaboratoryofPharmacokineticsandPharmacodynamics,
TianjinInstituteofPharmaceuticalResearch,Tianjin300193,China)
Keywords:anisodine;LC—MS;pharmacokinetics;drugconcentration
莨菪类药物樟柳碱(anisodine)是从茄科植物
山莨菪Anisodustanguticus(Maxim.)Pascher根
中提取得到的一种生物碱,为M胆碱受体阻断剂,
其化学结构和东莨菪碱相似,药理作用类似于阿托
品类化合物,具有较强的中枢和外周抗胆碱活性,也
有解除血管痉挛,改善微循环,解痉、平喘、抑制唾液
分泌,散瞳,对抗有机磷中毒等作用,其毒性比同类
药物山莨菪碱、阿托品、山莨菪低[1]。目前临床上主
要用氢溴酸樟柳碱治疗眼部缺血性疾病、视神经病
变及全身性血管病的眼底病变[2~4]。由于樟柳碱的
剂量低,导致用药后血药浓度极低,目前已报道的樟
柳碱的分析方法有高效液相色谱法[5’6]、高效毛细管
收稿日期:2006—01—25
电泳法、导数光谱法等口墙],但这些方法均无法准确
地对其进行检测。本实验以LC—MS研究了Beagle
犬血清中樟柳碱的测定方法,同时研究了Beagle犬
iv后的药动学过程。
1材料
1.1试剂:甲醇,南开大学精益教育技术装备公司;
乙腈,天津市康科德科技有限公司;去离子水,天津
半导体研究所;三氯乙酸(TCA),如皋市化学试剂
厂;三乙胺,天津市化学试剂批发公司产品;生理盐
水,大冢制药有限公司。
1.2 试验药品:氢溴酸樟柳碱(以下简称樟柳碱)
由北京紫竹药业有限公司提供;样品用前以生理盐
万方数据
魟鱼软骨多糖的分离纯化及生物活性的研究
作者: 郭斌, 韩冠英, 李智, GUO Bin, HAN Guan-ying, LI Zhi
作者单位: 郭斌,李智,GUO Bin,LI Zhi(中国医科大学基础医学院,天然药物研究室,辽宁,沈阳,110001)
, 韩冠英,HAN Guan-ying(锦州医学院,辽宁,锦州,121001)
刊名: 中草药
英文刊名: CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年,卷(期): 2006,37(8)
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1. 齐月宾.王毅.鄂晓强.纪青.杨国夫 不同手术方式对关节软骨影响的实验研究[期刊论文]-中国矫形外科杂志
2006,14(16)
2. 刘葳.于源华.毛亚杰.孟令杰.刘宏亮.LIU Wei.YU Yuanhu.MAO Yajie.MENG Lingjie.LIU Hongliang 黄绿蜜环
菌多糖的分离纯化与组成结构分析[期刊论文]-长春理工大学学报(自然科学版)2007,30(2)
3. 窦茜茜.凌沛学.王洪权.DOU Xi-xi.LING Pei-xue.WANG Hong-quan 桑黄子实体两种新多糖的分离纯化与结构研
究[期刊论文]-食品与药品2009,11(3)
4. 方一泓.余萍.李薇.户勋.FANG Yi-hong.YU Ping.LI Wei.LU Xun 茶树菇子实体多糖的分离纯化和免疫活性研究
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5. 李霞.田文敏.黄明.陈珊.张丽萍.LI Xia.TIAN Wen-min.HUANG Ming.CHEN Shan.ZHANG Li-ping 黑盖木层孔菌
发酵液多糖的分离纯化及活性研究[期刊论文]-中国生物工程杂志2007,27(4)
6. 焦连庆.于敏.焦莹.刘大有.JIAO Lian-qing.YU min.JIAO Ying.LIU Da-you 树舌多糖的分离纯化、分子量分布
及单糖组成研究[期刊论文]-特产研究2009,31(4)
7. 窦茜茜.凌沛学.王洪权.DOU Xi-xi.LING Pei-xue.WANG Hong-quan 桑黄子实体两种新多糖的分离纯化与结构研
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8. 田莹.江波.张涛.TIAN Ying.JIANG Bo.ZHANG Tao 老鼠簕多糖的分离纯化及结构性质的研究[期刊论文]-食品科
学2008,29(4)

引证文献(3条)
1.曹见敏.张蕾.郭斌 魟鱼软骨多糖眼用纳米乳的质量评价[期刊论文]-山东大学学报(医学版) 2010(5)
2.郭斌.申洪波.翟铁红.李智 魟鱼软骨多糖对人脐静脉内皮细胞形成新生血管的影响[期刊论文]-中国新药杂志
2008(7)
3.王洪建.郭斌 魟鱼软骨多糖的聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴别[期刊论文]-安徽农业科学 2011(8)


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