全 文 ：中草芮ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第11期2006年11月·1655·
RP—HPLC法测定丰城鸡血藤提取物中大豆黄酮、染料木素、
刺芒柄花素和美皂异黄酮
余燕影1，章丽华1，曹树稳2
(1．南昌大学化学系，江西南昌 330047；2．南昌大学食品科学教育部重点实验室，江西南昌330047)
摘要：目的研究RP—HPI．C法分离丰城鸡血藤提取物的条件并建立其中4种异黄酮活性成分的测定方法。方法
以乙腈一0．1％磷酸为流动相．采用SpherisordODS柱(250mrn×4inm，5弘m)。梯度洗脱，体积流量0．8ml。／rain，
检测波长260mill，研究流动相组成和梯度变化对丰城鸡血藤提取物分离效果的影响。结果大豆黄素、染料木素、
刺芒柄花素和美皂异黄酮的线性范围、相关系数和平均加样回收率分别为6．24～31，2ttg／m1．、，|一0．9999、
99．32％；10．00～130．0pg／ml。、，。一0．9997、102．20％；5．99～125．9ttg／ml。、，‘一0．9999、100．08％和6．96～
34．8ttg／ml。、，一一0．9993、 9．52％。各组分的加样回收率RSI)分别为1．79％、1．51％、1．54％和2．01％(11—5)。
结论该法可用于丰城鸡血藤提取物中成分的分离及其中4种异黄酮活性成分的测定。
关键词：丰城鸡血藤；异黄酮；大豆黄酮；染料木素；刺芒柄花素；美皂异黄酮；高效液相色谱
中圈分类号：R286．02 文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2006)11—1655—02
Determinationofda dzein，genistein，formononetin，andbiochaninA
inMillettlanitidav r．hirsutissimaextractbyRP—HPLC
YUYan—ying‘，ZHANGI。i—hual，CA0Shu—wen2
(1．I)epartmentofChemistry。NanchangUniversity。Nanchang330017，China；2．KeyI。aboratoryofFoodScience
()fMinistryofEducation，NanchangUniversity，Nanchang330@t7，China)
Keywords：MillettlanitidaBenth．var．hil一sutissimaZ．Wei； soflavones；daidzein；genistein；
formononetin；biochaninA；HPI。C
丰城鸡血藤又名香花崖豆藤Mi，胁￡如nitida
Benth．var．hirsutissimaZ．Wei，是传统地产中药
材，入药历史悠久。有补血活血、舒经活络之功效，用
于治疗月经不调、血虚萎黄、麻木瘫痪、风湿痹痛等
症Ⅲ。丰城鸡血藤主要含黄酮类活性成分口’2]，且多
为异黄酮苷元。丰城鸡血藤的研究仅见有关其化学
成分和药理研究的报道[3“]。本实验旨在研究RP—
HPI。C法分离丰城鸡血藤提取物中成分的条件并建
立其中4种异黄酮活性成分的测定方法，对其进行
定量分析。
1仪器与试剂
Agilent1100高效液相色谱仪，G2180AA(LC
色谱工作站)，G1313A自动进样器，DAD检测器。
大豆黄素、美皂异黄酮(质量分数≥95％，
Sigma公司)；染料木素、刺芒柄花素(质量分数≥
98％，HPLC测定，陕西慧科植物开发有限公司)；乙
腈(色谱纯，Merck公司)，水为超纯水，其他试剂均
为分析纯。
丰城鸡血藤采自江西丰城市罗山乡，经南昌大
学生物系杨柏云教授鉴定。
2方法及结果
2．1色谱条件：色谱柱：SpherisordODS(250mm×
4mm，5弘m)；体积流量：0．8mI。／min；检测波长：
260nm；进样量：10I。；流动相：乙腈(A)一0．1％
H3P04(B)，梯度洗脱：A：0～10min，0％～10％；
10～16rain，10％～15％；16～21rain，15％；2l～32
min，15％～20％，32～42min，20％～25％；42～43
rain，25％～30％；43～48rain，30％；48～58rain，
45％；58～64min，60％；64～70rain，6 ％～0oA。
2．2 提取物的制备：鸡血藤干料用90％乙醇和
2％HCI回流提取，滤过，滤液用NaHCo。中和后再
滤过，滤液旋转蒸除乙醇，剩余物用醋酸乙酯回流提
取，提取液旋转浓缩至干，所得提取物浸膏真空干燥
备用。
2．3供试品溶液的制备：称取适量真空干燥后的提
取物浸膏用70％乙醇溶解并定容，微孔滤膜(0．45
收稿丑期：2006—01—19
基金项目：国家自然科学基金资助项目(20262004，20562008)，江西省教育厅资助项目(赣财教[2003373号)
作者简介：余燕影，女，42岁，副教授，研究方向为天然产物分离及其生物活性研究。E—mail：cswyyy@nc．jx．an
万方数据
·1656· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第11期2006年11月
肚m)滤过，即得。
2．4工作曲线制备：分别精密称取干燥至恒重的大
豆黄素、染料木素、刺芒柄花素和美皂异黄酮适量，
用无水乙醇配制成质量浓度分别为31．20、250．0、
299．9、34．80pg／mI。的储备液。分别精密移取一定
量上述储备液于10mI。量瓶中，配制成一系列不同
质量浓度的对照品混合溶液，取10弘I。进样，测定。
以峰面积对质量浓度进行线性回归，结果见表1。
表l 4种异黄酮的回归方程
Table1 Regressionequationoffourisoflavones
2．5精密度试验：取同一份供试品溶液，取10肚I，
进样。重复5次，计算得大豆黄素、染料木素、刺芒柄
花素和美皂异黄酮的峰面积RSD分别为1．47％、
1．69％、1．01％和1．84％。
2．6稳定性试验：同一供试液品溶液24tl内测定
5次，计算得大豆黄素、染料木素、刺芒柄花素和美
电异黄酮的峰面积RSD分别为1．71％、1．52％、
1．4()％和1．98％，结果表明供试品溶液在24h内
稳定。
2一 重现性试验：取5份同一批提取物样品，制备
供试品溶液测定，结果样品中大豆黄素、染料木素、
刺芒柄花素和美皂异黄酮质量分数的RSD分别为
1．89％、2．91％、1．66％和2．15％。
2．8加样回收率试验：取供试品溶液的制备中的一
半样品量，加入相应质量的对应对照品，制备供试品
溶液，并定容至50mL。大豆黄素、染料木素、刺芒柄
花素和美皂异黄酮对照品的加入量分别为680．40、
588．10、3073．15、302．15／lg。结果平均回收率分别
为99．32％(RSD为1．79％，，l一5)、102．20％
(RSD为1．51％，n=5)、100．08％(RSD为
I．54％，以=5)、99．52％(RSD为2．01％，以一5)。
2．9样品测定：取供试样品5批，测得样品中大豆
黄素、染料木素、刺芒柄花素和美皂异黄酮的平均质
量分数(以丰城鸡血藤干基计)分别为38．2、33．4、
172．5、8．4ptg／g，色谱分析图见图1。
3讨论
溶剂组成和梯度条件变化对丰城鸡血藤提取物
的分离效果影响较大。在O～7～15min，当乙腈比
例为o％～15％～25％时，丰城鸡血藤提取物的
HPI。C图谱中的17与2’峰重叠(分离度R一0。552)，
A }
i
H，j
|}!l『I|_
10 20 30 40 50 60
B
j’
]：|2，，翻
，，mIn
1一大豆黄素 2一染料木素 3一刺芒柄花素 4一美皂异黄酮
1一daidzein2-genistein3-formononetin4-biochaninA
凰1混合对照品(A)和丰城鸡血藤提取物(B)
的HPLC图谱
Fig．1HPLCChromatogramsofisoflavones
referencesubstances(A)and肘．nitida
vat．hirsutissimaextract(B)
37、47和5
7
3个峰之间的分离度分别为0．230和
0．372，6’峰与相邻小峰重叠(R一0．506)，峰形较宽，
不尖锐。在42～52～57rain，当乙腈比例变化为
30％～50％～70％时，染料木素和刺芒柄花素峰与
其相邻小峰均有重叠(分离度分别为0．204和0．
073)，峰形宽，不对称，整个图谱偏离基线较高；若将
乙腈的比例改为30％～30％～60％，则刺芒柄花素
峰形拖尾严重，77峰不对称，美皂异黄酮峰漂移基线
较高。
根据试验摸索，在42rain以前，由于出峰的化
合物极性相对较强，根据相似相溶原理，流动相的极
性应相对较强，因而乙腈比例不能太高，且乙腈随时
间的梯度变化要缓慢，否则，各峰容易发生重叠，峰
形较宽，不尖锐，分离效果差；在43min以后出现的
色谱峰，出峰的化合物极性相对弱，同理，流动相的
极性应相对较弱，因而乙腈比例应相对较高，且随时
间变化不能太慢，否则色谱峰容易出现拖尾和基线
漂移现象。
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万方数据
RP-HPLC法测定丰城鸡血藤提取物中大豆黄酮、染料木素、刺
芒柄花素和美皂异黄酮
作者： 余燕影， 章丽华， 曹树稳， YU Yan-ying， ZHANG Li-hua， CAO Shu-wen
作者单位： 余燕影,章丽华,YU Yan-ying,ZHANG Li-hua(南昌大学,化学系,江西,南昌,330047)， 曹树
稳,CAO Shu-wen(南昌大学,食品科学教育部重点实验室,江西,南昌,330047)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(11)
被引用次数： 2次

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本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200611021.aspx