全 文 ：中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第11期2006年11月·1671-
品溶液制备方法制备，测定。每批样品测定3份，按外
标法计算原薯蓣皂苷质量分数，测定结果见表1。
表1蔟藜提取物中原薯蓣皂苷的测定结果(疗=3)
Table1 ProtodioscininT．terrestrisextract(一：=3)
3讨论
3．1 检测波长的选择：将原薯蓣皂苷对照品储备液
在紫外分光光度计上于200～700nm进行波长扫
描，结果原薯蓣皂苷在203nm处有特征吸收，因此
确定203nm为原薯蓣皂苷的检测波长。
3。2洗脱条件的选择：采用高效液相色谱等度洗脱
时，流动相比例为35％乙腈水溶液，由于原薯蓣皂
苷结构式中只含有一个双键，因此，在203nm处吸
收值很小，色谱峰面积也很小，色谱峰分离效果不
好。而采用高效液相色谱梯度洗脱法时，虽然基线有
波动，但色谱峰能够达到很好的分离，并且色谱峰面
积稳定。因此宜采用梯度洗脱法进行测定。
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雷公藤叶提取物高效液相色谱指纹图谱的研究
李 克，王曙东，陈 爽
(南京军区南京总医院检验中心，江苏南京 210002)
雷公藤TripterygiumW?怕一iiHook．F．系卫
矛科雷公藤属植物，主产于浙江、江西、福建、广东、
安徽等地。主要含有二萜、三萜、倍半萜、生物碱及苷
类、糖类、醇类和微量元素等成分。具有抗肿瘤、抗炎
以及免疫抑制等药理活性。雷公藤提取物研制的制
剂用于治疗类风湿性关节炎、白血病、肾病综合症、
肿瘤等取得了较好的疗效并已被广泛认可口“]。雷
公藤含有许多毒性成分，在临床应用上仍会经常发
生不良反应[5矗j。因此，需要对雷公藤药材进行整体
质量的综合控制。研究开发新型、低毒剂型显得十分
必要。指纹图谱分析是近年发展起来的对中药及其
制剂进行综合宏观分析和质量控制的可行手段，现
已成为控制中药质量的有效方法[7’8]。
本实验采用HPI。C法研究了采收于不同季节
的雷公藤叶提取物的色谱指纹图谱，并利用色谱相
对峰面积和相对保留时间作为参数，比对了不同季
节的雷公藤叶之间的异同，为合理开发利用雷公藤
药材提供了参考。
收稿日期；2006—01—18
基金项目；江苏省“六大人才高峰课题”基金资助项目(06一B一028)
1材料
Integral100高效液相色谱仪系统(美国Perkin
Elmer公司)。N一2000色谱数据工作站(浙江大学
智能信息工程研究所)。雷公藤甲素对照品(批号：
1566—200201)购自中国药品生物制品检定所。雷公
藤叶药材购自浙江省永康市，其采收期分别为夏季
(7月)和冬季(12月)，经南京军区南京总医院王玉
玺副主任药师鉴定。D一101大孔吸附树脂购自天津
海光化工有限公司。储备液制备：精确称取雷公藤甲
素对照品5mg，加少许甲醇溶解后，以流动相确定
容至5m1．，摇匀，置4C冰箱保存。
流动相采用色谱纯级乙腈配制。其余试剂均为
分析纯级试剂，试验用水均使用超纯净水。
2方法与结果
2．1 色谱条件：色谱柱：LichrospherC，。高效液相
色谱分离柱(250mmX4．6mm，5肛m)(江苏汉邦科
技有限公司)；流动相：乙腈一水(39：61)；检测波长：
210nm；体积流量：0．80m1。／min；定量管体积：20
万方数据
·1672· 中草115 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第11期2006年11,El
肛I。；色谱分离柱温：35‘C。
2．2样品的提取及供试品溶液的测定：取雷公藤叶
1000g，95％乙醇回流3次，每次2h。滤液浓缩至
适量后，加10倍蒸馏水煮沸，抽滤。取滤液400mL
过20gD一101大孔吸附树脂吸附，以水洗除去杂质
后，用95％乙醇解吸，再经Al：o。柱吸附除杂，然后
用酯酸乙酯一石油醚混合溶剂洗脱。将洗脱液挥干后
用少量甲醇溶解，流动相定容，即得雷公藤叶提取物
供试品溶液备用。
将雷公藤叶药材提取物和雷公藤甲素对照品，
分别用流动相配制成供试品溶液，0．22肚m针式滤
器滤过后进样测定。
2．3 HPI，C指纹图谱方法学建立与考察
检测波长选择：测定了检测波长在205～225
nm下雷公藤叶提取物的紫外吸收色谱指纹图谱。
结果显示，在210nm处出现的色谱峰数目适中，且
各色谱峰相互之间分离度较好，基线平稳。
流动相选择：研究了流动相组成对色谱指纹图
谱分离情况的影响。结果显示，雷公藤叶提取物在乙
腈一水流动相体系中即可得到满意的分离。当流动相
中乙腈比例在20％～50％时，随着乙腈比例减少，
指纹图谱中各色谱峰保留时间呈延长趋势。综合考
虑，用于雷公藤叶提取物色谱指纹图谱检测较为适
宜的流动相条件为乙腈一水(39：61)。
分离柱温选择：考察了分离柱温对雷公藤叶提
取物指纹图谱的检测影响。结果显示，柱温变化对各
色谱峰的保留时间和峰面积影响不大。但在恒温条
件下，各色谱峰保留时间和峰面积的稳定性和重复
性均得到明显改善，试验选择分离柱温为35C。
内参物的选择：雷公藤甲素又称雷公藤内酯醇，
是从雷公藤中分离的二萜类内酯，是雷公藤中最具
代表性的活性成分之一，生药中也多以雷公藤甲素
评价药材质量的好坏口]。在本实验条件下，雷公藤甲
素的色谱峰为谱图中7号峰，其色谱峰面积约占总
峰面积20％以上(以夏季采收药材为例)，且色谱保
留时间和峰面积稳定，与相邻其他色谱峰分离较好，
故选择雷公藤甲素为指纹图谱的内参物。按雷公藤
甲素峰计算，分离系统理论塔板数约为6．6×10t。
共有峰的选定：在色谱指纹图谱研究中，不同样
品中相对保留时间值相同的峰，称为色谱指纹图谱
共有峰。按上述方法检测了5批雷公藤叶提取物的
指纹图谱。见图1。结果显示，共出现色谱峰近30
个，其中18个峰为5批雷公藤叶提取物所共有。考
虑到溶剂对保留时间小于5min的色谱峰的影响，
并以单峰面积大于或等于2％为选择标准，确定了
lo个峰为共有色谱指纹峰(表1)，其相对保留时间
分别为：1(0．4668～0．471)、2(0．547～0．551
5)、3(0．5753～0．5806)、4(0．6529～0．6561)、5
(0．6967～0．6996)、6(0．8989～0．9021)、7(1．
000)、8(1．1252～1．1308)、9(1．21l8～1．224
5)、10(2．2041～2．2237)。其中6号峰为1个未达
基线分离的双峰，当分离柱效下降时，其第2个峰表
现为1个小肩峰。谱图处理时将此双峰视为1组峰
计算峰面积，保留时间以第1个峰的保留时间计。10
个共有指纹峰的总面积约占总峰面积90％，且相对
保留时间和相对峰面积较为稳定、重复。
A
10
～∥ 岷4小6如一． 八
10⋯——．———，—、／，、、．—。．—一一
图1 采收于冬季(A)和夏季(B)的霄公藤叶提取物的
HPLC指纹图谱
Fig．1HPLCFingerprintofextractin，．
wilfoodiileavescollectedinwinter
(A)andi summer(B)
稳定性试验：取一新配制供试品溶液，分别在
0、2、4、8、12h进样检测指纹图谱。以雷公藤甲素为
内参比峰，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰
面积。结果显示，10个共有峰的色谱相对保留时间
的RSD小于0．5％、相对峰面积的RSD小于2％。
精密度试验：取采收于冬季的雷公藤叶提取物，
配制成供试品溶液，连续进样5次。结果共有峰的相
对保留时间和相对峰面积的RSD分别为0．11％～
0．30％和0．22％～1．23％。
重现性试验：平行取5份采收于夏季的雷公藤
叶提取物，配制成供试品溶液，分别进样检测。结果
显示，共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第11期2006年11月·1673·
分别小于0．5％和小于2．5％。
表1蕾公藤叶提取物指纹图谱分析结果
(采收季节：7月，n一5)
Table1 FingerprintanalysisofextractinI．wilfordiileaves
(collectedinJuly，撑=5)
3讨论
传统上，由于雷公藤毒性较大，通常使用去皮的
根入药，造成毁灭性采收使用，而雷公藤的叶子基本
没有得到很好的利用。如何克服或降低雷公藤叶的
药用毒性，开发新剂型，对满足临床用药及科学、环
保地开发利用我国中药资源都具有重大的意义。
分别取采收于夏季(7月)和冬季(12月)的雷公
藤叶提取物，按本方法制成供试品溶液测定图谱。结
果显示，两组样品HPI，C指纹图谱中主要峰群的面
貌基本一致，提示不同采收季节雷公藤叶中的主成
分基本相同。但其中某些成分的相对比值却有所不
同，尤其是3号、7号峰差异显著。采收于冬季的雷
公藤叶样品中7号峰(雷公藤甲素)的量高于3号
峰。而采收于夏季的雷公藤叶样品中3号峰的量却
显著高于7号峰。文献报道夏季采收的雷公藤药材
毒性最大，而冬季采收的雷公藤药材毒性较小[6]。因
此，3号峰组分是否即为含有较强毒性的组分尚有
待进一步研究。
通过高效液相色谱指纹图谱检测分析研究，可
以简便、快速地区分采收于不同季节的雷公藤叶药
材，从而为雷公藤叶药材的鉴定和内在质量控制提
供参考。同时也为科学、环保地开发利用雷公藤药材
资源、促进我国中药材资源的可持续发展和开发雷
公藤新剂型、降低雷公藤叶的药用毒性提供了有效
的参考依据。
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敬 告 读 者
《中草药》杂志编辑部尚存部分过刊合订本，包括：1974—1975年、1976年、1979年、1985一
1994年(80元／年)，1995—1997年(110元／年)、1998年(120元／g-)、1999年(135元／年)、
2000年(180元／#-)、2001—2003年(200元／年)、2004年(220元／#-)。1996年增刊(50元)、
1997年增刊(45元)、1998年增刊(55元)、1999年增刊(70元)、2000年增刊(70元)、2001年
增刊(70元)、2002年增刊(65元)、2003年增刊(65元)、2004年增刊(65元)、2005年增刊(65
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万方数据
雷公藤叶提取物高效液相色谱指纹图谱的研究
作者： 李克， 王曙东， 陈爽
作者单位： 南京军区南京总医院,检验中心,江苏,南京,210002
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(11)
被引用次数： 1次

参考文献(9条)
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引证文献(1条)
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本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200611029.aspx