全 文 ：·202· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第2期2006年2月
表2不同增溶剂对大蒜油水溶液中大蒜素稳定性的影响
Table2 Effectsofvarioussolubiliersonstability
ofallicinofgarlicoilwatersolution
结果表明，大蒜油聚山梨酯一80水溶液中的大蒜素
对热和光极不稳定，以HP—pCD作为增溶剂虽具有
较好的稳定作用，但仍无法满足制成注射剂的标准。
3讨论
大蒜素为大蒜油的主要有效成分之一，且量较
高，故本研究以大蒜素作为大蒜油的主要指标性成
分。在本实验色谱条件下，大蒜素与大蒜油中的其他
色谱峰及内标萘的色谱峰分离完全，峰形良好，采用
气相色谱法测定大蒜素，方法简便、快速、准确，可作
为大蒜油及其水溶液中大蒜素的定量测定方法。
大蒜油中的大蒜素在水中的溶解度很低，tLCD
对其的增溶作用较低，而HP—pCD对大蒜素具有显
著的增溶作用，并且随着HP—pCD质量浓度的增
加，大蒜素的溶解度呈线性增加，1％HP一13-CD可使
大蒜素在水中的溶解度增大12．8倍，50％HP—p
CD则可增加806倍，用HP—pCD作为增溶剂的大
蒜油水溶液澄明度良好。
大蒜油中的大蒜素在水中极不稳定，在偏酸特
别是在偏碱条件下，其分解速度显著加快，经测定其
最适pH值约为5。水溶性抗氧剂的加入不仅不会提
高大蒜素的稳定性反而加速其分解，充氮虽有增加
大蒜素稳定性的作用，但影响不显著。在100℃灭菌
条件下，大蒜油HP—pCD包合物水溶液中大蒜素于
30min、45min，分别降低约18％、22％。大蒜素对
酸、碱、热、光均不稳定，与以聚山梨酯一80为增溶剂
的大蒜油水溶液相比，HP一3-CD虽可显著提高大蒜
素的稳定性，但仍无法满足制成注射剂的标准。故应
考虑制成粉针剂且避光冷藏为宜。
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大豆总异黄酮HPLC指纹图谱研究
石 荣，王少云。，姜维林，聂 磊，侯 准
(山东大学药学院，山东济南250012)
摘要：目的建立不同品种大豆植物药材异黄酮类成分的HPLC指纹图谱，为科学评价大豆品种内在质量提供
参考。方法采用HPLC法测定了25个不同品种大豆的异黄酮类提取物，并用聚类分析和相似度计算软件进行数
据分析。色谱条件：C，。柱(250miD．×4．6mm，5pm)，流动相为甲醇一水(冰醋酸调pH为3．2)梯度洗脱，体积流量为
0．6mL／min，检测波长为261am，柱温为室温。测定了25个不同品种大豆，运用软件进行聚类分析及相似性分析。
结果该方法重现性好，不同品种大豆提取的异黄酮类成分的色谱指纹图谱有一定的差异。结论 色谱指纹图谱
分析方法能够全面反映出不同品种大豆异黄酮化学成分间的差异，为大豆品种内在质量控制提供参考。
关奠词：大豆；异黄酮；指纹图谱}高效液相色谱
中图分类号：R286．02 文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2006)02—0202一04
收稿日期：2005—04—11
．
●
作者简介；石荣(1979一)，女，山西省翼城人，硕士，2002年毕业于山西医科大学药学专业，现工作于上海中医药大学科技实验中心，
主要从事中药质量控制的研究。
*通讯作者 王少云Tel：(0531)8382010E—mail：shaoyunw@sdu．edu．en
万方数据
中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第2期2006年2月·203·
FingerprintsofsoybeantotalisoflavonebyHPLC
SHIRong，WANGShao—yun，JIANGWei—lin，NIELei，HOUZhun
(CollegeofPharmacy，ShandongUniversity，Ji7nan250012，China)
Abstract：ObjectiveTostudytheHPLCfingerprintsof soflavonesfromdifferentm dicinalplantsof
G．／T／axandestablishasensitiveandspecificmethodf rcontrollingthequalityofthesoybeanisoflavone．
MethodsThegradientelutionm dewasappliednchromatographicseparation．AC18column(250mm×
4．6mm，5弘m)wasusedwiththemobilephase：icaaceticacidwatersolution(pHvalue3．2)一methanol，
flowrate：0．6mL／min，detectingwavelength：261nm，andthecolumntemperature：roomt mperature．
All25samplescollectedfromifferentspeciesw redetermined．Theclusteringanalysisandthesoftware
ofsimilarityanalysiswereappliedforatumanalysis．ResultsThismethodhadagoodrepeatabilityand
reproducibility．Theratioofpeaks
7
areafromdistinctsamplesw redifferent．ConclusionThemethod
canshowthedifferenceofchemicalcompositionsam gspeciescompletelyandcanbeusedasaquality
controlmethodf rsoybean．
Keywords：Glycinem口zL．Merr．(soybean)；isoflavone；fingerprints；HPLC
大豆异黄酮为豆科植物大豆Glycinemax(L．)
Merr．(PhaseolusmaxL．)的提取物。近年来国内
外研究表明，大豆异黄酮有预防癌症、防止骨质疏
松、防止心血管疾病、抗炎、抗菌、抗衰老、抗氧化以
及防止酒精中毒等生理活性[1]。大豆中异黄酮类化
合物有14种瞳’3]。本实验采用HPLC法研究了不同
品种大豆提取物中异黄酮类成分的指纹图谱，用指
标成分染料木素作内参比，分析了23个色谱峰，对
不同品种大豆进行了比较研究，为大豆品种的内在
质量控制提供了参考。
1仪器与试剂
岛津LC一10AT高效液相色谱仪，SPD—MIOA
二极管阵列检测器，CLASS--VP色谱工作站。
PHS--3C型精密pH计。甲醇为色谱纯，冰醋酸为
分析纯，水为纯水。染料木素对照品(Sigma公司，质
量分数>98％)，不同品种的大豆由山东省农业科学
院大豆室提供，见表1。
2方法与结果
表1大豆相似度分析结果
Table1 SamplesandimilarityofG．max
编号 样品品种 相似度 编号 样品品种 相似度 编号 样品品种 相似度
1 鲁豆10号0．90010 鲁98—8 0．943 19 鲁6号0．913
2 鲁豆9号0。902 11 平顶黄0．939 20 93127—4 0．930
3 齐毛豆0．942 12 跃进10号0．93521 东解10号0．923
4 齐黄29号0．92813 台75 0．945 22 滨职豆1号0．949
5 黄苦豆0．930 14 汾61 0．928 23 齐黄1号0．938
6 秦豆9号0．94915 淮豆6号0．940 24 冀豆12号0．947
7 南展1号0．92516 台292 0．936 25 中黄24号0．927
8 齐黄27号0．94317 郑9528—8 0．946
9 齐黄31号0．93618 山宁10号0．920
2．1 色谱条件：C18柱(250mm×4．6mm，5弘m)；
流动相为甲醇一水(冰醋酸调pH3．2)，梯度洗脱：
o～5min甲醇为10％，5～20rain甲醇上升到
37％，20～37rain甲醇维持37％，37～45min甲醇
上升到54％，45～75min甲醇上升到80％，75～80
rain甲醇维持80％；体积流量：0．6mL／min；检测波
长：261nm；柱温：室温；进样量：20pL。
2．2参照物溶液的制备：精密称取染料木素对照品
适量，用流动相溶解，制成10牡g／mL的参照物溶液。
2．3供试液的制备：称取粉碎大豆(过40目筛)约
5．0g，用石油醚脱脂2次(料液比1：2)，滤过，弃去
滤液，将脱脂大豆粉置锥形瓶中，用70％乙醇15
mL，超声提取3次，每次10min，滤过，合并滤液，用
95％乙醇定容至50mL。精密量取提取液3mL置
10mL量瓶中，用流动相稀释定容，过0．45弘m滤
膜，取续滤液20弘L进样。
2．4测定方法：取参照物和供试品溶液各20弘L，注
入高效液相色谱仪，记录色谱图。指纹图谱见图l。
2．5方法学考察
2．5．1精密度试验；取4号样品制备供试品溶液，
连续进样5次，记录指纹图谱。结果表明，各色谱峰
的相对保留时间和其相对峰面积比值RSD为
0．8％～2．3％，符合指纹图谱要求H]。
2．5．2重现性试验：取4号样品5份，制备供试品
万方数据
中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第2期2006年2月
0 ll 22 33 44 55 66
，／mill
图1大豆样品(台292)指纹图谱
Fig．1FingerprintofG．max(tai292)
溶液，分别进样，记录色谱图。结果表明，各色谱峰的
相对保留时间和其相对峰面积比值RSD为1．1％～
2．9％，符合指纹图谱要求m。
2．5．3稳定性实验：取供试品溶液(4号样品)，分
别在0、2、4、8、12、24h进行检测，记录色谱图。结果
表明，各色谱峰的相对保留时间和其相对峰面积比
值RSD为1．4oA～2．8％，符合指纹图谱要求[4]。
2．6大豆异黄酮的指纹图谱：测定了25个不同品
种大豆，可得到23个色谱峰。色谱图见图2。其中，
以大豆异黄酮主要活性成分之一染料木素(第23号
峰、tR一66．435rain)作为内参比峰。
2．7数据处理
2．7．1系统聚类分析：系统聚类分析是一种无管
图2不同品种大豆异黄酮样品色谱指纹图谱
Fig·2FingerprintofsoybeanisoflavonesfromdifferentspeciesofG．max
理、无指导的模式识别法，可依据所测样品的数据，
对样品进行分类。本实验以25个不同品种大豆提取
物中异黄酮为对象，进行指纹图谱研究，获得包括染
料木素在内的23个色谱峰，将各色谱峰相对于参照
物染料木素的峰面积量化，得到5×23阶原始数据
矩阵，运用SPSS11．0软件对其进行系统聚类分析，
采用类闯平均链锁法(between—groupslinkage)，利
用相关系数(pearsoncorrelation)测量技术，样品聚
类结果见图3。
聚类结果显示，1、2号样品归为一类(Ⅲ类)，4、
7、14、18、19、21、25号样品聚为一类(Ⅱ类)，其他16
种样品聚为一类(I类)。表明：4、7、14、18、19、21、25
号样品化学成分间的差异相对较小，1、2号样品较
为相似，其他16种样品化学成分之间差异较小。
2．7．2相似度分析：指纹图谱反映的是样品整体的
152498231710162012513611322
I类 II类 Ⅲ类
图3大豆样品聚类谱系圈
Fig·3Clusteringanalysisofsoybeanisoflavones
特征，相似度可以定量的描述指纹图谱。本实验根据
聚类分析结果，以I类16种样品的色谱指纹图谱建
立共有模式(共有模式图见图2中S26)，利用中国
药典委员会推荐使用的“中药色谱指纹图谱相似度
晒讲瞄泣蚴誊|啪ⅢⅢi|iⅢⅢm呲⋯Ⅲ
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第2期2006年2月·205·
评价软件”计算各样本与共有模式指纹图谱的相似
度，结果见表1。
表1显示，I类样品与共有模式的相似度值大
于0．93，Ⅱ类的相似度值在0．93～0．91，Ⅲ类样品
的相似度值小于0．91。聚类分析和相似度软件分析
结论一致。
3讨论
3．1文献报道染料木素最大吸收波长位于261nm
处[5]，异黄酮类化合物的最大吸收在245～270
nm[6]，本实验采用二极阵列管检测器(PAD)提取了
245～270nm的色谱图，结果表明，在261nm处峰
数目较多，多数峰响应较大。因此，选择261nm作
为检测波长。
3．2 在实验过程中比较了甲醇一水(H。PO。、HAC
调节不同pH)、甲醇一乙腈一水(HAC调节不同pH)、
甲醇一SDS一磷酸盐缓冲液(调节不同pH)、乙腈一
SDS一磷酸盐缓冲液(调节不同pH)。结果表明，以甲
醇一水(冰醋酸调pH3．2)梯度洗脱系统为最佳，各
色谱峰分离度较好，保留时间适中。
3．3色谱指纹图谱是通过比较各样本间色谱图的
差异来反映样品化学成分间的差异，不同品种大豆
中总异黄酮类成分的指纹图谱相似，各共有峰都存
在，但峰面积及相对峰面积却有差异。因此可通过大
豆异黄酮HPLC指纹图谱反映不同品种大豆内在
质量的差别。
3．4检验中药样品的指纹图谱是否符合标准应有
指纹图谱的标准参照系，人为选择一张指纹图谱作
为参照系，会因选择标准的不确定性而变得难以进
行。本实验采用“中药色谱指纹图谱相似度评价软
件”建立了大豆异黄酮的共有模式，使各样品指纹图
谱之问的整体相似性达到最大化。
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微量热法对不同生长年份黄连品质的评价
代春美1’2，肖小河¨，王 迪2，孙玉琦1，金城1，樊冬丽3，赵艳玲1，刘义4，赵祥军1
(1．鳃放军302医院。北京100039；2。锦州医学院，辽宁锦州121001I3．中国医学科学院药用植物研究所，
北京 100094；4．武汉大学化学与分子科学学院，湖北武汉430072)
摘要：目的尝试构建基于生物热力学表达的中药品质评价方法体系。方法 以不同生长年份黄连为例，利用微
量热法，测定黄连作用于大肠杆菌生长代谢过程中的热功率图，建立生物热动力学模型，分析热动力学参数、生物
活性与化学成分之间的相关性。结果 在不同生长年份黄连的作用下，大肠杆菌生长代谢的热功率图不尽一致，呈
现较明显的指纹特征；与正常对照组比较，不同生长年份黄连均能不同程度地使大肠杆菌生长速率常数减小，传代
时间延长，最大产热功率降低，说明不同生长年份黄连对大肠杆菌生长代谢均有不同程度的抑制作用，其中以含总
生物碱最高的四年生黄连的抑制作用最强。结论不同生长年份黄连作用于大肠杆菌生长代谢过程的部分热动力
学参数与热生物活性和化学成分之间具有显著的相关性；是具有实时、在线、微量、高效、高通量、普适性好等特点
的生物热力学方法和指标，既可以间接地反映黄连的生物活性，也可作为评价中药品质的一种新方法。
关键词；黄连；微量热法；中药品质评价
中图分类号：R286．02 文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2006)02—0205一05
收藕日期：2005—04—23
基金项目：国家自然科学基金资助项目(39970911；30371724)
作者简介：代春美(1977一)，女，硕士，主要研究方向为药理学及生物热力学研究。E—mail：xiaodll76@sina．tom
*通讯作者肖小河Tel：(010)66933322E—mail：pharmacy302@sohu．tom
万方数据
大豆总异黄酮HPLC指纹图谱研究
作者： 石荣， 王少云， 姜维林， 聂磊， 侯准， SHI Rong， WANG Shao-yun， JIANG Wei-lin
， NIE Lei， HOU Zhun
作者单位： 山东大学药学院,山东,济南,250012
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(2)
被引用次数： 4次

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