全 文 ：中草蔼ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第4期2006年4,el-505·
木蝴蝶中黄酮类化合物的HPLC—ESI—MS分析
缪建荣“2，杨红美“3，曾建国2，陈波3，严付华“3
(1．湖南省药品检验所．湖南长沙410001；2．湖南九汇现代中药有限公司，湖南长沙410331
3．湖南师范大学化学研究所．湖南长沙410081)
摘要：目的建立木蝴蝶中黄酮类化合物的HPI。C—ESI—MS分析方法．鉴定木蝴蝶中的黄酮类化合物。方法色谱
柱：HypersilCL8(250mm×4．6mm，5pm)；流动相：0．5％甲酸水溶液(A)、乙腈(B)，梯度洗脱；紫外检测波长范围：
1 95-，400am；采用正离子检测模式。结果术蝴蝶中的6个黄酮类化台物获得了良好的分离与检测。通过与对照品
的保留时间、正离子质谱比较鉴定和测定黄芩苷和白杨索的量，同时根据正离子质谱数据和文献数据分析推断了4
个黄酮化台物。结论奉方法准确快速．适合木蝴蝶中黄酮类化合物的鉴定，可用于术蝴墚原药材的质量控制。
关毽词：术蝴蝶；HPLC—ESI—MSI黄酮
中图分类号：R284．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2006)04—050504
AnalysisofflavonoldsinseedsofOroxylumindicumbyHPLC—ESI—MS
MIAOJian—run912，YANGHong—mei2～．ZENGJian—guo2，CHENB03，YANFu—hua2
3
(1HunanInstituteforDrugControl，Changsha410001．China；2．HunanJiuhuiModernChineseMateriaMedicaCo．．
Ltd．，Changsha4j0331，China；3，InstituteofChemistry，HunanNormalUniversity，Changsha410081，Chin )
Abstract：ObjectiveToestablishanHPLC—ESI—MSmethodf rsimultaneousanaly isattdetermina—
tionofflavonei theseedsofOroxylumindicum．MethodsTheseparationwasperformedbyHypersilC18
column(250mm×4．6mm，5”m)withamobilephaseofformicaeidaqueoussolution(A)andacetoni—
trile(B)0．5％．TheflowratWaS1．0mI。／mina detectionwavelengthwasat195—400nrrl．Thesam—
plesweteanalyzedinpositivemode．ResultsSixflavonesi theseedsof0．indicumco ldbeseparatedin
onerun，Baicalin。ehrysin一7一glueuronide，oroxylinA，andba calin一7一O—glucosidehadbeententatively
identifledbyESI—MSandreferencedata．ConclusionBe desquantificationofthec mponents，thisnew
methodsurpassespr viouslypublishedon sinproductqualitycontrolwithaccurateandrapida vantage，
andprovidestheHPLCchromatographicfingerprintsofbiologicalactivecomponentsintheseedsof0．in
dicum．
Keywords：Oroxylumindicum(L．)Vent．；HPLC—ESI—MS；flavone
木蝴蝶为紫葳科植物本蝴蝶Oroxylumin。
dicum(I。．)Vent．的干燥成熟种子。秋、冬二季采
收成熟果实，曝晒至果实开裂，取出种子，晒干。具有
清肺利咽、疏肝和胃的功效用于肺热咳嗽、鼻庳、喑
哑、肝胃气痛“一。具有药理活性化学成分脂肪油、黄
芩苷元一7一葡萄糖苷、黄芩苷、黄芩苷元、千层纸素
A、木蝴蝶苷B、白杨素、白杨索7一葡萄糖醛酸苷等
黄酮类化合物o]。目前关于木蝴蝶中黄酮类化合物
的分析报道很少，主要以紫外分光光度法检测和
HPI，C—UV检测为主，HPLCuV基本上是单个成
分的量的测定o]。
液质联用技术(HPLC—MS)是目前广泛应用的
分析方法之一。它利用液相色谱的高效分离能力对
分析物进行分离，再以质谱为检测器在线提供化合
物的相对分子质量信息。HPI，C—UV—MS能充分发
挥色谱的分离能力，并具有质谱的高分辨特性，可得
到保留时间、紫外响应、荷质比响应这样的三维信
息，很适合于分析检测中草药这样的多组分复杂体
系。本实验首次采用HPLC—ESI—MS测定木蝴蝶中
的黄芩苷和白杨素的量，同时根据MS数据、保留时
间、紫外响应和文献资料的比较，鉴定了4个黄酮化
合物：黄芩素、白杨素一7—0一葡萄糖苷酸、黄芩苷元一
7一葡萄糖苷、千层纸素A。此方法可应用于木蝴蝶原
药材和提取物的质量控制以及复方中的黄酮类化合
檠莩暑荠；鏊薹藁：鬣4一)，男，江苏张家港人，副主任药师，研究方向为植物提取物厦质鞋控制。
Tel：(0731)3280779Email=lrmiao@yahoocorn．c”
万方数据
中草荡ChineseTraditionalandHerbDrugs第37卷第4期2006年4月
物的研究。
1实验部分
1．1 仪器与试剂：Waters2695分离单元，Waters
996PDA检测器，WatersZQ2000质谱检测器
(Waters，美国)，色谱纯乙腈f湖南化工研究院精细
化工研究所)，甲酸(上海三浦化工有限公司)，重蒸
馏水(自制)，木蝴蝶药材(云南，由湖南师范大学张
建中教授鉴定)，质量分数大于99％的黄芩苷和白
杨素对照品购自Sigma公司。
1．2 液相色谱一质谱条件：色谱柱：HypersilC。。
(250mm×4．6mm，5pm)，流动相：A：0．5％甲酸
水溶液，B：乙腈，进行梯度洗脱，梯度条件为前3
min内A为80％呈线性变到20％，后19rain内A
由80％呈线性变到20％进样前，柱子用初始流动相
平衡10rain，分析完一个样以后，用100％乙腈冲洗
色谱柱；体积流量：1．0mL／min；检测波长：195～
400nm；柱温：30℃；进样体积为10pL。
质谱条件；用电喷雾离子化正离子采集模式
(ESI+)，m止范围：150～550amu，毛细管电压：
3．5kV，锥}L电压：20V，萃取电压：5．0V，源温度：
120C，脱溶剂温度：250℃，脱溶剂气：300L／h，锥
孔反吹气：50I。／h。
l，3校正曲线的绘制：取白杨素与黄芩苷对照品各
10mg于50mL量瓶中，加甲醇溶解，得0．200mg／
mL标准储备液，取该混合溶液逐渐稀释得到最终
质量浓度分别为0．2、0．4、2．5、5、10、20pg／mL标
准系列溶液。每个浓度的样品分析3次，所得峰面积
的平均值对浓度做曲线，得到黄芩苷和白杨索的校
正曲线。
1．4样品处理：将木蝴蝶药材粉碎，称取1g，用20
mL甲醇超声提取5rain，离心后取出上清液，残渣
再用20mL甲醇提取一次，合并提取液，再用甲醇
将提取液定容于50mL量瓶，过0．45／Lm膜，滤液
直接进色谱系统分析，进样量为10“L。
2结果与讨论
2．1流动相的选择：在建立分析方法的过程中以乙
腈、水为流动相，用等度淋洗无法同时分离上述6种
物质，而按梯度淋洗方法可以达到基线分离但峰形
较差。因此往流动相中加1％、0，5％、0．1％的甲酸
改善峰形，结果发现0．5％甲酸的效果最佳。流动相
中加入0．1％磷酸也可以达到相同的效果，但是磷
酸为非挥发性酸，污染质谱检测器的离子源，因此流
动相中的添加剂为甲酸。
2．2质谱条件的优化：为了使各个物质都能够达到
最佳的质谱响应，优化的质谱条件包括脱溶剂气温
度、源温度、毛细管电压、锥孔电压、脱溶剂气流速。
实验证明：脱溶剂气温度、源温度、脱溶剂气流速对
化合物的响应的影响比较小。锥孔电压是主要的影
响因素。随着锥孔电压升高，总离子流响应增强，分
子离子峰的强度降低，当电压达到20V时，准分子
离子峰强度最强。所以在选择离子模式中，锥孔电压
设为20V。
2．3 HPLC—UV—MS分析木蝴蝶原药材：在本实验
的色谱条件下，木蝴蝶中的6个成分获得了基线分
离。在总离子流色谱图中可以观察到6个标记峰如
图1，峰1的特征离子为433、271；峰2的特征离子
为447、271；峰3的特征离子为431、255；峰4的特
征离子271；峰5的特征离子255；峰6特征离子
285。图2是6个标记峰的质谱图。通过比较对照品
和样品的保留时间和质谱数据，峰2、5分别鉴定为
黄芩苷、白杨素。其中峰2的特征离子447为分子离
子峰[M+HI‘，特征离子271为[M—Glucuroside
+HI。根据质谱数据、高效液相色谱中各个物质的
出峰顺序和文献数据一致。“]，峰1、3、4、6分别尝
试性的鉴定为黄芩素一7一。葡萄糖苷、白杨素一7一。一
葡萄糖苷酸、黄芩素，千层纸素A。其中蜂l的特征
离子433为分子离子峰[M+HI+，特征离子271为
[M—Glucoside+H]；峰3的特征离子431为分子
一止上
、0k。⋯。j，藤从?飚舻
。
4 6
。：；照照，丛：二一生』曼竖型．!：竺
万方数据
中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第4期2006年4月·5 7·
离子峰[M+HI+，特征离子Z7l为[M—Glucuro—
side+H]。这些化合物的鉴定见表1。
一一L。L
1
㈩178∞‘⋯M㈣㈣⋯425⋯475⋯5w
2i1 n
，占啼r函—薯1i占r磊-磊—i百=『；r石j≥；_丽
1501762∞ZⅡ2∞276⋯∞⋯375●25删⋯0⋯50
V
⋯75^∞52∞∞5瑚3¨∞⋯∞·z4SB⋯∞5255∞
Ⅵ
，茅≮r赢1嘉1苷1吾≮r磊1畜1i1F面F面—iiF磊—甜
m／z
围2化合物1～Ⅵ的质谱圈
Fig．2Massspectrogramfcompoundst Ⅵ
寰1各个活性成分保留时闻、分子离子蜂和^一
TableRetentionme，molionpeak,and^一
ofeveryactiveconstituents
图3是选择离子分别为m／z433、447、431、
271、255和285的提取色谱图与全扫描离子色谱图
的比较图。从信噪比值很明显可以看出，采用选择离
子模式比采用全扫描离子模式具有更高的灵敏度。
2．4方法学考察
2．4．1线性关系：按照1．3项黄芩苷和白杨素校正
曲线，得到黄芩苷和白杨素的线性方程分别为：Y一
42588180．35X一26920．21．r一0．9999；Y一
26369708X一46971．25，r一0．9995。将标准溶液
3
1”1slR2ss
2 ，5* Sm∞I
1097 l_～——霉，4』摹一，}I，一．．．
1e基SIR255
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2
3 ¨二 5 6ESI+TIC
等绺：器驾篷．．．，馨．!塞：罂。善丛，．兰g塞：墨a
t／rain
图3木蝴蝶原药材的HPLC—ESI—MS—TIC和
HPLC—MS—SIR色谱田
Fig．3HPLC-ESI-MS—TICandHPLC—MS—SIR
ChromtogramfSemenOroxyli
逐渐稀释，以信噪比(S／N)为3时进样量作为检出
限，得紫外检测限O．80ng和0．6ng。
2．4．2 回收率的考察：取已知量的木蝴蝶原药材，
1 mg／g的量作标准加入回收实验。每个样品平行
处理5份，按照样品测定的方法进行分析测定，求
算平均回收率，求得黄芩苷和白杨素的平均回收率
分别为97．5％、96．5％，RSD分别为1．3％、1．3％
o一5)。
2．5样品的测定：按照1．2项条件，测定木蝴蝶中
黄芩苷和白杨素，结果分别为15．836和0．46mg／g
(RsD一1．5％，”一5)，所得的样品谱图见图1。
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许树中的萜类化合物
南海函，昊军，尹浩，张侣’
(中国科学院南海海洋研究所广东省海洋药物重点实验室，广东
许树Clerodendrumine me(L¨)Gaertn．，为马
鞭草科大青属植物，生于滨海滩头、路边，分布于热
带亚洲、澳洲及太平洋群岛。在我国台湾、海南、广东
和广西等地的红树林中以伴生植物的形式生长m“。
许树叶子的成分可以作为抗菌剂和退热药，具有抗
微生物活性和兴奋心血管的作用o]，促进大鼠子宫
收缩并有抑制肠胃运动的功能”]。外用治皮肤湿疹、
跌打肿痛、外伤出血等。为进一步研究其成分，对许
树进行了提取分离。在以前工作的基础上o。，又从中
分离到5个三萜和1个二萜化合物。经过理化性质
分析和波谱数据解析分别鉴定为羽扇豆醇(1upeol，
I)、magnificol(Ⅱ)、粘霉烯酮(Ⅲ)、粘霉烯醇
(glutinol，Ⅳ)、3一乙酰齐墩果醛(3一Oacetyloleanolic
aldehyde，V)和钩大青酮(uncinatone，VI)。I～V
为三萜类化台物，Ⅵ为二萜化台物，这6个化台物都
是首次从许树中分离得到。
1仪器和材料
1H—NMR和”C—NMR谱用BurkerAVANCE
500MHz型核磁共振波谱仪测定，EI—MS用岛津
QP一5050A及QP一2010型气相色谱一质谱联用仪
测定。柱色谱用硅胶(200～300目)为青岛海洋化工
厂生产．TI．c硅胶预制板由烟台市化学工业研究所
生产。溶剂均为分析纯，由天津百世化工有限公司工
厂生产。许树植物2001年采白海南省三亚市，由本
所张但研究员鉴定。
2提取和分离
许树地上部分干质量4．5kg．粉碎，分别用
95％和50％工业乙醇回流提取3次，浓缩得租提物
238g和208g。将50％乙醇提取物用水混悬后依次
用石油醚、醋酸乙酯各萃取3次，回收溶剂后得石油
醚萃取物30g。将石油醚萃取物经硅胶柱色谱以石
油醚一醋酸乙酯(20：1～2：i)系统进行梯度洗脱并
重结晶得到5个三萜和1个二萜化合物。
3结构鉴定
化合物i：无色针状结晶(石油醚一醋酸乙酯)，
分子式为c。。H。。O，ElMS、’HNMR和”C—NMR光
谱数据与文献～致“]，鉴定为羽扇豆醇。
化台物Ⅱ：无色针状结晶(石油醚一醋酸乙酯)，
分子式为CaoH4。0，EIMSm／z：424[M]}，。HNMR
(CDCl，)d：0．76，0．79，0．83，0．94，0．96，1．03．1．68
(各3H，s，7CH。)，4．56(1H，s)。4．68(1H，d，L厂一2
Hz)，5．12(1H，t，J=3．6Hz)。”C—NMR占：38．83(C一
1)，27．52(C2)，79．09(C一3)，38．94(C一4)．55．44
(C5)，18．41(C一6)，34．42(C一7)，40．96(C一8)，
50．58(C9)，37．29(C—10)，21．04(C11)，121．83
(C一12)，145．25(C13)，42．94(C一14)，27．56(C一
15)，35．68(C一16)，43．07(C一17)，48．45(C18)，
48．06(C一19)，150．98(C20)，29．97(C一21)．40．08
(C22)，28．05(C一23)，15，39(C24)，16．15(C一25)，
16．06(C一26)，14．62(C一27)，18．06(C28)，109．34
(C一29)，19．37(C30)。MS和1HNMR与文献一
致。“，结合”C—NMR、DEPT、HSQC和HMBC确定
化合物Ⅱ为magnificol。
化台物Ⅲ：无色针状结晶(石油醚一醋酸乙酯)，
分子式为c。H480，EI—MSm／z：424[M3+，1H—NMR
(CDCl。)d：0．82，0．96，0．99，1．03，1．09，1．16，
1．22，1，24(各3H，s，8CH。)，5．7(IH，brs)。
”C—NMR艿：21．59(C1)，38．13(C2)，215．25(C一
3)，50．03(C一4)，142．58(C一5)，121．43(C一6)，23．70
收稿日期：2005—06-16
摹耋嚣瞿：寥莓86蔷课要麓霞慧篡黧美墓性io．先ac．导c化n台物的发现和优化弋2001AA62肌03b广东省团队基金项月‘粤科基汜003H1]
万方数据
木蝴蝶中黄酮类化合物的HPLC-ESI-MS分析
作者： 缪建荣， 杨红美， 曾建国， 陈波， 严付华， MIAO Jian-rong， YANG Hong-mei，
ZENG Jian-guo， CHEN Bo， YAN Fu-hua
作者单位： 缪建荣,MIAO Jian-rong(湖南省药品检验所,湖南,长沙,410001;湖南九汇现代中药有限公司
,湖南,长沙,410331)， 杨红美,严付华,YANG Hong-mei,YAN Fu-hua(湖南九汇现代中药有限
公司,湖南,长沙,410331;湖南师范大学化学研究所,湖南,长沙,410081)， 曾建国,ZENG
Jian-guo(湖南九汇现代中药有限公司,湖南,长沙,410331)， 陈波,CHEN Bo(湖南师范大学
化学研究所,湖南,长沙,410081)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(4)
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