全 文 ：中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第8期2007年8月·1167·
序列中所含的丙氨基酸比例占15％，预示着此蛋白
二级序列结构为一个普通的a螺旋结构。
鹿茸蛋白CNTPill对于生长状态不良的细胞
的促生长作用更明显，如处于复苏期的细胞等，但是
平行实验研究表明鹿茸蛋白CNTPI对小鼠海马神
经细胞有微弱增殖作用，蛋白CNTPⅡ则无作用。
电泳实验表明，蛋白CNTPI反复冻融后会少
量分解为蛋白CNTPⅡ和CNTPⅢ。结合激光解析
电离飞行时间质谱所测定的三者的相对分子质量可
以看出，CNTPI的相对分子质量(6．7018×104)为
CNTPⅡ(4．3749×104)与CNTPIII(2．3855×
104)的之和，提示蛋白CNTPⅡ和CNTPⅢ可能为
蛋白CNTPI的两个亚基。
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大孑L吸附树脂分离纯化黄连总生物碱的工艺研究
徐晓宏1，张铁军扩，廖茂梁2，刘可越3，王文芳4，吴延吉4
(1．天津中医药大学，天津300193；2．天津药物研究院中药现代研究部，天津300193；
3．九江学院，江西九江332005；4．天津大学，天津300072)
摘要：目的研究大孔吸附树脂纯化黄连总生物碱的工艺。方法采用LD605、D101、DA201、NKA一9、AB一8大
孑L吸附树脂对黄连总生物碱进行吸附纯化。以总生物碱的收率、质量分数为考察指标综合评价。结果 AB一8大孔
吸附树脂具有最佳的吸附洗脱参数，其动态饱和吸附一洗脱量达1。23mg／g，2倍体积蒸馏水、2倍体积40％乙醇依
次洗脱，总生物碱收率为85％，质量分数为80％。结论AB一8大孔吸附树脂对总生物碱综合性能较好，适合于黄
连总生物碱的分离纯化。
关键词：黄连；总生物碱；AB一8树脂；分离纯化
中图分类号：R286．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)08—1167—04
Separationandpurificationof otaIlkaloidfromRhizomaCoptidis
bymacroreticularadsorbentr sin
XUXiao—hon91，ZHANGTie—jun2，LIAOMao—lian92，LIUKe—yue3，WANGWen—fan94，WUYan—ji4
(1．TianjinUn versityofTraditionalChineseMedicine，Tianjin300193，China；2．TianjinInstitute
ofPharmaceuticalResearch，Tianjin300193，China；3。JiujiangUniversity，Jiujiang
332005，China；4．TianjinUniversity，Tianjin300072，China)
Abstract：ObjectiveTostudythetechnologyforpurificationof otal kaloidsfromRhizomaCop—
tidisbymaeroreticularadsorbentsin．MethodsLD605，D101，DA201，NKA一9，andAB一8typesof
macroreticularadsorbentr sinswerreusedtoseparateandpurifythetotalkaloidfromRhizomaCoptidis．
Theyieldsandpuritiesoftheproductswerecomparedasindexes．ResultsAB一8Typemacroreticularad—
sorbentresinhadoptimumadsorptionandelutionparameterswithitsdynamicsaturateddsorptionratio
upto1．23mg／g．Afterelutedwith2BVofdistilledwaterand2BV40％ethanol，theyieldsoftotalka一
收稿日期：2006—10-08
作者简介：徐晓宏，女，在读硕士，主要方向为中药研究与开发。
*通讯作者张铁军Tel：(022)23006848
万方数据
·1168· 中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第8期2007年8月
loidwas85％，andcontentwas80％．ConclusionTheAB一8typemacroreticularresinshowsabetterco n—
prehensiveadsorptionpropertyandcanbeusedtoseparateandpurifythetotal kaloidsfromRhizoma
Coptidis．
Keywords：RhizomaCoptidis；totalalkaloids；AB～8resin；separationndpurification
黄连是毛莨科植物黄连、三角叶黄连或云连的
干燥根茎，性寒、味苦，具清热燥湿、泻火解毒、和胃
止呕之效[1]。黄连中主要含有小檗型生物碱。大孔吸
附树脂是一类新型非离子型高分子化合物，主要通
过表面吸附、表面电性或形成氢键等作用进行吸附，
具有选择性好、解析容易、可反复利用等特点，目前
主要用于工业脱色、医药工业的药物生物活性物质
和中药化学成分的提取分离纯化。罗集鹏等盟3采用
D—101树脂对黄连中小檗碱进行了富集和定量分
析，发现大孑L吸附树脂对黄连生物碱有较好的吸附
作用。候世祥等[31也以小檗碱为指标成分研究了影
响LD605、NKA一Ⅱ型大孑L吸附树脂吸附黄连提取
液中有效成分的一些因素。本实验在以往的研究基
础上以黄连水提取液为研究对象，采用大孔树脂吸
附技术进行了纯化，同时对大孔吸附树脂进行了筛
选实验，以找出对黄连总生物碱进行有效分离纯化
的树脂并确定最佳工艺。
1仪器与材料
UV一1601紫外一可见分光光度计(日本岛津)。
LD605大孔吸附树脂(49工部成都有机硅研究中
心)，D一101、DA201大孔吸附树脂(天津海光化工
厂)，NKA一9、AB一8大孔吸附树脂(南开大学化工
厂)；黄连药材为市售品，经天津药物研究院中药现
代研究部张铁军研究员鉴定，为毛茛科植物黄连
CoptischinensisFranch．的干燥根茎，符合《中国药
典}2005年版一部的有关规定。盐酸小檗碱(批号
110713—200208)、盐酸巴马亭(批号732—8701)、盐酸
药根碱对照品(批号733—8701)由中国药品生物制
品检定所提供，所用试剂为分析纯。
2方法与结果
2．1黄连药材中总生物碱的测定
2．1．1对照品溶液的制备：精密称取干燥至恒重的
盐酸小檗碱对照品10．04mg，置50mL量瓶中，用
0．05mol／LH：SO。溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
同法制备盐酸巴马汀、盐酸药根盐对照品溶液。
2．1．2供试品溶液的制备：取黄连粗粉约0．1g，精
密称定，置100mL量瓶中，加入盐酸一甲醇(1：
100)约95mL，60℃水浴中加热15rain，取出，超声
处理30rain，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得。
2．1．3检测波长的选择：分别取巴马亭、药根碱、小
檗碱对照品溶液与药材供试品溶液，在200～400
nm波长扫描。结果表明，各对照品溶液与供试品溶
液都在345nm波长处有较大吸收，所以选择345
nm作为检测波长。
2．1．4标准曲线的绘制：精密量取盐酸小檗碱对照
品溶液0．3、1．0、1．5、2．0、、3．0、4．0、5．0mL，分别
置50mL量瓶中，加0．05mol／LH：SO。稀释至刻
度，摇匀，在345nm波长处测定吸光度。以吸光度
为纵坐标，质量浓度为横坐标，进行线性回归。结果
表明在1．205～20．08弘g／mL与吸光度呈良好的线
性关系，其回归方程为y一0．0624X+0．0073，r=
0。9999。
2．1．5测定[4]：分别取对照品溶液和供试品溶液，
采用柱色谱一分光光度法进行测定，得药材中总生物
碱的质量分数为16．28％。
2．2 大孔吸附树脂静态吸附和解吸试验考察
2．2．1 上样溶液的制备：称取黄连药材1kg，粉碎
成粗粉，加入12倍体积水，回流提取3次，每次2h，
合并提取液并浓缩至8L，采用柱色谱一分光光度法
测定药液中总生物碱的质量浓度，备用。
2．2．2树脂预处理：大孔树脂分别用95％药用乙
醇浸泡24h，充分溶胀，用乙醇洗至溶液加适量蒸
馏水无白色浑浊现象时为止，最后用蒸馏水洗至无
醇味，备用。
2．2．3不同树脂对黄连总生物碱的静态吸附量试
验：称取不同型号大孔吸附树脂10g，置250mL
烧杯中，加样品溶液100mL，每隔5min振摇10S，
持续2h，然后静置24h，充分吸附后，滤过，测定吸
附前后溶液的吸光度值，计算静态吸附率。吸干经静
态饱和吸附总生物碱后的各型号树脂表面水分，精
密加入95％乙醇200mL，每隔5min振摇10S，
持续2h，同时采用柱色谱一分光光度法测定洗脱液
中总生物碱的质量浓度，计算饱和吸附量和解吸
率[5]。结果见表1。可以看出除NKA一9、DA201外，
另外3种树脂的静态吸附量很高，同样这3种大孔
吸附树脂的解吸率较高。考虑到吸附率和解吸率，故
选择AB一8、D一101、LD605大孔吸附树脂进行进一步
试验。
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第8期2007年8月·1169·
饱和吸附量一(原料液质量浓度x原料液体积一流出液
质量浓度×流出液体积)／湿树脂的量
吸附率一饱和吸附量／原料液中总碱的量×i00％
解吸率一洗脱液质量浓度×洗脱液体积／饱和吸附量×
100％
表1大孔吸附树脂对黄连中总生物碱的静态吸附率
和静态解吸率
Table1 Staticadsorptionandesorptionratesftotal
alkaloidinRhizomaCoptidisbymacroreticular
adsorbentr sins
树脂 极性 饱和吸附量／ 静态吸总解吸量静态解
种类(mg·g-1)附率／％／(rag·g-i)吸率／％
LD605非极性 49．34 51．03 37．08 75．15
D一101 非极性 51．58 56．01 40．30 78．13
NKA一9极性27．86 28．77 15．67 56．33
DA201极性 39．10 40．44 25．15 64．31
AB一8 弱极性 53．70 55．53 41．40 77．11
2．3大孔吸附树脂动态吸附和解吸试验考察
2．3．1大孔吸附树脂动态吸附考察：将黄连提取液
分别缓慢加入装有等量AB一8、LD605、D一101树脂
柱(30cm×1．2cm)中，控制流量为1BV／h，每0．5
BV为1个流份，测定所各流份中的总生物碱的质
量浓度，结果见图1。可以看出，3种大孔吸附树脂
中，AB一8从第11个流份开始，黄连总生物碱出现较
大量泄漏；LD605和D一101均从第7个流份开始出
现泄露；随着流份数的增加，黄连总生物碱的质量浓
度也不断上升，对于AB一8来说增至第22个流份以
后，曲线趋于平缓，即此时AB一8树脂对黄连总生物
碱的动态吸附趋于饱和，吸附量可达40．66mg／g。而
LD605和D一101对总生物碱的吸附量分别是
35．54、32．05mg／g。
p
■
暑
●
∞
E
￥
餐
蘧
2．5
2．0
o Io 20 30
V／BV
图1 AB一8、LD605和D一101大孔吸附树脂吸附■
与时间曲线的关系
Fig．1Relationshipbetweenadsorbanceandtime
ofAB一8，LD605，andD一101macroreticular
adsorbentresins
2．3．2乙醇不同体积分数和用量对大孔吸附树脂
的动态洗脱考察：黄连水提液20mL(相当于2．5g
生药)上AB一8、LD605、D一101树脂柱后，分别以蒸
馏水和30％、50％、70％乙醇各80mL(相当于4
个树脂床体积)洗脱，每20mL为一个树脂床体积，
分别测定各洗脱液流份中黄连总生物碱的质量浓
度，绘制洗脱曲线，见图2。可以看出，30％、50％乙
醇就可以把绝大部分总生物碱洗脱下来，并且因为
3种大孔吸附树脂的极性相似，对黄连总生物碱的
吸附能力相当，所以有几乎相同的洗脱行为。
V／BV
图2不同体积分数乙醇对黄连总生物碱的影响
Fig．2Effectofdifferentco centrationsofethanol
ontotalkaloidinRhizomaCoptidis
综合考虑3种树脂的吸附和洗脱能力，最终选
用AB一8大孔吸附树脂进行黄连总生物碱的纯化。
2．4 AB一8大孔吸附树脂吸附和解吸试验的考察
2．4．1 上样质量浓度对大孔吸附树脂吸附量的影
响：取相同质量的AB一8型大孔吸附树脂，将黄连提
取液浓缩后分别稀释为含生药0．25、0．20、0．17、
0．125、0．10、0．07、0．03g／mL，进行不同上样质量
浓度对树脂吸附量的研究，结果树脂对不同质量浓
度的药液吸附量分别为66．5、67．8、74．3、75．6、
50．5、39．0、27．2mg／g，结果见图3。可见随着上样
质量浓度的增加，树脂的吸附量也增加，当质量浓度
达到含生药0．125g／mL后，随着质量浓度的增加，
树脂的吸附量反而有所下降，所以上样生药质量浓
度应该控制在0．125～0．20g／mL。
一80
警60
邑40
型20
睽0
上样质量浓度／(g·mL一1)
囝3不同上样质量浓度对吸附量的影响
Fig．3EffectofdifferentcO centratiOns
ofsamplesonadsorbance
一。Jg．暑m)～毯璐卿瞧譬蘧
万方数据
·1170· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第8期2007年8月
2．4．2 冲洗杂质用水体积的考察：将经预处理的
AB一8大孑L吸附树脂装入玻璃柱(30cmX1．5cm)
中，用0．125mg／mL黄连水溶液上样(含总碱456
mg)，以1BV／h上柱，吸附完全后，分别以1、2、3、
4、5、6、7BV水冲洗(流量为0．5mL／min)，每1
BV为一个流份，测定吸光度，计算总生物碱的质量
分数，同时测定每一流份的出膏量，计算总生物碱的
的损失率，见表2。可以看出，前2个洗脱体积出膏
量大于流出的总生物碱的量，第3个洗脱体积以后
出膏量与总生物碱的量相差不大。考虑到树脂的除
杂作用，为了减少洗脱用水，缩短洗脱时间，选择2
BV为洗脱杂质用水量。
表2不同体积水用量对出膏量和总生物碱量的影响
Tahie2 EffectofvariouswateramountsOilextract
水洗体积 总生物碱量／mg 出膏量／rag 损失率／％
2．4．3乙醇体积分数和用量的选择：分别取AB一8树
脂3等份，用95％乙醇充分溶胀，用蒸馏水洗净，装
柱，供试品溶液3等份(含总碱456mg)分别上样(经
计算上样液中所含总碱量小于树脂泄露量)，用蒸馏水
洗3BV后，分别用20％、30％、40％乙醇洗脱，收
集洗脱液，每1BV一份，测定每份中总生物碱量，绘
制洗脱曲线，见图4。可以看出，随着乙醇体积分数的
增加，洗脱能力增加，40％乙醇优于20％、30％乙醇，
并且40％乙醇在2BV内将总生物碱的80％以上洗
脱下来，故没有考察其他体积分数的乙醇。
2．4．4吸附一洗脱性能稳定性试验：准确量取已处
理好的AB一8干树脂约80g，湿法装入玻璃柱(100
cm×3cm)中，黄连提取物溶液150mL(o．125g生
药／mL)以1BV／h上柱，用蒸馏水洗2BV后，用2
BV40％乙醇以1BV／h洗脱，收集洗脱液。重复以
上操作。重复上述操作2次，分别将各次洗脱液减压
蒸发，浓缩，干燥，测定。结果总生物碱的量分别为
2．65、2．71、2．68g，转移率分别为91．44％、
93．50％、92．31％，质量分数分别为84．47％、
l Z 3 4 5
y／BV
图4 乙醇体积分数和用量对解吸率的影响
Fig．4Effectofethnolconcentration
andamounto desorptionrate
83．40％、85．12％。
3 结论
通过对5种大孔吸附树脂的静态吸附研究发现
AB一8型大孔吸附树脂是一种比较理想的树脂，吸附
量大，解吸率高，较适合黄连中总生物碱的分离纯
化，具有操作简便、重现性好、消耗少等优点，具有较
好的推广应用前景。
黄连中总生物碱的纯化工艺选用AB一8大孔吸
附树脂，上柱药液质量浓度为0．125～0．20
mg／mL，50g湿态树脂可以处理15g生药，洗脱流
量为1BV／h，以蒸馏水洗脱2BV后，再用40％乙
醇洗脱收集2BV即可。黄连提取液未纯化之前总
生物碱的质量分数为48％左右，出膏率为26％，所
得纯化物中总生物碱的质量分数在80％以上，出膏
率为15％，可见经过大孑L吸附树脂纯化后体积分数
提高30％以上，出膏率降低了10％以上，从而为新
药开发提供了选择。
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万方数据
大孔吸附树脂分离纯化黄连总生物碱的工艺研究
作者： 徐晓宏， 张铁军， 廖茂梁， 刘可越， 王文芳， 吴延吉， XU Xiao-hong， ZHANG Tie-
jun， LIAO Mao-liang， LIU Ke-yue， WANG Wen-fang， WU Yan-ji
作者单位： 徐晓宏,XU Xiao-hong(天津中医药大学,天津,300193)， 张铁军,廖茂梁,ZHANG Tie-
jun,LIAO Mao-liang(天津药物研究院,中药现代研究部,天津,300193)， 刘可越,LIU Ke-
yue(九江学院,江西,九江,332005)， 王文芳,吴延吉,WANG Wen-fang,WU Yan-ji(天津大学
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刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(8)
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