全 文 :中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第2期2005年2月·277·
表3发酵菌种与分离纯化菌种的PCR扩增结果
Table3 ResultsofPeRamplificationbe ween
fermentedmyceliaandpureC.sinensis
引物 发酵菌种标记数分离纯化菌种的标记数共有标记数
显的遗传分化,在一定数量引物的实验中,没有发现
任何两个样本具有完全的RAPD标记,但亲缘关系
较近的,则共有标记较多,而不同的标记能否作为不
同来源样本的特征性鉴定条带,以供鉴定不同来源
的虫草正在进一步的研究当中。
天然康定虫草与本院生产的人工虫草RAPD
指纹有较大的相似之处,提示两者的药用或营养价
值可能相似。说明虫草的菌种相同,虫体也一致,且
生长环境相近似时,天然冬虫夏草与人工虫草的分
子水平相差不太大;进一步比较天然虫草与发酵菌
丝体的DNA指纹,相似率并不高。但分离纯化的菌
丝与发酵菌丝体的DNA比较有较大的相似率
(89.7%)。说明虫部的DNA差异是造成相似率差
异的主要原因。提示进行DNA指纹比较时,材料来
源部位一致性很重要。
References:
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马蹄香的生药鉴定及其与华细辛的鉴别
彭 强1,赵桦2,张国柱1
(1.汉中市药品检验所,陕西汉中723000;2.陕西理工学院陕西省资源生物重点实验室,陕西汉中723000)
摘要:目的对马蹄香进行生药鉴定,并与易混品华细辛鉴别。方法原植物特征和药材性状描述,显微镜观察,
薄层色谱、高效液相色谱和荧光实验比较。结果 马蹄香和华细辛的原植物主要在是否有地上茎、叶柄是否被毛,
花的类型、颜色和果实特征方面有所不同;药材性状在形状、颜色、质地、断面以及气味上存在差异;显微特征在是
否检出油细胞或木纤维群以及横断面特征、淀粉粒形态上有区别;薄层、高效液相色谱和荧光特征也有明显差异,
并在马蹄香中检出马兜铃酸A。结论为马蹄香的生药鉴定及其与华细辛鉴别提供了依据,并提示使用马蹄香应
防止可能发生的马兜铃酸的毒性危害。
关键词:马蹄香;华细辛;生药鉴定;薄层色谱;高效液相色谱;马兜铃酸A
中图分类号:R282.71 文献标识码:A 文章编号:0253—2670(2005)02—0277—04
PharmacognosticidentificationofSarumahenryiandifferentiationofAsarumsicbodii
PENGQian91,2:HAOHua2,ZHANGGUO—zhul
(1.HanzhongInstituteforDrugControl,Hanzhong723000,China;2.Bio-ResourcesKeyLaboratory
ofShaanxiProvince,ShaanxiUniversityofTechnology,Hanzhong723000,China)
Keywords:SarumahenryiOliv.;AsarumsiebodiiM q.;pharmacognosticidentif ation;TLC;
HPLC:aristolochicacidsA
马兜铃科植物马蹄香SarumahenryiOliv.为
我国特有单种属植物,分布于陕西、四川、贵州、湖
北、江西、河南、甘肃等省。其干燥的根及根茎在民间
药用,习称马蹄香、冷水丹、高脚细辛、马头细辛。性
温,味辛、苦,有小毒,具温中散寒、理气镇痛功能,主
治胃寒痛、心前区痛和关节痛等症‘¨。马蹄香的入药
部位与陕西产的同科植物华细辛Asarumsiebodii
Miq.的入药部位相同,其名称与华细辛的别名白细
收稿日期12004—04—18
基金项目:陕西省自然科学基金资助项目(2003C102);陕西省教育厅重点实验室科研项目(2001)
万方数据
·278· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第2期2005年2月
辛相近,加之细辛类药材的品种较多,药名中多有
“细辛”二字,如毛细辛、铜钱细辛、马蹄细辛等,因而
有将马蹄香误认作细辛的现象。在对马蹄香的检测
中,发现本品含马兜铃酸,而马兜铃酸的肾毒性正引
起人们的广泛关注[2]。因此,对马蹄香进行生药学鉴
定,并与华细辛的根及根茎比较,为鉴别提供依据。
1实验材料、仪器与试剂
1.1 材料:马蹄香药材采自汉中镇巴,部分样品来
源于民间药摊;华细辛药材来源于民间药摊,部分样
品购于当地药材市场并取其根及根茎。两种药材样
品的原植物均由笔者鉴定,分别为S.henryiOliv.
和A.siebodiiMiq.。
1.2 仪器:XSJ一1型研究生物显微镜(重庆光学
仪器厂)。SP8810高效液相色谱仪,SP8450检测器
和SP4290积分仪(美国)。紫外分析仪(356nm,上
海科仪光学仪器厂)。
1.3试剂:薄层色谱用硅胶G(化学纯,青岛海洋
化工有限公司)。马兜铃酸A对照品(批号:0746—
9002,中国药品生物制品检定所)。实验用其他试剂
除另有注明外,均为分析纯。
2方法与结果
2.1 马蹄香的原植物特征:多年生草本,根及根状
茎鲜时为淡灰黄色,干后呈灰褐色至灰黑色,搓揉有
芳香气。地上茎直立,通常高45~65am,有时可达
1rfl,表面被灰褐色短柔毛。叶多枚互生于茎,肾状
心形或宽心形,长6.5~14cm,宽7~15cm,先端
渐尖或短渐尖,叶两面均有短毛或表面无毛;叶柄长
2~8cm,被细毛。花单生,花梗长3~5cm,被毛;花
被2轮,辐射对称,萼筒基部与子房合生,顶端3裂
片,宽心形,外面被毛;花瓣3,黄绿色,圆肾形,长约
1cm;雄蕊12枚,2轮;子房半下位,心皮6枚,下部
合生,上部分离。蒴果瞢荚状,成熟时沿腹缝线开裂。
华细辛原植物与马蹄香的主要区别是,根及根
状茎干后呈灰黄棕色至灰黄白色,搓揉有辛香气。无
地上茎,叶基生常2枚对生,叶柄光滑,长6~14
cm。花梗无毛;花被1轮,下部合生成筒,上部3裂
片,紫黑色或深紫色,无毛;合生的6枚心皮仅花柱
部分离生。蒴果半球形似浆果状。
2.2马蹄香的药材性状:根茎斜向横生,呈不规则
圆柱形,长4~7am,直径4~6mm,具多数长短不
等的分枝;表面灰褐色,较粗糙,有环形的节,节间长
0.3~0.5cm,分枝的顶端具茎残基或洞状凹窝茎
痕;质硬脆,折断面不平坦,黄白色,中心空洞或呈枯
朽状。根细密,生于根茎节上,多弯曲,长7~13am,
直径1~1.5mm,表面棕褐色至灰黑色,平滑或具
纵皱纹,有须根及须根痕;质脆,易折断,断面平坦,
黄白色,周围边缘灰黑色。气香,味微辛、苦。
华细辛与马蹄香的主要区别是,根茎细长,长
5~15am,直径1~2mm;表面灰黄棕色,节间长
0.1~1cm,分枝顶端有小碗状茎痕;质脆,折断面实
心。根长10~20cm,表面及断面均为黄白色至灰黄
白色。气辛香,味辛辣、麻舌。
2.3马蹄香的显微特征
2.3.1根茎横切面:最外为数层褐色栓质化细胞,
皮层薄壁细胞10余层,细胞切向延长,细胞壁具多
数扁狭纹孔,胞腔有的含草酸钙砂晶和不规则方晶。
维管束10多个环列,韧皮部狭窄,幼嫩根茎的韧皮
部外侧有时可见由3~5个纤维组成的纤维束。束
中形成层明显。木质部较发达,木质部束厚度不均
匀,形成宽窄不等的木质部区;木纤维成片。髓部外
侧薄壁细胞类圆形至椭圆形,排列疏松,有的含草酸
钙砂晶,中心部位常破毁或成空洞;髓射线在较老根
茎中明显。薄壁细胞含淀粉粒(图1)。
华细辛根茎横切面与马蹄香的主要区别是,最
外为一层表皮细胞;表皮下方为1~2(3)层厚角组
织,含细小草酸钙砂晶;皮层细胞有的含细小草酸钙
砂晶,偶含方晶,油细胞散在;维管束6~7个,形成
层不明显,木质部无明显的木纤维群;髓部完整,具
油细胞。
2.3.2根横切面:最外为数层褐色至棕褐色栓质化
细胞,偶见残存表皮。皮层由10余层略切向延长的
薄壁细胞组成,有的含不规则草酸钙方晶和砂晶。内
皮层细胞一层,较小,隐约可见凯氏点。中柱鞘细胞
2层。韧皮部狭。形成层不明显。木质部轮廓类圆形,
导管单个或2至数个相聚,呈径向排列,有木纤维群
分布。薄壁细胞含淀粉粒(图2)。
华细辛根横切面与马蹄香不同的是,残存表皮
明显,下皮细胞含细小草酸钙砂晶,皮层发达,外侧
细胞偶含草酸钙方晶,油细胞散在;内皮层和中柱鞘
细胞均为1层;木质部无木纤维群。
2.3.3根粉末:浅灰色,气香,味微辛、苦。淀粉粒众
多,其中较小的占大多数,直径在2~8pm,单粒类
球形和类多面体形,脐点点状、短缝状,复粒由2~
10分粒组成;较大的形状不一,呈圆球状者直径
15~24肛m,呈长球状、卵状、长圆三角体形者直径
(长×宽)20~48ttm×16~32pm,呈类贝壳状者直
径16~18弘m,脐点点状、短缝状、三叉状,少数有细
密层纹。皮层薄壁细胞类长多角形,含草酸钙方晶及
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第2期2005年2月·279·
1一栓化组织 2一皮层 3一初生
韧皮纤维4一韧皮薄壁组织
5一形成层 6一木质部导管 7一
木射线 8一木纤维9一髓细胞
1-suberizedt ssue2-cortex
3-primaryphloemfiber4一
phloemparenchyma5-c m—
bium6-vessel7-woodray
8-woodfiber9-cellsofpith
图1马蹄香根茎横切面
Fig.1Rhizometransection
ofS.henyH
4
5
1一残存表皮2一栓化层
3一皮层4一内皮层5一韧皮部
6一木质部
1-epideris2- uberinlamellae
3-cortex4-endodermis
5-phloem6-xylem
图2马蹄香根横切面
F g.2Roottransection
ofS.henyri
砂晶,方晶形状不规则,直径2~12肛m,偶见由方晶
簇集的晶体,直径约14弘m。木纤维多成束,单个直
径14~16弘m,先端短斜尖或钝,壁厚2~4pm,具
少数单纹孔。导管为梯纹、网纹和环纹,少数为孔纹,
直径8~28肛m。可见淡棕黄色至棕黄色的栓化组织
碎片(图3)。
华细辛根粉末与马蹄香不同的是,气辛香,味辛
辣、麻舌;淀粉粒单粒类圆形或长圆形,直径2~18
btrn,复粒多至15分粒组成;草酸钙砂晶细小,无木
纤维;另可检出类长方形且壁细波状弯曲的下皮细
胞、油细胞和细胞界限不清晰的棕色表皮。
2.4理化鉴别
2.4.1取马蹄香和华细辛根及根茎粉末各0.5g,
分别加石油醚(30~60℃)超声处理3次,每次10
rnL、10min,滤过。取两种滤渣,挥尽石油醚,分别加
乙醚超声处理3次,每次10mL、10min,滤过。取两
1一皮层薄壁细胞(含草酸钙晶体)2-淀粉粒
3一导管4一木纤维5一栓化组织
1一dermalp ranchymacell(oxalatecrystal)2一starch
3一vessel4一woodfiber5一suberization
图3马蹄香根粉末
Fig.3PowderofS.henyriroot
种滤渣,挥尽乙醚,分别加甲醇回流2次,每次10
mL、15min,滤过。合并各自甲醇液,分别浓缩至1
mL,得2种供试液。另取马兜铃酸A对照品,加乙
醇制成0.5mg/mL的对照品液。吸取2种供试液
各10弘L、对照品液5肛L,分别点于同一硅胶
GCMC薄层板上使成条状;另吸取2种供试液各
10肛L,分别同法点样后,再吸取对照品液各5弘L加
点于2种供试品原点条斑上,以甲苯一醋酸乙酯一水一
甲酸(20:10:1:1)的上层展开,取出,晾干。分别
在日光下和365nrll紫外灯下检视。结果见图4。供
试品马蹄香加点和未加点对照品的色谱在与马兜铃
酸A对照品色谱相应位置上,日光下均各显一个相
同的灰黄色条斑,紫外光下该条斑呈暗灰黄色(加点
对照品的条斑系重合条斑,其色泽均较深),同时在紫
外光下尚各显5个相同的荧光色斑。供试品华细辛加
点对照品的色谱在与马兜铃酸A对照品色谱相应位
置上,日光下和紫外光下均分别显一个相同颜色条
斑,同时在紫外灯下检出与马蹄香色谱中其他5个荧
光斑点相同的色斑;华细辛未加点对照品的色谱,日
光下未检出任何斑点,紫外灯下只检出与马蹄香色谱
中其他5个荧光斑点相同的色斑(图4)。
2.4.2 样品荧光特征比较:取定性滤纸条(宽1
万方数据
·280· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第2期2005年2月
A一马蹄香A1-马蹄香加马兜铃酸A
B一华细辛B·一华细辛加马兜铃酸AS一马兜铃酸A
. A—S.henryiA1一S.henryiandaristolochicacidsA
B—A.siebodiiBl—A.siebodiiandaristolochicacidsA
S—aristolochicacidsA
图4甲醇提取液TLC谱
Fig.4TLCchromatogramsfMeOHextract
cm)蘸取2种供试液各少许,挥干,置365nm紫外
光下检视。结果马蹄香显黄绿色荧光,华细辛显天蓝
色荧光。
2.4.3样品中马兜铃酸的HPLC检查:取马蹄香
和华细辛根及根茎粉末各0.5g(过2号筛),加甲
醇15mL,水浴回流1h,滤过。取滤液加甲醇至10
mL,混合均匀,得2种甲醇液。取上述2种甲醇液各
1mL,加甲醇稀释至10mL,混匀,得2种供试品
液。精密称取马兜铃酸A对照品0.0109g,加甲醇
溶解使成100mL,取5mL,加甲醇稀释至25mL
作为对照品液。
色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶柱(250mm×
4.6mm,5pm);流动相:甲醇一水~冰醋酸(68:
31:1);体积流量:1.0mL/min;检测波长:315nm;
进样量:2种供试品液、对照液各10肛L分别进样;2
种供试品液各5ttL,再分别加入对照品液5肛L进
样。理论塔板数以马兜铃酸A计不低于4000。结果
见图5。供试品华细辛未加对照品的色谱在与马兜
铃酸A对照品色谱相应出峰时间上未检出色谱峰,
而加对照品的色谱则检出马兜铃酸A色谱峰;供试
品马蹄香无论未加和加对照品的色谱均在与马兜铃
酸A对照品色谱相应出峰时间上检出色谱峰,并且
加对照品的色谱峰系重合峰(图5)。
D
A一马兜铃酸A&马蹄香C一华细平
D一马蹄香加马兜铃酸AE一华细辛加马兜铃酸A
A—aristolochicacidsAB—S.henryiC—A.siebodii
D—S.henryiandaristolochica idsA
E—A.siebodiiandaristolochicacidsA
图5 HPLC谱
Fig.5HPLCchromatograms
3讨论
3.1 已知含马兜铃酸的中药材有马兜铃、关木通、
青木香、天仙藤、朱砂莲、广防己、汉中防己和寻骨风
等。有关马蹄香根及根茎含马兜铃酸尚未见报道。本
实验在对马蹄香与华细辛(根及根茎)生药鉴别中
采用薄层和高效液相色谱方法,并在2种样品中分
别加入马兜铃酸A对照品进行验证,确证在本实验
条件下马蹄香中可检出马兜铃酸A,而在华细辛的
根及根茎中未检出。显示是否检出马兜铃酸A是鉴
别两者的一个重要依据;同时提示使用马蹄香时应
注意防止由马兜铃酸引起的毒害。
3.2 马蹄香与华细辛同属于马兜铃科,药用部位相
同,药用别名容易混淆,但可依据原植物是否有地上
茎、各部分被毛情况、花果结构和色泽差异;药材外
形、颜色、质地、断面与气味上的差别;根中有无油细
胞或木纤维群、淀粉粒形态以及横切面中维管束和
根茎髓部的不同特点加以区别。
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5
—8●●●I●jljL
l
—
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—
A
㈣i山
万方数据
马蹄香的生药鉴定及其与华细辛的鉴别
作者: 彭强, 赵桦, 张国柱, PENG Qiang, ZHAO Hua, ZHANG Guo-zhu
作者单位: 彭强,张国柱,PENG Qiang,ZHANG Guo-zhu(汉中市药品检验所,陕西,汉中,723000), 赵桦
,ZHAO Hua(陕西理工学院陕西省资源生物重点实验室,陕西,汉中,723000)
刊名: 中草药
英文刊名: CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年,卷(期): 2005,36(2)
被引用次数: 8次
参考文献(2条)
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本文链接:http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200502046.aspx