全 文 ：药 物 研 究
The medicine study
HPLC法测定羌活中紫花前胡苷的含量
黄育生1 袁贤琳2* 钟 瑜2 王汝俊1
1. 广州中医药大学脾胃研究所，广东 广州 510405;2. 广东省广州花海药业股份有限公司，广东 广州 510370
【摘 要】 目的:建立 HPLC法测定羌活中紫花前胡苷含量的方法。方法:HPLC 条件:色谱柱为 Agilent HC － C18 柱 (5μm，4. 6 ×
250mm) ，流动相为甲醇 －水 (32∶68) ，流速为 1. 0ml·min －1，检测波长为 335nm，柱温为 35℃。结果 紫花前胡苷范围为 4． 00μg·ml －1
～ 100. 00μg·ml －1，平均回收率为 99. 90%，RSD为 1. 50%。结论:该法操作简单，重现性好，结果准确，可作为羌活中紫花前胡苷的含
量测定方法提供参考依据。
【关键词】 羌活;紫花前胡苷;HPLC
【中图分类号】R284. 1 【文献标识码】A 【文章编号】1007 － 8517 (2013)10 － 0014 － 02
Determination of the contents of nodakenin in Notopterygii Rhizoma et Radix by HPLC
HUANG Yu － sheng1，YUAN Xian － lin2* ，ZHONG Yu，WANG Ru － jun1
Abstract:objective:To establish a method for determination of the contents of nodakenin in Notopterygii Rhizoma et Radix by
HPLC． Methods:The chromatographic condition:Agilent HC － C18 column (5μm，4. 6 × 250mm) ，CH3OH － H2O (32 － 68)
as mobile phase，the flow rate is 1. 0 ml·min －1，the detection wavelength is 335 nm，the column temperature is 35℃ ． Results:The
calibration curves showed good linearlty in the range of 4. 00μg·ml －1 ～ 100. 00μg·ml －1，the average recoveries is 99. 90%，RSD
is 1. 50% ． Conclusion:This method is simple，with exact result and good repeatiton and can be used as the references for determina-
tion of the contents of nodakenin of Chinese medicine qianghuo．
Key words:Notopterygii Rhizoma et Radix;nodakenin;HPLC
羌活为伞形科植物羌活 Notopterygium incisum Ting ex
H． T． Chang 或宽叶羌活 Notopterygium franchetii H． de
Boiss． 的干燥根茎和根。本品具有解表散寒，祛风除湿，
止痛的功效，常用于治疗风寒感冒，头痛项强，风湿痹痛，
肩背酸痛［1］。其主要成分有香豆素类成分 (如紫花前胡苷、
羌活醇及异欧前胡素等)、挥发油、阿魏酸等［2］。有研究表
明紫花前胡苷是羌活的有效成分，具有镇痛、抗炎作用［3］。
但是 2010 年版药典第一部只收载了羌活醇和异欧前胡素总
量的含量测定方法，且目前对于 HPLC 法测定羌活中的紫
花前胡苷含量的报道很少。本文研究建立了 HPLC 法测定
羌活中的紫花前胡苷含量，为羌活的质量控制及复方制剂
中羌活的有效成分转移率提供新的参考依据。结果表明本
方法操作简单，准确，重现性好。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪:SPD － 20A 紫外检测器，LC － 20AT
泵 (日本岛津公司) ;Sartorious BT 25S 电子天平 (北京赛
多利斯科学仪器有限公司) ;HH － 6 数显恒温水浴锅 (常
州澳华仪器有限公司) ;KQ － 100DE 型超声清洗器 (昆山
市超声仪器有限公司)。
羌活中药饮片 (批号 20100702，佛山市中药饮片厂有限公
司 );紫花前胡苷对照品 (批号 111821 －201102，中国食品药
品检定研究所);甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
2 色谱条件与系统适用性
Agilent HC － C18 色谱柱 (5μm，4. 6 × 250mm) ;流动
相:甲醇 －水 (32∶68) ;流速:1ml·min －1;柱温:35℃;
检测波长:335nm。紫花前胡苷峰与前后峰的分离度均在
1. 5 以上，理论板数按紫花前胡苷峰计算应不低于 3000。
3 实验方法与结果
3. 1 对照品溶液的制备 精密称取紫花前胡苷对照品，加
甲醇制成每 1ml含 40μg的溶液，即得。
3. 2 供试品溶液的制备 取药材粉末 (过三号筛)约
0. 5g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入 50%甲醇
50ml，称定重量，超声 30min。放冷，再称定重量，用 50%
甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液 25ml，
置于蒸发皿中，水浴蒸干，残渣用水约 20ml 使溶解，并转
移至分液漏斗中，用水饱和正丁醇萃取 4 次，每次 20ml，
合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至 25ml
量瓶中，稀释定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
3. 3 测定法 分别精密吸取对照品溶液 5μl 和供试品溶液
10μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，见图 1。
3. 4 线性关系考察 精密称取紫花前胡苷对照品 5. 00mg
置于 25ml的量瓶，用甲醇稀释至刻度，即得浓度为 0. 20mg
·ml －1的对照品溶液贮备液，分别精密量取上述贮备液
0. 2、0. 5、1、2、3、4、5ml，置于 10ml量瓶中，用甲醇稀
释至刻度，即 得 浓 度 为 4. 00、10. 00、20. 00、40. 00、
60. 00、80. 00、100. 00μg·ml －1的梯度对照品溶液，精密
量取上述梯度对照品溶液各 5μl，按上述色谱条件测定，以
对照品峰面积 Y 为纵坐标，对照品溶液 (μg /ml)为横坐
标，绘制标准曲线。结果表明:紫花前胡苷浓度在 4. 00μg
·ml －1 ～ 100. 00μg·ml －1范围内与峰面积具有良好的线性
关系，回 归 方 程 为:Y = 270. 85 + 1. 3598 × 104X， r
= 0. 9999。
3. 5 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液 5μl 连续进样
·41·
中国民族民间医药
Chinese journal of ethnomedicine and ethnopharmacy
药 物 研 究
The medicine study
6 次，记录峰面积，计算紫花前胡素峰面积的 RSD (n = 6)
为 0. 4%，表明仪器精密度良好。
3. 6 重复性试验 取同一批药材，按供试品溶液制备方法平
行制备 6组供试品溶液，按上述色谱条件测定，结果样品中紫
花前胡苷的平均含量 (n =6)为 0. 266%，RSD为 2. 9%。
3. 7 稳定性考察 取同一个供试品溶液，分别于 0、2、4、
6、8、10、12h进样，按上述色谱条件测定，结果紫花前胡
苷峰面积的 RSD (n = 7)为 0. 3%，表明供试品溶液在 12
小时内稳定。
3. 8 加样回收率试验 精密称取“3. 6”项下已知紫花前
胡苷含量的羌活药材粉末 (过三号筛)约 0. 25g，分取 6
份，精密称定，置于具塞锥形瓶中，分别精密加入浓度为
0. 0133mg·ml －1的对照液 50ml (精密称取紫花前胡苷对照
品 6. 65mg，置于 500ml量瓶，用 50%甲醇稀释至刻度，即
得浓度为 0. 0133mg·ml －1的对照液) ，称定重量，超声
30min。放冷，再称定重量，用浓度为 0. 0133mg /ml的对照
液补足减失的重量，摇匀，滤过，按“3. 2”项下方法制备
供试品溶液，按上述色谱条件测定，计算回收率，结果平
均回收率 (n = 6)为 99． 64%，RSD为 1． 22%。见表 1。
表 1 加样回收率试验测定结果
序号
取样量
(g)
样品中紫花前
胡苷含量 (mg)
加入对照
品量 (mg)
实测量
(mg)
回收率
(%)
平均回
收率 (%)
RSD
(%)
1 0. 2504 0. 6661 0. 665 1. 3155 97. 66
2 0. 2508 0. 6646 0. 665 1. 3405 101. 64
3 0. 2501 0. 6628 0. 665 1. 3247 99. 54 99. 90 1. 50
4 0. 2503 0. 6633 0. 665 1. 3219 99. 04
5 0. 2505 0. 6638 0. 665 1. 3422 102. 01
6 0. 2504 0. 6636 0. 665 1. 3255 99. 54
3. 9 样品测定 取产地为四川的羌活药材，共 5 批，按
“3． 2”项下的方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测
定，结果见表 2。
表 2 不同批次羌活的紫花前胡苷含量
序号 紫花前胡苷含量 (%)
1 0. 26
2 0. 06
3 0. 91
4 0. 11
5 0. 06
4 讨论
4. 1 样品萃取纯化 试验中发现，只对羌活进行超声处
理，供试品中杂质较多，而用水饱和正丁醇萃取之后与前
者比较，杂质大大减少，并且紫花前胡苷的含量无明显差
异，故从保护色谱系统，减少杂质干扰方面考虑，选择用
水饱和正丁醇处理纯化供试品溶液。试验比较结果亦表明
萃取四次后，第五次的萃取液几乎不含紫花前胡苷。
4. 2 样品提取方法的选择 试验中对加热回流提取 1h 和
超声处理 30min的样品中的紫花前胡苷提取效果进行对比，
结果表明两种方法对紫花前胡苷的提取效果无明显差异，
但超声处理方法简便快捷，故选择超声处理 30min。
4. 3 提取溶剂的选择 试验中对比了甲醇和 50%甲醇对紫
花前胡苷提取效果的影响，结果表明，两者对紫花前胡苷
的提取效果无明显差异，故从成本及环保等方面考虑，选
择 50%甲醇为提取溶剂。
4. 4 超声时间的选择 试验中对比了 20、30、40min 三个
超声时间对紫花前胡苷提取效果的影响，结果表明 30min
和 40min的提取效果无明显差异，而比 20min 的提取效果
略高，故选择超声处理 30min。
4. 5 吸收波长与流动相比例选择 取紫花前胡苷对照品的
甲醇溶液，在紫外分光光度计 190 ～ 400nm波长扫描。结果
在 335nm波长处有最大吸收，故选择 335nm 为本品的测定
波长，见图 2。
流动相甲醇 －水的比例调节为 32:68 时，紫花前胡苷
峰与前后峰的分离度均大于 1. 5。
4. 6 孙玉茹等［4］的研究，流动相为甲醇 －水 －乙腈 (6∶ 71
∶21)测定羌活中紫花前胡苷含量，紫花前胡苷的保留时间
较小，试验中发现，供试品杂质较多，较小保留时间可能
会有峰的重叠，分离度不符合要求。朱美晓等［5］的研究，
以乙腈 －水 (15∶85)为流动相，使用不同色谱柱 Phenome-
nex Synergi 4u Hydro － RP C18，Phenomenex Luna C18 和 Agi-
lent Extend － C18 测定羌活中紫花前胡苷含量，只有 Phe-
nomenex Synergi 4u Hydro － RP C18 能达到最佳分离效果，
而其他色谱柱都不能有效分离。而本试验使用 Agilent HC －
C18 色谱柱 (5μm，4. 6 × 250mm) ，以甲醇 －水 (32 ∶ 68)
亦能达到有效分离。
某些中药亦含有紫花前胡苷，如紫花前胡、前胡等，
并有 HPLC 法紫花前胡苷含量测定的相关标准［6］文献
报道［7］。
本试验参考上述相关标准及文献的方法，考察各个因
素对紫花前胡苷提取效果及 HPLC 色谱分离效果的影响，
最终优化建立了 HPLC 法测定羌活中紫花前胡苷含量的方
法，该法操作简单，重现性好，结果准确，可作为羌活中
紫花前胡苷的含量测定方法提供参考依据。尤其是中药复
方制剂成分复杂，使用水饱和正丁醇萃取可有效地纯化紫
花前胡苷，减少杂质，这对含羌活的复方制剂的质量控制
有重大的参考意义。
参考文献
［1］ 国家药典委员会． 中华人民共和国药典 (一部)． 北京:中国医药科技
出版社，2010:170．
［2］ 李云霞，高春华． 中药羌活化学成分及药理作用研究进展 ［J］． 辽宁
中医学院学报，2004，6 (1) :22 － 23．
［3］ 秦彩玲，张毅，刘婷，等． 中药羌活有效成分的筛选试验 ［J］． 中国
中药杂志，2001，25 (10) :639．
［4］ 孙玉茹，李先端，孙有富． 高效液相色谱法测定不同产地羌活中紫花前
胡苷的含量 ［J］． 中国中药杂志，2001，26 (11) :737．
［5］ 朱美晓，陈燕，易进海，等． 羌活药材薄层色谱鉴别与含量测定 ［J］．
时珍国医国药，2011，22 (1) :116 － 117．
［6］ 国家药典委员会． 中华人民共和国药典 (一部)． 北京:中国医药科技
出版社，2010:317 － 318．
［7］ 徐勤，刘布鸣． 高效液相色谱法测定前胡属植物中紫花前胡苷的含量
［J］． 中国中药杂志，2000，25 (12) :731 － 732．
(收稿日期:2013. 03. 26)
·51·
中国民族民间医药
Chinese journal of ethnomedicine and ethnopharmacy