全 文 ：中草蔼ChineseTraditionalandHerbDrugs第37卷第6期2006年6月
表1盒雀根中carasinolB的测定(H=3)
Table1 Determi呻tionofcarasinoIBin砌扭 A
CaraganaeSinicae抽一3)
3讨论
本实验将carasinolB制备成对照品，并建立了
金雀根中carasinolB的测定方法(图1)。本实验建
立的分析方法快速、简便，具有良好的精密度、稳定
性和重现性。
CarasinolB体外细胞试验证明具有刺激成骨
细胞增殖的活性，它属于二苯乙烯类化合物，是余雀
根的活性成分之一，主要存在于金雀根的醋酸乙酯
可溶部位，性质稳定，可以作为金雀根的质量控制
样品。
本实验同时分析了不同产地不同采集时间的金
雀根中carasinolB的量。得到的结论是采集于相同
时间都是12月份的，湖北黄梅的量高于云南昆明
’carasinolB
一图1 CarasinolB对照品(A)及金雀根(B)的HPLC图
Fig．1HPLCChromatogramsofcarasinolB(A)
andRadhCaraganaeSinicae(B)
的，而采集于相同地点都是湖北黄梅的7月份的量
高于12月份的。有效成分量的不同可能是由于土
壤、气候、水份、温度等的不同造成的。
References：
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HPLC法测定羌活中阿魏酸、羌活醇、苯乙基阿魏酸酯和异欧前胡素
古丽娜·沙比尔“2，郭洪祝1，郭 慧1，马晓驰1，王炜1，果德安”
(1．北京大学药学院，北京100083；2．新疆中药民族药研究所，新疆乌鲁术齐830002)
羌活为伞形科植物羌活Notopterygiumincisu
TingexH．I．Chang、宽叶羌活N．forbesiiBoiss．
或川羌活N．franchetiiBoiss．的根及根茎，有散表
寒、祛风湿、利关节等功效，用于治疗感冒风寒、头痛
无汗，风寒湿痹、项强筋急、骨节酸痛、风水浮肿、痈
疽疮毒等“]。本属植物的主要活性成分为香豆素类
化合物。羌活为《中国药典))2005年版一部收载品
种，但对羌活药材未作定量测定要求，其质量仅通过
测定挥发油的量来控制，规定总挥发油不得少于
0．028mL／g[2]。为了有效地控制羌活药材的质量，
本实验选择羌活药用部分中量较高的4种有效成分
(阿魏酸、羌活醇、苯乙基阿魏酸酯、异欧前胡素)作
为定量指标，建立羌活的RP—HPLC测定法，为中药
羌活内在质量的评价提供科学依据。
1仪器与试药
高效液相色谱仪：Agilent1100型高效液相色
谱仪(德国AgilentTechnologies)。配二级管阵列检
测器和ChemStation色谱工作站，四元溶剂系统、在
线脱气机、自动进样器、柱温箱。Sardoris电子天平
(德国Statarius公司)。HPLC级乙腈(加拿大LTD
公司)；色谱纯甲醇(北京市华准化学试剂科技开发
部)；冰醋酸为分析纯(北京化学试剂公司)；双蒸水
(Milliporesimplicity纯水制备系统)。
羌活对照药材购自中国药品生物制品检定所
(批号：120935—200405)。四川羌活药材从四川阿坝
州采集，其他23批羌活药材均购自当地药店或医
院．由本室果德安教授鉴定。对照品羌活醇(no—
topter01)、苯乙基阿魏酸酯(phenethylferulate)和
异欧前胡素(isoimperatorin)3种成分均为笔者分离
所得，并经4大光谱(uV、MS、1H—NMR、”C—NMR)
箨霎品霁：警蔷蒜1．-1沙0比尔(1963)，女(维吾尔旅)，新疆伊犁人，副研究员。2002～2005年在北京大学药学院特培，访问学者．研究方
+通讯作争7案黎霎量T控e制l：及(01天0)然82药80物15化16学研F究ax。：(。1。T)e8H28(009297100)26；：恶l：gE如-m@aiblJnl29u⋯lnadr‘cs，alK‘ 16墨com
万方数据
-938· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第6期2006年6月
分析，与文献化学光谱数据查对确定结构”“；阿魏
酸(ferulicacid)购自中国药品生物制品检定所(批
号0773—9607)；HPLC检测4个对照品质量分数
为98％以上。
2方法与结果
2．1液相色谱条件：色谱柱：AlltimaHPC，。(250
mm×4．6roi33，5pm)，预保护柱：Phenomenex，Se
curityGuard；流动相乙腈(A)和0．3％醋酸水(B)；
梯度洗脱程序：O～8minA由15％～20％，8～12
minA20％，12～14rainA由20％～55％，14～25
rainA55％，25～26minA55％～65％；26～30
minA65％。柱温30℃，体积流量1mI，／rain，检测
波长330nIil，进样量为5pL。在此色谱条件下4种
待测化合物的混合对照储备液(A)、羌活对照药材
(B)和四川羌活药材(c)的色谱分离结果见图1。可
见，羌活中4种化合物得到了基线分离。
2．2对照品溶液制备：分别精密称取对照品阿魏
酸、羌活醇、异欧前胡素各5mg，苯乙基阿魏酸酯2
mg，分别置于5mI，量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻
度，摇匀，配制对照品储备液。分别精密吸取适量对
照品储备液混合并用甲醇定容至5mL量瓶中，制
成混合对照品储备液。
2．3 供试品溶液制备：羌活药材粉碎(60日筛)，精密
称取0．1g，加甲醇5mL，称质量，同流1h，放冷至室
温，补质量，取上清液用0．45pm微孔滤膜滤过，即得。
2．4标准曲线和线性范围：精密依次吸取混合对照
品储备液7个不同质量浓度进行HPI。C分析，在上
5 10 15 20 25 30
5 lo 15 20 25 30
5 10 15 20 25 30
1阿魏酸2一羌活醇3一苯乙基阿魏酸酯4一异欧前胡素
1一ferulicacid2 notopterol3-phenethylferulate
4 isoimperatorin
图l混台对照品(A)、对照药材(B)和四川产羌活
药材(C)HPLC皤谱
Fig．1HPLCChromatogramsfmixedreferencesubstan—
ces(A)，referencem dicinalmaterials(B)，and
RMzomaetRadixNotopterygiiinSichuan(C)
述色谱条件下检测峰面积，同一质量浓度连续测定
3次，4种成分均以质罱浓度为横坐标(x)，平均峰
面积为纵坐标(y)进行线性回归，相关系数与线性
范围见表】。
表1 4个化台物的线性回归方程
Table1 Linearequationoffourcompounds
2．5精密度试验：分别在1d内和连续3d精密吸
取上述混合标准储备液5pI。在所确定的HPLC条
件下重复进样6次测定。记录各成分色谱峰面积，计
算其质量分数。结果阿魏酸、羌活醇、苯乙基阿魏酸
酯和异欧前胡素质量分数的日内RSD分别为
0．56％、0．53％、0．53％、0．56％，日间RSD分别为
1．55％、0．88％、2．75％、0．99％。
2．6重现性试验：分别称取四川羌活药材粉末(60
目)5份，按供试品操作方法平行制备，进样5pI。，连
续测2次，分别计算所含阿魏酸、羌活醇、苯乙基阿
魏酸酯和异欧前胡素的质量分数，RSD分别为
1．02％、1．30％、1．11％、1．10％。
2．7稳定性试验：精密吸取混合对照品储备液5
pL，分别在0、2、4、6、12、24、36h进样分析，分别计
算所含阿魏酸、羌活醇、苯乙基阿魏酸酯和异欧前胡
素质量分数，RSD分别为0．42％、0．70％、1．21％、
0．41％，表明36h内4个对照品稳定性良好。
2．8回收率试验：精密称取羌活药材粉末0，05g
(60目，四川I产)，分别精密加入已知量高、中、低3
种质量浓度的对照储备液，每个质量浓度取3份，按
万方数据
中革喃ChineseTraditionalandMerbalDrags第37卷第6期2006年6月·939·
2．3项供试品方法制备。进样5皿，每份样品测定3
次，计算回收率，结果阿魏酸平均回收率100．52％，
RSD为0．38％(”一3)，羌活醇平均回收率101．
60跖，RSD为1．09％(”一3)，苯乙基阿魏酸酯平均
回收率97．75％，RSD为0．83％(一3)，异欧前胡
素平均回收率100．12％，RSD为1．93％(n一3)。
2．9样品测定：精密称取不同来源的25份羌活粉
末各0．1g(60目)，精密加5mL甲醇，按上述供试
品溶液制备，以5pL进样，测定色谱峰峰面积，根据
标准曲线计算其质量分数结果见表2。
裹2羌活药材中4个化台物的测定结果抽一3)
Table2 DeterminationoffourcompoundsInRhizoma
etRadixNotopterygii(”=3)
3讨论
3．1色谱条件优化：为了尽可能在短时间内获得好
的分离效果，对色谱条件进行了优化。首先考察了不
同反相色谱柱PhenomenexLunaC。AlltimaHP
c。s和Zorbax等因素。同时考察了不同组成的流动相
(甲醇一水、异腈一水、甲醇一酸水、异腈一酸水j系统。酸
主要比较了冰醋酸和磷酸，冰醋酸可必改善峰型和分
离度，而磷酸分离效果不好。又比较了不同浓度冰醋
酸水溶液，因酸度越高对色谱柱的损害也相应增加，
通过比较综合考虑，最终确定采用乙腈一0．3％冰醋酸
水溶液为流动相系统进行梯度洗脱。考察了不同的柱
温(25、30、35、40℃)、不同体积流量(0．8、0．9、1
mI。／min)。波长采用HPLC—DAD检测，被测4个化
合物的最大吸收波长均在330nm附近。故检测波长
设在330nm。通过上述试验条件的考察，对羌活提取
物测得的色谱图分离效果进行比较，最终优化色谱条
件确定色谱柱为AlltlmaHPcJ8(250film×4．6
mm，5pm)、柱温30℃、体积流量ImL／min和检测
波长330am。在优化的HPLC条件下，能够在30
rain之内测定羌活中的4个主要成分。此方法简单、
快速、准确，可以用于羌活药材的质量控制。
3．2提取方法的优化：为能使被测化合物提取效果
最佳，考察了不同提取溶剂(甲醇、乙醇以及不同比
例的甲醇水和乙醇一水)i不同提取方法(回流、超
声)和不同提取时间(30、45、60、90、120、150rain)等
因素对提取效率的影响．最终确定甲醇回流1h方
法提取效率高。
3．3指标性成分的选择：中药所含的化学成分极其
复杂，而且在治疗疾病方面中药多个活性成分是起
协同作用，一个成分很难代表一味中药的功效。因
此，选用尽可能多的成分来评价药材质量和确保药
材的临床效果。这4个化合物是羌活中质量分数高
的化学成分，对其进行定量分析是有必要的。
3．4样品分析：本实验建立的分析方法用于定量分
析25批不同来源的羌活药材中4个化合物的量。结
果见表3。从测定结果来看，在大多数羌活药材中4
个成分均含有，21号药材中没有检测出羌活醇、苯
乙基阿魏酸酯；阿魏酸量也极低，但是其所含异欧前
胡素是在所有药材中量最高的。25批不同来源羌活
药材中4个成分的量存在显著的差异。说明市场上
流通的羌活药材品质差别较大。由此可以看出各地
药材的内在质量有很大不同，这可能是由于植物基
源不同，或是生长环境、采集时间、加工方法、贮存条
件等外部因素造成的。因此对中药材有效成分的内
在质量进行定量控制是很有必要的。
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RP—HPLC法测定草乌中乌头碱、中乌头碱和次乌头碱
赵英永“2，崔秀明”，张文斌1，苗华3，戴云2
(1．文山三七研究院天然药物研究所，云南文山663000；2．云南民族大学化学与生物技术学院
云南昆明650031；3．南阳师范学院，河南南阳473061)
草乌属毛茛科植物北乌头Aconitumkusnezofi
fiiReichb．的干燥块根，具有祛风除湿、温经止痛的
功能，用于风寒湿痹、心腹冷痛，麻醉止痛等o]。主要
含有中乌头碱、乌头碱、次乌头碱等二萜类生物碱，
它们既是其有效成分，也是其毒性成分。本实验采用
HPLC方法测定3种生物碱，方法简便、快速，结果
准确。
1仪器、药品与试剂
ShimadzuI。c一10A高效液相色谱仪，包括
LC--10ATvp溶剂输送泵，SCL--10Av系统控制
器，sPD10Avp紫外可见检测器，CTO10Avp
柱温箱，DGU12A在线真空脱气机，Class—up工
作站；中船七院二六所超声波清洗机，KL009袖
珍数显笔式酸度计。
中乌头碱、乌头碱、次乌头碱对照品质量分数分
别为98．5％、99．3％、99．2％，由中国科学院昆明植
物研究所提供；乙腈为色谱纯，三重蒸馏水(自制)，
其他试剂为分析纯；草乌药材来源见表1，经中国科
学院昆明植物研究所标本馆李锡文研究员鉴定。
2色谱条件
色谱柱：KormusilC18(250mm×4．6mm，5
pm)；流动相：乙腈一醋酸铵缓冲溶液(pH10，5)
(60：40)；体积流量：1．0mL／min；检测波长；240
nili；柱温?30℃。
3方法与结果
3．1对照品溶液的制备：精密称取对照品用乙腈配制
成中乌头碱0．14mg／mL、乌头碱0．068mg／mL、次
乌头碱0．124mg／mL的混合对照品溶液，冷藏备用。
3．2供试品溶液的制备：精密称取草鸟(块根)粉末
0．4g，置于磨口的三角瓶中，加入10％氨溶液0．4
mL，搅拌均匀，加入10mL乙醚，超声30min后补
加5mL乙醚，加入适量的氧化铝，放置过夜，滤过，
分别用5mL的乙醚洗涤3次滤渣．合并醚液，挥
干，用乙腈洗涤残渣定容为5mL，冷藏备用。
3．3分离效果考察：取上述对照品溶液与供试品溶
液，在上述色谱条件下进行，获得色谱图(图1)表
明：中乌头碱、乌头碱、次乌头碱能达到基线分离，分
离度≥1．5，可见3种生物碱问的分离效果较好，且
无其他成分干扰。K止
o 5””2025珊，n5 10”2025”
sl一中乌头碱S2鸟头碱$3-敬乌头碱
S1mesaconitineS2一aconitineS3hypaconitine
图1对照晶(A)和草乌样品(B)
HPLC色谱田
Fig．1HPLCChromatogramsfreferencesubshnees
(A)andRa ixAconitiKusnezoffii(B)
3．4线性关系的考察：精密吸取对照品溶液分别采用
2、5、10、15、20儿的进样量，按上述色谱条件测定峰
面积；以峰面积积分值为纵坐标，对照品的进样质量为
横坐标，绘制标准曲线，得回归方程分别为：中乌头碱
Y一529275X+56975，r一0．9991；乌头碱Y=859
404X+43376，r=0．9992；次乌头碱Y一68851
x+692 8，r=0．9990。线性范围分别为：0．03～
肇萋品羿：誓饕某：捣5)，男，河南开封人，硕士研究生，主要从事有机化学和天然药物化学的研究工作。
。通讯作者T“崔；(0秀87明6ⅪT88ell5：3(。687E6)8m8a8illt523h7a。￥!霈：isnaan．qcl03m7@vlpsi∞com
万方数据
HPLC法测定羌活中阿魏酸、羌活醇、苯乙基阿魏酸酯和异欧
前胡素
作者： 古丽娜·沙比尔， 郭洪祝， 郭慧， 马晓驰， 王炜， 果德安
作者单位： 古丽娜·沙比尔(北京大学药学院,北京,100083;新疆中药民族药研究所,新疆,乌鲁木齐
,830002)， 郭洪祝,郭慧,马晓驰,王炜,果德安(北京大学药学院,北京,100083)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(6)
被引用次数： 7次

参考文献(6条)
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