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Biotransformation of polyphyllins by Curvularia lunata fermentation

新月弯孢霉对重楼皂苷的生物转化



全 文 :·978· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第7期2005年7月
离子ESI—MS给出m屈:4191-M—H]一,提示相对分
子质量为420。uV图谱E(CH。oH)k;]显示在223、
282nm处有吸收(19e分别为4.58和4.71)。
1H—NMR(TMS/CDCl。)艿:13.01(1H,s,OH一5),
8.54(1H,s,OH一47),8.00(1H,s,H一2),7.03(1H,
d,J一8.6Hz),6.75(1H,d,J一10.0Hz),6 56
(1H,d,J一2.5Hz,H一37),6.48(1H,dd,J一8.4,
2.5Hz,H一57),5.66(1H,d,J一10.0Hz,H一3”),
5.17(1H,tt,J一7.3,1.3Hz H一2”),3.42(2H,d,
J一7.3Hz,H一1”),1.81(3H,s,Me一4”),1.68(3H,
s,Me一5”),1.47(6H,s,Me一5”,6”);”C—NMR(TMS/
CDCl。)艿:182.4(C一4),158.2(C一67),157.8(C一7),
157.4(C一47),154.9(C一2),154.6(C一9),154.5(C一
5),132.0(C-3”),130.7(C一27),128.5(C一3”),122.8
(C一3),121.6(C一2”),115.7(C一4”),112.6(C一17),
108.6(C一3’),107.7(C一8),106.4(C一57),106.0(C一
6),105.3(C一10),78.3(C一2”),28.3(C一5”,6”),25.7
(C一5”),21.3(C一1”),17.9(c一4”),氢谱和碳谱数据
与文献值对照[3],确定化合物Ⅷ为5,27,47一三羟基一
8一(3,3一二甲基烯丙基)一2”,2,,-二甲基吡喃[5,6:6,
7]异黄酮。
化合物Ⅸ:黄色针状结晶(甲醇一水),mp200
201℃。盐酸一镁粉反应呈阴性。H:SO。显黄色,FeCt。
反应显阳性。正离子ESI—MS给出m/z:405EM+
H]+,负离子ESI—MS给出m/z:403[M—HI一,提
示相对分子质量为404。UV图谱E(CH。OH)Am。;]显
示在225、273、358mitt处有吸收(19£分别为4.42、
4.83和3.52)。氢谱和碳谱数据与文献值对照[3],确
定化合物Ⅸ为5,4-二羟基一6一(3,3一二甲基烯丙基)一
2”,2,,_二甲基吡喃[5,6:7,8]异黄酮。
致谢:本课题在深圳中药及天然药物研究中心
完成,核磁数据由张雪测定,质谱数据由高昊测定。
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新月弯孢霉对重楼皂苷的生物转化
冯 冰,马百平。,康利平,熊呈琦,王升启
(军事医学科学院放射医学研究所,北京100850)
摘要:目的寻找选择性水解甾体皂苷C一3位糖链末端糖基的微生物,同时制备甾体皂苷的去糖基衍生物。方法
利用新月弯孢霉(3.4381)培养,对C一3位有双糖基结构的甾体皂苷类化合物重楼皂苷V(化合物I)、重楼皂苷
Ⅵ(化合物Ⅱ)进行生物转化;用反相C。。开放柱进行转化产物的分离纯化,波谱方法鉴定其结构。结果新月弯孢
霉(3.4381)均能将化合物I和化合物IC一3位糖链末端的鼠李糖水解,转化为单糖基皂苷,转化产物分别鉴定为
薯蓣皂苷元一3一O—B—D一吡喃葡萄糖苷,即延龄草苷(trillin,化合物Ⅲ)和偏诺皂苷元一3一O—pD一吡喃葡萄糖苷(化合物
N)。结论首次发现新月弯孢霉(3.4381)对重楼皂苷V和重楼皂苷ⅥC一3位糖链的末端鼠李糖具有较强的水解
能力。
关键词:新月弯孢霉;重楼皂苷V;重楼皂苷Vl;生物转化
中图分类号:R284.1 文献标识码:A 文章编号:0253—2670(2005)07—0978—05
收稿日期:2004—09—20
作者简介:冯冰(1961一),女,河南开封人,现于军事医学科学院放射医学研究所攻读博士学位,主要从事天然药物生物转化研究。
*通讯作者马百平Tel:(010)66930265E—mail:ma—br,@sohu.com
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第7期2005年7月·979·
BiotransformationfpolyphyllinsbyCurvularialunatafermentation
FENGBing,MABai—ping,KANGLi—ping,XIONGCheng-qi,WANGSheng-qi
(InstituteofRadiationMedicine,AcademyofMilitaryMedicalSciences,Beijing100850,China)
Abstract:ObjectiveTofindthemicroorganismswhichhydrolyzesugarresiduesofsteroidalsaponins
atC一3positionandtoobtaintheirglucosyl—derivatives.MethodsThenzymess cretedbyfermentation
ofCurvularialunata(3.4381)intheculturemediumwereemployedtotransformp lyphyllinV(corn—
poundI)andpolyphyllinVI(compoundⅡ).Theproductswer eparatedbymeansofchromatography
onC18columnandtheirstructureswereelucidatedon hebasisofspectralanalyses.ResultsCompounds
IandⅡcouldbetransformedbyC.1unata(3.4381)andthemainproductswereidentifiedasdiosgenin一
3—0一pD—glucopyranoside,namedtr lli (compound11I)andpennogenin一3一O一8一D—91ucopyranoside(com—
poundIV),respectively.ConclusionTheterminalrhamnosylsofpolyphyllinVandpolyphyllinVIatC一
3positioncouldbehydrolyzedsel ctivelybyC.1unata(3.4381)forthefirsttime.
Keywords:Curvularial n ta(Wald.)Boed;polyphyllinV nVI;h otransformation
重楼为百合科植物云南重楼Parispolyphylla
var.yunnanensis(Franch.)Hand.一Mazz.或七叶
一枝花P.polyphyllaSmithvar. chinensis
(Franch.)Hara的干燥根茎,具有清热解毒、消肿
止痛、凉肝定惊等功效[1],是著名中成药云南白药、
季德胜蛇药片等的主要组成药物。近年研究表明该
属植物具有止血、抗肿瘤、抗生育、免疫调节及心血
管等多方面的生理活性[2]。重楼皂苷V(化合物I)
和重楼皂苷Ⅵ(化合物Ⅱ)为重楼根茎中的甾体皂苷
类化合物,分别由薯蓣皂苷元(diosgenin)和偏诺皂
苷元(pennogenin)的C一3位与1分子葡萄糖相连,
葡萄糖的2位再和一分子鼠李糖连接成苷,见图1。
新月弯孢霉
+-————————{
G1
图1化合物I和Ⅱ的酶解生物转化途径
Fig.1Biotransformationpathwayofcompounds
I andⅡbyC.1unata
新月弯孢霉Curvularialunata(Wald.)Boed
是具有很强的11p一羟基化酶系,被普遍用于甾体
11p羟基化反应的生产,生物合成皮质激素药物氢
化可的松[3叫]。但该菌株对皂苷糖基的水解能力目
前尚未见研究报道。本实验采用新月弯孢霉
(3.4381)在培养过程中产生的酶系,对化合物I和
化合物ⅡC一3位糖链进行了选择性水解研究,得到
两种单糖基甾体皂苷,为拓宽该菌株的应用范围、寻
找选择性糖苷酶奠定了基础。
1实验材料
1.1 实验材料及试剂:菌种:新月弯孢霉C.1una—
ta:3.4381,购于中国科学院微生物研究所。培养
基:A.斜面固体培养基:马铃薯汁100mL、葡萄糖
2g、琼脂2g;B.发酵培养基:(1)马铃薯浸汁100
mL,葡萄糖2g。(2)玉米浆1.2g、葡萄糖1g、酵母
膏0.2g、硫酸铵0.5g,水100mL。底物:化合物I
和n由重楼中提取分离得到(本实验室自制)。
1.2实验仪器及试剂:MicromassZab pec高分辨
磁质谱仪;VarianUNlTYI OVA600超导核磁共振谱
仪(13C—NMR为150.8Hz,1H—NMR599.8Hz),溶
剂为氘代吡啶;Agilent1100高效液相色谱仪,色
谱:AlltechApolloC18柱(250mm×4.6mm,5
肛m),检测器:AlltechELSD2000,温度:100℃,气
流量:2.4L/min;隔水式恒温培养箱9080,上海一
恒科技有限公司;HzS—H水浴振荡器,哈尔滨东联
电子技术开发有限公司;高速冷冻离心机3K18,
Sigma公司;甲醇:色谱纯,正丁醇和丙酮:分析纯,
均为北京化工厂产品;玉米浆:华北制药康欣有限公
司产品;制备C。。柱填料为Et本YMC公司产品,批
号:5409;薄层硅胶预制板GF254(厚度0.2~0.25
mm,规格100mm×200mm)和薄层色谱硅胶均为
青岛海洋化工厂生产。
2实验方法
2.1底物的制备:重楼切片,60%乙醇溶液回流提
取3次,合并滤液,减压浓缩。浓缩液用水饱和的正
丁醇萃取3次,合并萃取液,真空浓缩干燥,得重楼
总皂苷。总皂苷用少量甲醇溶解后,按总皂苷与硅胶
质量比为1:2加入薄层硅胶,拌匀蒸干,按上样量
万方数据
·980· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第7期2005年7月
与硅胶质量比1:50采用硅胶干柱(20cm×2cm)
色谱分离,氯仿一甲醇一水溶液梯度洗脱:收集45~48
份和63~64份洗脱液分别合并,浓缩,得单体化合
物I和Ⅱ。
2.2菌株的斜面培养:在无菌条件下,将新月弯孢
霉接种于马铃薯琼脂斜面培养基上,(29±1)℃恒
温培养箱中培养5~7d。
2.3转化培养方法
2.3.1发酵培养:斜面培养菌株,以无菌水洗下孢
子,孢子悬浮液按体积分数3%~5%接种量接种到
液体培养液内,恒温摇床(29±1)oC,150~180r/
min振荡培养24h。
2.3.2转化培养:发酵培养液内按质量体积比投入
0.05014~0.1%预处理的底物(添加0.1%聚山梨
酯_80,3min超声处理),恒温摇床(29±1)℃,
150~180r/rain振荡培养72h。
2.4转化产物的提取分离及纯化
2.4.1培养液与菌丝同时萃取:在培养完全的培养
液中直接加入等量正丁醇进行萃取,同法操作4次,
合并正丁醇溶液,真空浓缩干燥,得转化产物粗品。
2.4.2菌丝、培养液超声萃取:培养液以12000r/
min离心,分离菌丝、培养液。菌丝按质量体积比1:
0.5加入正丁醇萃取,超声3min;培养液中加入等
量正丁醇萃取,同法操作4次。合并正丁醇溶液,减
压浓缩干燥,得转化产物粗品。
2.4.3菌丝、培养液萃取:培养液以12000r/min
离心,分离菌丝、培养液。菌丝按质量体积比1:0.5
加入正丁醇萃取;培养液中加入等量正丁醇萃取,同
法操作4次。合并正丁醇溶液,减压浓缩干燥,得转
化产物粗品。
2.4.4转化产物的分离纯化:用C。。开放柱进行分
离。50%丙酮溶解转化产物粗品,加入50%丙酮平
衡好的C。。柱,依次用50%、60%、70%、85%丙酮溶
液进行梯度洗脱,分步收集洗脱液,TLC和HPLC
检测合并相同组分,得转化产物的单体化合物。
2.5分析检测
2.5.1TLC检测:分别将化合物I对照品、化合物
Ⅱ对照品、化合物I转化产物、化合物Ⅱ转化产物和
不加新月弯孢霉的空白对照样品点样于硅胶预制
板,氯仿一甲醇一水(70:15:2)展开,挥干后喷10%
硫酸乙醇溶液,110℃下加热显色。
2.5.2HPLC检测:将转化产物粗品用甲醇溶解后
滤过,HPLC分析。流动相梯度洗脱,条件为:o~9
min,甲醇一水(80:20);9~16rain,甲醇一水(90:
10);16~20min,甲醇一水(95:5);22min以后,甲
醇一水(80:20)。
3结果与讨论
3.1 TLC分析结果:两种底物,即化合物I、化合
物Ⅱ的酶解反应均有新的斑点产生,而不加微生物
的空白对照均没有新的斑点;结果显示,两种主要转
化产物的极性小于底物,大于相应的皂苷元。说明化
合物I和Ⅱ在转化过程中发生了变化,有新的化合
物产生。
3.2 HPLC分析结果:见图2。化合物I为底物时,
化合物Ⅲ为主要转化产物。化合物1I为底物,化合物
IV为主要转化产物。主要转化产物(化合物111和Ⅳ)的
极性较底物小,说明可能是由新月弯孢霉选择性水解
底物(化合物I和Ⅱ)的糖基而产生的新化合物。
1一化合物I(重楼皂苷V)2-化合物I(重楼皂苷V转化产物)
3一化合物l(重楼皂苷Ⅵ)4-化合物Ⅳ(重楼皂苷Vl转化产物)
1-compoundI(polyphyllinV)2-compoundⅢ
(productsofpolyphyllinV)3-compoundI(polyphyllinV1)
4-compoundB/(productsofpolyphyllinV1)
图2化合物I(A)和II(B)转化后的HPLC图谱
Fig.2HPLCofbiotransformationfcomp unds
I(A)andⅡ(B)
3.3转化产物的分离:将两种转化产物粗品分别进
行C。。开放柱柱色谱分离,用不同体积分数的丙酮水
溶液梯度洗脱,其中化合物I转化产物的43~45份
(70%丙酮部分)和化合物Ⅱ转化产物的31~35份
(60%丙酮部分)分别合并,减压浓缩,冰干,得单体
化合物Ⅲ和IV。
3.4结构鉴定:化合物ni:无色针状结晶(EtOH),
易溶于吡啶,可溶于甲醇、乙醇。Liebermann—Bur—
chard、Molish反应呈阳性,表明该化合物为甾体皂
苷。FAB—MS(m/z):577.3(M+H)+,415.2(M+
H一162),397.2(M+H—H20一162),表明化合物
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万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第7期2005年7月·981·
Ⅲ只含有一个六碳糖;1H—NMR艿:0.68(3H,d,J一
5.7Hz,CH3—27),0.82(3H,S,CH3—18),1.05(3H,
S,CH3—19),1.13(3H,d,,一7.0Hz CH3—21)为苷元
上4个甲基质子的特征化学位移,d:5.23(1H,d,
,一7.7Hz)为糖的端基质子的化学位移,且为p苷
键连接,艿:5.42(1H,brS,H一6)为5、6位双键中6位
氢的化学位移;13C—NMR的数据见表1。以上数据与
文献报道的薯蓣皂苷元一3一O—pD一吡喃葡萄糖苷数
据相同[5]。
表1化合物Ⅲ和Ⅳ的”C—NMR数据
Table1”C—NMRSpectraldataofcompoundsⅢand1V
化合物Ⅳ:无色针状结晶(EtOH),易溶于吡啶,
可溶于甲醇、乙醇。Liebermann—Burchard、Molish
反应呈阳性,表明为甾体皂苷类化合物。FAB—MS
(m/z):593.2(M+H)+,575.2(M+H—H20),
431.2(M+H一162),413.2(M+H—H20~162),
表明化合物IV只含有一个六碳糖,且比化合物Ⅲ多
一活泼羟基;1H—NMR艿:0.67(3H,d,J一5.7Hz,
CH3—27),0.93(3H,S,CH3—18),0.95(3H,S,CH3—
19),1.22(3H,d,J一7.14Hz,CH3—21)为苷元上4
个甲基质子的特征化学位移,艿:5.03(1H,d,,一
7.69Hz)为糖的端基质子的化学位移,且为p苷键
连接,艿:5.29(1H,brS,H一6)为5、6位双键中6位氢
的化学位移,13C—NMR的数据见表1。数据与文献报
道偏诺皂苷元一3一O—日一D一吡喃葡萄糖苷数据相同[6]。
通过结构鉴定确定,两种主要转化产物分别为
底物选择性去掉3一位末端鼠李糖基的薯蓣皂苷元一
3一O—p—D一吡喃葡萄糖苷和偏诺皂苷元一3一O一|3一D一吡
喃葡萄糖苷。
3.5转化条件及萃取方法的优化
3.5.1不同液体培养基比较:选用2种培养基,即
培养基(1)、培养基(2),在相同培养条件下进行对比
试验,TLC分析结果显示,采用培养基(1)转化产物
的转化率大约为底物的15%左右(图3),而采用培
养基(2),底物几乎完全被转化(图3)。
1一化合物Ⅱ 2化合物I转化严物3一化合物Ⅱ转化产物
1一compoundⅡ2-transformedproductsofcompoundI
3-transformedproductsofcompoundI
图3培养基(1)和(2)转化的化合物I和Ⅱ的TLC图谱
Fig.3TLCoftransformedco poundsI
andⅡbymedia(1)and(2)
3.5.2不同萃取方法比较:同底物、同菌株、相同培
养条件下平行实验,分别采用萃取方法2.4项下提
取转化产物,HPLC分析,将转化产物与底物相比
较,以转化产物的转化率为指标,结果3种方法的转
化率分别为18.3%、2.3%、40.2%,表明2.4.3项
下方法所得产物转化率最高。
4讨论
通过薄层色谱、液相色谱和结构鉴定结果可
看出,微生物新月弯孢霉(3.4381)能将化合物I和
ⅡC一3位末端的鼠李糖基水解掉,转化为相应的单
糖基皂苷,即薯蓣皂苷元一3~O一|B—D一吡喃葡萄糖苷和
偏诺皂苷元一3一O—B—D一吡喃葡萄糖苷。同时,通过对
培养基、萃取方法的筛选、优化,提高了转化率。
本实验室在此基础上 同时又选择了3位末端
万方数据
·982· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第7期2005年7月
具有鼠李糖的3种甾体皂苷,即重楼皂苷I、重楼皂
苷Ⅱ、纤细薯蓣皂苷作为底物,采用新月弯孢霉
(3.4381)进行生物转化研究,初步实验结果表明,
该菌株具有水解末端鼠李糖的能力,且选择性较高。
目前,进一步的研究工作正在进行。
本实验首次发现了C.1unata(3.4381)对甾体
皂苷的C一3位糖链末端糖基的选择性水解活性,为
甾体皂苷去糖基衍生物的制备提供了有力工具,也
为拓宽该菌株的应用范围提供了依据。
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南板蓝根的化学成分研究
吴煜秋,钱斌,张荣平。,邹澄,刘 光
(昆明医学院药学院,云南昆明 650031)
南板蓝根为中国华南和西南地区的常用中药,
来源于爵床科马蓝属植物马蓝Strobilanthescusia
(Nels)Bremlk.的根及根茎(茎)。《中国药典》自
1995年版起将其作为新增中药品种收载。南板蓝根
性寒、味苦,归心、胃经,具有清热解毒凉血的功效,
用于温病发斑,丹毒;流感,流脑等。南板蓝根的化学
成分报道有白桦脂醇、羽扇豆醇、羽扇烯酮和大黄酚
等[1’2]。笔者目前从石油醚部分得到3个甾醇类化合
物和1个三萜类化合物,分别鉴定为豆甾醇一5,22一
二烯一二烯一3S,7口一二醇(I)、豆甾醇一5,22—38,7a一二
醇(1I)、p谷甾醇(n1)和羽扇烯酮(Ⅳ)。其中前两个
化合物系首次从南板蓝根中得到,也未见其在南板
蓝根来源植物马蓝中报道过。有关文献报道这两个
化合物具有一定的抗肿瘤活性[3]。
化合物I:白色粉末,在Liebermann—Burchard
反应中呈现红一紫一蓝一绿等颜色变化,示为甾体
类化合物,TLC显蓝色斑点(15%硫酸)。13C—NMR
谱中显示有29个碳信号,DEPT谱表明它们为6个
甲基(312.3,19.4,21.5,21.5,20.2和12.6),8个
亚甲基,12个次甲基(包括两个羟基碳372.1和
73.8和3个双键碳艿127.4,139.8,130.6)和3个季
碳(包括一个双键碳3144.1)。结合EI—MS所提供
的相对分子质量428,可推断化合物1分子式为
C。。H。。O。,6个不饱和度分别被2个双键和甾醇的4
个骨架环所承担。1H—NMR谱特征的艿o.71和1.05
归属为C一18和C一19两个角甲基的氢信号,艿o.85
(3H,d,,一6.6Hz)和0.81(3H,d,J一6.6Hz)归属
为C一26和C一27两个偕甲基的氢信号,同时艿5.29
(1H,t,J一2.0Hz,H一6)及d5.03(1H,ddJ,一15,
J2—8.5Hz,H一23)和艿5.17(,l一15,J2—8.5Hz)确
认了两组双键的存在,并提示有1组双键为反式结
构。对照文献报道[4’5],进一步确认化合物I为豆甾
醇一5,22一二烯一3p,7p二醇。
化合物Ⅱ:白色粉末,Liebermann—Burchard反
应呈现与化合物I类似的颜色变化,在TLC中与化
合物I蓝色斑点成对出现,Rf值仅相距0.03。El—
MS给出与化合物I相同的相对分子质量428。将化
合物Ⅱ的光谱数据与化合物I进行比较发现,两者
结构类型十分相似,可能互为异构体。在13C—NMR
谱中观察到C一7向高场位移△37.9,推断两者不同
之处在于C一7位的羟基构型。C一6、C一8、C一9分别向
高场位移△艿2.4,2.7,4.1也证实了C,一OH立体构
型的改变。对照文献报道[4’5],进一步确认化合物Ⅱ
为豆甾醇一5,22一二烯一3B,7a一二醇,它和化合物I互
为对映异构体。
1仪器和材料
收稿日期:2004—10-28
作者简介:吴煜秋(1979一),女,江苏南京人,硕士研究生,主要方向为中药的化学成分研究。
*通讯作者张荣平Tel:(0871)5338784Fax:(0 71)5338894
万方数据
新月弯孢霉对重楼皂苷的生物转化
作者: 冯冰, 马百平, 康利平, 熊呈琦, 王升启, FENG Bing, MA Bai-ping, KANG Li-
ping, XIONG Cheng-qi, WANG Sheng-qi
作者单位: 军事医学科学院放射医学研究所,北京,100850
刊名: 中草药
英文刊名: CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年,卷(期): 2005,36(7)
被引用次数: 10次

参考文献(6条)
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本文读者也读过(5条)
1. 康利平.马百平.王煜.张洁.熊呈琦.谭大维.KANG Li-ping.MA Bai-ping.WANG Yu.ZHANG Jie.XIONG Cheng-qi.
TAN Da-wei 穿山龙中甾体皂苷的分离鉴定[期刊论文]-中国药学杂志2005,40(20)
2. 全波.马百平.冯冰.熊呈琦.王永泽.康利平.张洁.阎浩林.QUAN Bo.MA Bai-Ping.FENG Bing.XIONG Cheng-Qi.
WANG Yong-Ze.KANG Li-Ping.ZHANG Jie.YAN Hao-Lin 米曲霉(Aspergillus oryzae)对原薯蓣皂苷的生物转化[期
刊论文]-中国天然药物2006,4(5)
3. 齐珊珊.董悦生.刘琳.修志龙 米曲霉转化盾叶薯蓣中的甾体皂苷生成薯蓣皂苷元的工艺优化[会议论文]-2008
4. 兰洁.李锐.韩丽.杨明.王瑾.LAN Jie.LI Rui.HAN Li.YANG Ming.WANG Jin 泡沫分离法分离重楼中重楼皂苷的
工艺研究[期刊论文]-中草药2008,39(1)
5. 王宝庆.李学彬.田志发.孙凯云.邢桂菊.高文远 穿山龙现代研究概况[期刊论文]-中国林副特产2010(5)

引证文献(10条)
1.赵娜夏.韩英梅.张士俊 穿龙薯蓣中抗血栓活性成分研究[期刊论文]-中草药 2011(4)
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3.刘增兵.孙华.和朝军.付玉婉.王敏 新月弯孢霉KA-91转化异羟基洋地黄毒苷元的研究[期刊论文]-化学与生物工
程 2010(4)
4.白瑞 生物转化和生物合成在中药活性成分研究中的应用[期刊论文]-安徽医药 2010(12)
5.王丽娟.王敏.温竹.刘增兵 三种真菌对洋地黄毒苷的生物转化特性研究[期刊论文]-天津科技大学学报 2008(3)
6.郑丽娜.张明春 中药有效成分的酶法生物转化[期刊论文]-时珍国医国药 2010(10)
7.许明淑.郭兰萍.赵无恙.杨光 酶工程技术在中药活性成分获得中的研究进展[期刊论文]-中国实验方剂学杂志
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9.卢明娥.余旭亚.孟庆雄.王亚明 生物转化植物抗肿瘤药物的研究进展[期刊论文]-食品工业科技 2011(12)
10.刘学湘.陈建伟 中药有效成分生物转化的研究进展[期刊论文]-食品与生物技术学报 2008(2)


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