全 文 ：中草蒋ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第6期2007年6月·855·
RP—HPLC法测定桂附地黄丸中芍药苷和丹皮酚
焦少珍1’2，李 宇2，韩凤梅2，陈 勇2誊
(1．肇庆学院生物学系，广东肇庆526041；2．湖北大学中药生物技术省重点实验室，湖北武汉430062)
桂附地黄丸收载于《中国药典>>2005年版一部，
由肉桂、附子(制)、熟地黄、山茱萸(制)、牡丹皮、山
药、茯苓、泽泻8味中药组成，具有温补肾阳之功效。
牡丹皮是该方重要组成药材，所含酚性成分有丹皮
酚、牡丹酚苷、牡丹酚原苷，所含萜类和苷类成分有
芍药苷、羟基芍药苷、苯甲酰芍药苷等。桂附地黄丸
中主要活性成分为芍药苷和丹皮酚。而《中国药典》
2005年版一部仅采用HPLC法测定其中丹皮酚的
量。为了完善检测方法，本实验采用RP—HPLC法同
时测定了芍药苷和丹皮酚两种主要活性成分的量。
1仪器和试剂
Agilent1100型HPLC仪。芍药苷和丹皮酚对
照品购于中国药品生物制品检定所，桂附地黄丸由
北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂生产，色
谱纯乙腈和甲醇(美国Fisher公司)，二次蒸馏水。
2方法和结果
2．1对照品溶液的制备：精密称取芍药苷和丹皮酚
对照品适量，置10mL量瓶中，各加色谱纯甲醇至
刻度，得对照品溶液储备液，其中芍药苷的质量浓度
为1．075mg／mL，丹皮酚的质量浓度为1．665
mg／mL。溶液放于4℃冰箱中保存，用时按需稀释。
2．2供试品溶液的制备：将桂附地黄丸剪碎混匀，精
密称取1．0g，置40mL离心管中，加甲醇10mL于
冰水浴中超声提取15min(功率300W)，离心取上
清液。同法再提取两次。将残渣用5mL甲醇洗涤，离
心取上清液，同法洗3次，合并上清液，置50mL量
瓶中，加甲醇至刻度，即得。按药典的处方比例制备缺
牡丹皮、芍药的阴性样品，同法制备阴性对照溶液。
2．3色谱条件：InertsilODSC18柱(250mm×4．6
mm，5弘m)；流动相为乙腈一水系统，使用前超声脱
气30min，采用梯度洗脱，0～8min，16％乙腈，8～
25min，25％乙腈，25min以后，77％乙腈；体积流
量：1mL／min；柱温：20℃；检测波长：240nm；进样
量：5弘L。
2．4方法专属性：将芍药苷和丹皮酚对照品混合溶
液和桂附地黄丸供试品溶液分别进样分析，见图1。
可见芍药苷和丹皮酚峰达到基线分离，无杂质干扰，
阴性也无干扰。
1 A 2。 B ．高；|=：』世
O 5 10l 5 2025 0 5 10152025
t／min
1一芍药苷2一丹皮酚
1-paeoniflorin2-paeonol
图1对照品溶液(A)、桂附地黄丸(B)和阴性对照(c)的
HPLC图
Fig．1HPLCChromatogramsfmixedsolution
referencesubstances(A)，GuifuDihuang
Pill(B)，andnegativesample(C)
2．5标准曲线的制备：在上述优化的色谱条件下进
样分析，以浓度质量为纵坐标、峰面积为横坐标，采
用Excel的散点图添加趋势线得到回归方程。芍药
苷在2．15～107．50btg／mL的线性回归方程为y一
0．2173X+0．3007，r一0．9998；丹皮酚在2．50～
99．90ug／mL的线性回归方程为Y=0．1648X+
0．3684，r=0．9998。
2．6精密度试验：取同一份桂附地黄丸供试品溶液
连续进样5次，结果芍药苷和丹皮酚峰面积的RSD
分别为0．63％和0．70％。
2．7稳定性试验：取同一份桂附地黄丸供试品溶
液，分别放置0⋯24 6、8h进样分析，结果芍药苷和
丹皮酚峰面积的RSD分别为0．37％和0．57％。
2．8重现性试验：精密称取桂附地黄丸5份，每份
1g，制备供试品溶液，进样分析，结果芍药苷和丹皮
酚峰面积的RSD分别为2．69％和2．83％。
2．9加样回收率试验：称取桂附地黄丸样品0．5g，
制备供试品溶液并进样分析，测定值作为样品本底
值。平行称取桂附地黄丸样品2份，每份0．5g，其中
一份加入芍药苷409．22弘g和丹皮酚466．2肛g，另
收穑日期：2006—12—12
基金项目：湖北省青年杰出人才科学基金(2002AC004)
作者简介：焦少珍(1969一)，女，广东高要人，讲师，硕士，主要从事食品和药品的安全检测研究及教学工作。
*通讯作者陈勇E—mail：cyl01610@npc．gov．cn
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万方数据
·856· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第6期2007年6月
一份加入芍药苷587．95btg和丹皮酚699．3,ug，重
复试验3次。进样测定，计算得芍药苷和丹皮酚平均
回收率分别为98．18％、99．33％，RSD分别为
0．63％、0．91％。
2．10样品测定：取桂附地黄丸样品5份，制备供试
品溶液，进样测定，按外标法计算芍药苷和丹皮酚的
质量分数，分别为0．99、1．16mg／g，RSD为
1．59％、2．70％。
3讨论
桂附地黄丸制备供试品溶液后所剩残渣用10
mL甲醇超声提取15min，定容至50mL并进样分
析 结果没有发现芍药苷和丹皮酚色谱峰，证明本实
验采用的方法可以将桂附地黄丸中的芍药苷和丹皮
酚提取完全。
芍药苷和丹皮酚在240nm处都有较大吸收，
因此本实验采用240nm为检测波长。
本实验还考察了甲醇一水、乙腈一水系统对桂附
地黄丸中芍药苷和丹皮酚分离的影响，结果由于该
复方所含化学成分复杂，杂质对目标物测定干扰严
重，经优化最后确定本实验采用的乙腈一水系统梯度
洗脱。在该条件下，供试品溶液中芍药苷和丹皮酚可
达到基线分离。
RP—HPLC法测定知母黄柏药对中新芒果苷、芒果苷和盐酸小檗碱
易 博1’3，孙 赫1’3，原 源3，孙连娜1’3，陈万生厶3+
(1．第二军医大学药学院，上海200433；2．第二军医大学附属长征医院药学部，上海200003；
3．第二军医大学现代中药研究中心，上海 200433)
知母与黄柏是临床常用药材，等量伍用，相互促
进。滋阴、清热退烧、泻火解毒、除湿益彰，出自李东
垣《兰室秘藏》，在经典方剂滋肾通关丸、知柏地黄
丸、大补阴丸、杜仲丸、太极丸、参归益元汤、虎潜丸、
保真汤、神龟滋阴丸、正气汤等中多有体现。芒果苷
是知母清热作用的主要有效成分，同时具有抗炎、抗
病毒、抗氧化、利尿、预防肥胖等作用[1~4]。知母中含
有另一种新双苯吡酮类化合物新芒果苷[5]。黄柏中
的盐酸小檗碱既是该药材的指标成分又是活性成
分I-引。本实验通过优化色谱条件和样品处理方法可
以同时快速、准确测定知母黄柏药对中新芒果苷、芒
果苷和盐酸小檗碱。
1仪器与材料
Waters高效液相色谱仪，510泵，PDA检测器，
EmpowerPro色谱工作站。
新芒果苷、芒果苷为自制，HPLC色谱鉴定质量
分数均大于99．1％，盐酸小檗碱(批号110713—
200208)购自中国药品生物制品检定所，磷酸二氢钾
(分析纯)、乙腈(色谱纯)、双蒸水，不同批次知母、黄
柏药材均购自安徽毫州药材市场，由第二军医大学
长征医院药学部陈万生副教授鉴定，分别为百合科
植物知母AnemarrhenaasphodeloidesBunge的根
茎、芸香科植物黄檗Phellodendronamu e seRupr．
的干燥树皮(即关黄柏)；知母黄柏药对为知母与黄
柏药材粉末按l：1的配比自制。
2方法与结果
2．1 色谱条件：色谱柱：DiamonsilC。。反相柱(250
mm×4．6mm，5gm)；柱温：室温；流动相：乙腈
(A)一33mmol／L磷酸二氢钾缓冲液(pH3．45)(B)，
采用梯度洗脱，O～14min，8％A，14～15min，20％
A，15～35min，30％A，35min以后，35％A；体积流
量：1．0mL／min；检测波长：265nm。
2．2对照品溶液制备：精密称取新芒果苷对照品
5．00mg、盐酸小檗碱对照品9．98mg，分别置于5
mL量瓶中，用甲醇一水(9：1)溶解并加至刻度，即
得1mg／mL新芒果苷和2mg／mL盐酸小檗碱对照
品溶液。
精密称取芒果苷对照品10．00mg，置于5mL
量瓶中，用甲醇一二氧六环一水(5：5：1)溶解并加至
刻度，即得2mg／mL芒果苷对照品溶液。
2．3供试品溶液制备：取知母药材、黄柏药材和知
母黄柏药对粉末各50mg，精密称定，分别置10mL
收稿日期：2006—09一11
作者简介：易博(1978一)，男，湖南省湘阴县人，药师，硕士研究生，2001年毕业于第二军医大学药学专业，工作于解放军第187中心医
院药剂科，2004年攻读第二军医大学生药学硕士学位，主要从事中药材品质评价和药用植物的种质资源改良。
d；Ⅻ伦≯1釜鸳翟’25074402E-mai龠l：yibo@smmu．edu·cn4k,E*通讯作者 陈万生 一mail：chenws@vnet．citiz．net
万方数据
RP-HPLC法测定桂附地黄丸中芍药苷和丹皮酚
作者： 焦少珍， 李宇， 韩凤梅， 陈勇
作者单位： 焦少珍(肇庆学院,生物学系,广东,肇庆,526041;湖北大学,中药生物技术省重点实验室,湖北
,武汉,430062)， 李宇,韩凤梅,陈勇(湖北大学,中药生物技术省重点实验室,湖北,武汉
,430062)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(6)
被引用次数： 3次

引证文献(3条)
1.车磊.孙国祥.李闫飞 桂附地黄丸的毛细管电泳指纹图谱研究[期刊论文]-中南药学 2011(6)
2.张得钧.董凡晖 同时测定浓缩桂附地黄丸中丹皮酚和马钱苷含量方法的建立[期刊论文]-青海医学院学报
2011(3)
3.孙国祥.车磊.吴玉 用双标定量指纹法定桂附地黄丸平行五波长高效液相色谱对照指纹图谱标准[期刊论文]-中南
药学 2012(8)


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