全 文 ：中草嚆ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第11期2007年11月·1707·
物种濒危的主要原因。
本课题组多年研究结果表明，肉苁蓉种内DNA
分子遗传多样性较丰富，并在形态特征、产量及品质
性状等方面多样性显著，说明现阶段该物种的种内
丰度较高，其濒危原因不在于此；而肉苁蓉的生境独
特、专性寄生、生长缓慢、自然繁殖率低、异花授粉、
种子休眠等脆弱的生物学特性影响它们的生存和繁
衍，使其在受到长期的人为干扰时自我更新困难，导
致濒危。因此，在现阶段建立管理规范的自然保护
区，并配合野生抚育，完全能够提高其野生资源的蕴
藏量。而由于药材的需求量逐年扩大，必须同时大力
发展人工种植，才能满足市场需求，实现资源的可持
续利用。而核心种质库的建立、良种繁育和种植基地
的规范建设应是肉苁蓉资源保护和利用过程中的重
要任务。
References：
[1]FuLG．TheRareandImminenlDang盯PlantinChina(中
国珍稀强危植物)[M]．Shanghai，Shangh缸Educational
Press，1989．
[2]TuPF．HeYP，LouzC．HerhalogicalstudyonCistanche
deserticola[J]ChinTraditHerbDrugj(中草药)，1994，lg
(1)：3—5．
vpsP．HogerR，BleekettMeta1．AFLPlAnewtechnique
forDNAfingerprinting[J]。NucleicAcidsRes，1995，23
(21)I4407—4414．
PortiaE．AcquadroA．C minoC．eta1．Effectoftarmers
seedselectionongeneticvariationofalandracepopulationof
pepper(CapsicumⅢ⋯L-)growninNorth—WestItaly
[J]GenetICesCropEvolu．2004．51；581．
NeiM．Analysisofgenediversityinsubdividedpopolativnj
[J]．ProcNadAcadSci．1973．701 9321．3323．
ShannonCE．Wcave[W．ThMath—ticalTheoryojCorn—
munication[M]．Urbana：UnivIllinoisPress．1949．
NeiM．Estimationotaverageheterozygosityandgeneticdis—
tahoefromasmallnumberofindividualsEJ3Genetics，1978t
89：583·590．
CuiGH·ChenM，HuangL赶r盯矗S『tudyongeneticd -
versityof日盯妇CistanchesbyRAPD[J]．ChinaJC n
MaterMed(中国中药杂志)．2004，29(8)；727—730．
LiYL·ZhangK．WangHX．Randomamplifiedpolymor—
phicDNAanalysisofCistanchedes —icolaMaenendMain
twoendemicareasofInnerMongolia口]．，占∞撕fUniv』r删
SteelTech瑚l(包头钢铁学院学报)，2005，24(2){185—187。
ChertJ，LiuTN，ChengHZ，dal，Studyonthepollination
characteristicofCis缸nthedes月rtitvla[J]．ChinaChin
MaterMed(中国中药杂志)，2003，28(6)：504—506．
NiuDL．SongYX．GUOSH．etal．Studiesonpollenviabil—
ityofCistanchedes rticda[J]．ChinTraditHerbDh驴(中
草药)，2004，35(6)；679—682．
青羊参遗传转化中组织培养系统的研究
邱璐‘，王 波1，范树国1，罗春梅2，李艳华2，陈凯1，周银燕1．杨启国1，扬福锁
(1，云南省楚雄师范学院，云南楚雄675000}2．云南省楚雄农业学校．云南楚雄675000)
摘要：目的建立用于遗传转化的青羊参组织培养系统。方法以不同外植体部位、不同消毒剂、不同消毒时间
建立无菌苗·以不同外植体部位、不同激素种类及配比、不同质量浓度的2，4一D与KT诱导青羊参愈伤组织形成、
继代、分化}测定青羊参对标记基因分解物庆大霉素(Gent．)的敏感性。结果以青羊参的种子及茎段做外植体，以
10“趺氯酸钠消毒种子20～30rain，或以0．z“HgCl；消毒茎段3min建立无菌苗具有最好效果F青羊参的种子、
根、茎、叶易于形成愈伤组织；2，4一D对青羊参愈伤组织的形成是必要的；青羊参对KT较为敏感，不论用KT诱导
青羊参愈伤组织的形成．还是诱导胚芽或腋芽形成，均有较好效果；以MS为基本培养基，以2，4一D1．0mg／L+KT
1．0mg／L为激素配比诱导青羊参愈伤组织的形成具有较好效果；以MS+2，4-D0．5mg／L+KT0．5mg／L继代
愈伤组织具有较好效果}磁MS+KT0．5mg／L+NAA0．1mg／L诱导种子的胚芽或茎段的腋芽萌发具有较好效
果}青羊参的愈伤组织不论来源于种子，还是来源于根、茎、叶．不i龟使用激素6-BA，还是使用KT、ZT、2ip均未观
察到愈伤组织分化形成不定芽；100pg／mL的庆大霉素是青羊参转基因植株筛选的最佳压力。结论通过基因枪
介导转基因时，选择种子或茎段在Ms+2。4一D1．0mg／L+KT1．0mg／L培养基上萌动14d．形成愈伤但未形成
芽的材料作为基因枪轰击材料较好。
关罐词：青羊参；组织培养；愈伤组织；不定芽，遗传转化；选择压力
中田分类号：R286．1 ’文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)11—1707—06
收藕日期：2007—02—05
基盒项52芽盘富皋笛跫盖萎言器曼Z譬翟嚣是；％菱曩菱；l墓瑟骞蔑痄篡痞蔫要嚣j美；：岩譬6”h云南省学术技木带头人后备人
作者筒卉：邱璐(1965一)，女，重庆人·云南省齄雄师范学院副教授，硕士．主舞从事植物组织培养压转基因研究工作。
跚
Ⅲ
嘲
旧
吲
嘲
踟
㈨
㈨
万方数据
中草喃ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第11期2007年11月
TissueculturesystemofCynanchumotophytumingeneticransformation
QIULul，WANG1301．FANShu—gu01，LUOChun—mei2，LIYan—hua2，CHENKail，
ZHOUYiu—yanl，YANGQi—gu01，YANGFu—SU01
(1。ChuxiongNorrnalUniversity，Chuxiong675000，China}2．ChuxiongAgric lturalSchool，Chuxiong875000，China)
Abstract：ObjectiveTos a6lishthetissueculturesystemofCynanchumotophylureingenetictrans—
formation．MethodsAsepsieedlingwasetupbyusingdifferentexplantparts，disinfeetors．anddisin—
fectingtime。Thecallusw sindueed，breeded，anddiffere tiatedbyusingdifferentm dia．differenthor-
monecategoriesandcombinations，anddifferenthormoneconcentrationsof2，4-DandKT．ResultsIt
wasthebestmethodthatasepsiseedingwssbuiltupbyusingseedasthexplantdusing10％NaCIO
totreattheseedfor20—30minorusing0．2％HgCl2totreatthest m／or3min．These d，root，stem，
andlearofC．otof,hylumcanformcalluseasily．The2，4-Dwasimportantinformingcallus．C．ot印hilum
wasmoresensitivitytoKT．TheeffectwasbetterwhenKTwasusedtoindueecallusoradventitious
buds．MS+2，4-D1．0mg／L+KT1．0mg／Lwasthebettermediumtojodueecallustoform．Thecallus
can
7
tbeinducedtoformadveotitousbudswithoutrefereocet usingseedorroot，stem，andleafsthe
explant，withoutreferencetousinghormone6-BAorKT，ZT，2ip．Gentsmiein100gg／mListheopti-
mumpressureingeneticransformationofC．otophylum．ConclusionTheseedorstemistheidealmate—
rialbombardedbyparticlegunthatisinducedtoformcallusfor14dinthemediaMS+2-4一D1．0mg／L+
K，r1．0mg／Landwithoutformingadventitiousbuds．
Keywords：Cynanchumotop ylumSchneid，tissueculture；callus，adventitiousbudi gene cransfor．
mation}optimumpressure
青羊参CynanchumotophylumSchneid．，为萝
蓐科牛皮消属CyaanchumLinn．的多年生草质藤
本。在《滇南本草》中又名自蔹，在云南丽江又名自首
乌，民间又称之为白岑、奶浆草。分布于云南、四川、
广西、贵州、西藏等地，多生长在海拔1100～2500
m的亚热带山地草丛中。是一种重要的药用植物，
以根部入药，但根有毒。民间用作滋补强壮，治疗腰
痛、风湿骨痛、小儿惊风症、头晕、耳鸣、心慌、毒蛇咬
伤等。根中主要含青羊参苷甲和青羊参苷乙，临床上
具有较好的抗惊厥作用，对癫痈和迁延性肝炎有较
好疗效。目前，已从根部提取青羊参总苷生产青羊参
片剂与健脑克癫片，用于癫痫病、脑震荡后遗症、美
尼尔氏综台症等“]。关于青羊参组织培养的研究报
道较少，而关于青羊参遗传转化的研究未见报道。本
实验对青羊参遗传转化中组织培养系统进行了详细
研究，为青羊参遗传转化、离体培养、种质资源开发
提供参考。
l材料与方法
1．1材料：青羊参的种子及茎段均采自云南省楚雄
农校药园。
1．2不同外植体部位、不同消毒剂、不同消毒时问
对无菌苗建立的影响：以MS为基本培养基，以2，
4一D1．0mg／L+KT1．0mg／L为激素配比，以青羊
参的种子、幼嫩茎段作外植体。用lo％NaCl0作为
消毒剂，设置消毒时间为15、20、25，30rain；用
0．2％HgCl：消毒，设置消毒时间为2、2．5、3、3．5，4
min进行对照，以筛选出最佳的外植体部位、最佳消
毒荆种类及浓度。消毒后用无菌水冲洗外植体5～8
次，茎段直接接种，种子用无菌水浸泡5～10h后接
种。消毒剂消毒前均用洗涤剂水清洗材料5min。再
用流水冲洗材料5rain。
1．3不同基本培养基对愈伤组织诱导的影响：以青羊
参无菌种子为材料，以MS为基本培养基，以2。4-D
1．0mg／L+KT1．0mg／L为激素种类及配比，以
MS、1／2MS(大量元素及微量元素减半，其他不变)为
对照，以筛选出诱导愈伤组织的最佳基本培养基。蔗糖
30g／L，琼脂7．5g／L，pH值5．8(灭菌前)，培养温度
22～25℃，接种后暗处理30d进行统计(以下同)。
1．4不同外植体部位对愈伤组织诱导的影响二以
MS为基本培养基，以2，4一D1．0mg／L+KT1．0
mg／L为激素种类及配比，以青羊参的无菌种子及
无菌苗的根、茎、叶为材料，对青羊参的种子、根、茎、
叶形成愈伤组织的能力进行对照。
1．5不同激素种类及配比对愈伤组织诱导的影响；
以种子为外植体，以MS为基本培养基，设置7组不
同种类及配比的激素进行对照。以筛选出最佳激素种
类及配比。第1组：2，4-D1．5mg／L；第2组：2，4一D
1．5mg／L+6-BA1．5mg／L}第3组：2，4-D1．5
mg／L+KT1．5mg／Ll第4组：2，4一D1。5mg／L+
ZT1．5mg／L；第5组2，4-D1．5mg／L+2ipl·5
万方数据
中革菊ChineseTraditionalndHerbalDrugs第38卷第11期2097年11月·1709·
rag／L；第6组：2，4一D1，5mg／L+NAA1．5mg／L；
第7组：6一BA1．5mg／L+NAA1．5mg／L。
1．6不同质量浓度的KT与z，4一D对愈伤组织继
代的影响：以无菌苗的茎段为外植体，以MS为基本
培养基，设置4组不同的KT与2，4一D质量浓度进行
对照，以筛选出愈伤组织继代的最佳KT与2，4一D质
量浓度。第1组；KTl．5“g／L+2，4一D1．5mg／L{
第2组：KT1．0mg／L+2，4-D1．0mg／L；第3组：
KT0．5mg／L+2，4一D0．5mg／L；第4组：KT0．1
mg／L+2，4一D0．1mg／L。
1．7不同激素种类及配比对不定芽形成的影响：以
无菌苗的茎段为外植体，以MS为基本培养基，设置
5组不同种类及配比的激素进行对照，以筛选出不
定芽形成的最佳激素种类及配比。第1组：6-BA1．0
mg／L+NAA0．2mg／L；第2组：KT1．0mg／L+
NAA0．2mg／L；第3组：ZT1．0mg／L+NAA0-2
mg／L；第4组：2ip1．0mg／L+NAA0．2mg／L；第
5组：6一BAl．0mg／L。暗培养1周后光照，光照时间
15h／d，光照强度2000lx(以下同)。
l。8不同质量浓度的KT与NAA对不定芽形成
的影响：以无菌苗的茎段为外植体，以MS为基本培
养基，设置5组不同质量浓度的激素进行对照，以筛
选出不定芽形成的最佳KT与NAA质量浓度。第1
组：KT1．0mg／L+NAA0．2mg／L；第2组：KT
0．5mg／L+NAA0．1mg／L；第3组：KT0．3
mg／L+NAA0．15mg／L；第4组：KT0．1mg／L+
NAA0．02mg／L。以上培养基细胞分裂索与生长素
1．9青羊参对庆大霉素(Gent．)敏感性测定：以青
羊参的种子在MS+2，4-D1．0mg／L+KT、1．0
mg／L上形成的愈伤组织为材料，以MS为基本培
养基，以KT1．0mg／L+NAA0．2mg／L为激素种
类及配比，在培养基中分别加入0、25、50、75pg／mL
的庆大霉素进行青羊参敏感性对照实验。
1．10统计方法：使用Spssl3．0软件进行统计分析。
2结果
2．1不同外植体部位、不同消毒剂、不同消毒时间
对无菌苗建立的影响：以青羊参种子为外植体，以
10％NaCIO消毒20～30min，有90％～i00％的无
菌率，85％～95％的萌发率。lo％NaClO消毒青羊
参的茎段30rain也有一定的效果，NaCIO对外植体
的损伤较小，只要不污染的茎段均能成活，但污染率
较高，高达55％。0．2％HgCl2消毒茎段3．0rain效
果较好，有60％的无菌率和50％的成活率，但
0．2％HgCI：消毒种子，无菌率虽然较高，种子萌发
率却较低。对袭1的无菌率及成活率进行统计分析，
结果表明：以种子作外植体，10％NaClO消毒30
rain与0．2％HgCI：消毒2rain的无菌率差异极显
著，U。一3．179>U。。_P<0．01；萌发率差异也极显
著，U。一5．8055>Uo⋯尸<0．01，说明10％NaCl0
消毒种子20～30rain明显优于0．2％HgCIz消毒种
子2min。以茎段作外植体，10％NaClO消毒30rain
与0．2％HgCI：消毒3rain的无菌率差异不显著，
“。一1．27<“。⋯尸>0．05；成活率差异也不显著，
U。=0<‰05，P>o．05，说明lO％NaCIO消毒茎段
的比例均为5。1a 20～30min与0．2％HgCl，消毒2min均有效果。
表1不同外檀体部位、不同消毒帑、不同消毒时间对无菌苗建立的影响
Table1 Influenceofdifferentexplantsparts，disinfectors，anddisinfectingtimesilasepsiseedlingforming
2．2不同基本培养基对愈伤组织诱导的影响：愈伤
组织在MS培养基上不仅形成时间早，而且愈伤诱
导率高(97％)，愈伤长势旺。而在1／2MS培养基上
虽愈伤诱导率也较高(95％)，但愈伤形成时问晚，愈
伤长势不如MS。对表2的愈伤诱导率进行统计分
析，结果表明，“。=一0．5566<‰。5，P>0．05，MS
与1／2Ms的愈伤诱导率差异不显著。但从愈伤组织
形成时间、愈伤组织长势来看，MS培养基明显优于
1／2MS培养基。
2．3不同外植体部位对愈伤组织诱导的影响：青羊
参的种子、根、茎、叶在MS+2，4-D1．0mg／L+KT
1．0mg／L中易于形成愈伤组织。在愈伤组织形成的
万方数据
·1710· 中革蒋ChineseTraditionalandHerbdDrags第38卷第11期2007年11月
裹2不同基本培养基对瘕伤组织诱导的影响
Table2 Influenceofdifferentm diaoncalhlsinducing
同时，种子形成的愈伤组织中总有1个芽形成，观察
发现是胚芽萌发形成；茎段形成的愈伤组织中总有
2个芽形成，而且是由茎段最基部的两个腋芽形成。
根和叶形成的愈伤组织没有观察到芽形成，见图1。
对表3的愈伤诱导率进行统计分析，结果表明：“。=
--0．16130．05，种子、根、茎和叶的愈伤
诱导率差异不显著。但从愈伤组织形成的时间、长势
及不定芽形成数来看，种子、茎形成愈伤组织的能力
优于叶，叶形成愈伤组织的能力优于根。
图1青羊参种子在MS+2，4一D1，Omg／L+
KT1．0mg／L上形成的血伤组织
Fig．1CallusfromC·otophylumseedin ediaMS+
2·4-D1．0mg／L+KT1，Omg／L
2．4不同激素种类及配比对愈伤组织诱导的影响；
青羊参的种子在①～⑦号培养基中均能诱导愈伤组
织形成，且形成率均高达100“。但愈伤组织的长势
有较大差异，③号培养基中的愈伤组织具有较快的
生长速度和较强的生长活性，长势最好，明显优于其
他培养基。②、④、⑤培养基诱导愈伤组织的效果不
如③，但比①效果好，①效果优于⑥、⑦。①～⑦培养
基中胚芽形成，但都只有一个芽形成。在以青羊参无
菌苗的茎段为材料的重复实验中，结果相同，而且③
号培养基诱导青羊参愈伤组织形成的优势更为显
著，见表4。
表3不同外檀体部位对愈伤组织诱导的影响
Table3 Influenceofdifferentexplantsparts
oncallusinducing
裹4不同激素种类厦配比对愈伤组织诱导的影响
TaMe4 Influenceofdifferenthormonecategories
andcombinationsoncallusinducing
序号培养⋯配比篇愈嚣：；：i
2．5不同质量浓度的2，4一D与KT对愈伤组织继
代的影响：青羊参的愈伤组织在③号组合1／2Ms+
2，4-D0．5mg／L+KT0．5mg／L中继代具有最好
效果，愈伤长势旺，生命力强，体积成倍增长时间短。
在①号组合1／2MS+2，4一D1．5mg／L+KT1．5
mg／L中，愈伤也有较旺的长势，但愈伤易老化，变
为深黄色，进而变成黑褐色，失去生命力。在②号组
合1／2Ms+2，4一D1．0“g／L+KT1．0mg／L中继
代的愈伤也有一定程度的老化现象，见表5及图1。
表s不同质量浓度的2，4-D与KT对愈伤组织继代的影响
Table5 InfluenceofdiiferentboFmoneconcentrations0f2，4-DandKTODcallusbreedingoffspring
2．6不同激素种类及配比对不定芽形成的影响：青
羊参的种子在②号培养基MS+KT1．0mg／L4-
NAA0．2mg／L中成苗最快，苗最高，长势最好，但
只有胚芽形成的一个苗，无不定芽形成。在以青羊参
无菌苗的茎段为材料的重复实验中，结果相同，②号
培养基诱导茎段的腋芽成苗具有显著优势，每个茎
段最基部的一个腋芽均能形成苗，但无不定芽形成。
在以青羊参在MS+2，4-D1．0mg／L+KT1．0
mg／L上继代的愈伤组织为材料的重复实验中，不
论愈伤组织是来源于茎段，还是来源于叶、根、茎、种
子，均无不定芽形成，而且愈伤组织很难由黄白色转
变为绿色，见表6，图2～4。
2．7不同质量浓度的KT与NAA对不定芽的影响：
①～④号组合均不能诱导愈伤组织形成不定芽，但均
万方数据
中草蒋ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第11期2007年11月·17 1·
裹6不同激素种类殛配比对不定芽形成的影响
Table6 Influenceofdifferenthormollecategoriesand
combinationsOlladventitiousbudinducing
图2青羊参在MS+2，4一D0．5mg／L+KT
0．5mg／L上继代的愈伤组织
Fig．2CallusbreedingoffspringofC．otophylum
InmediaMS+2，4-D0·5rag／L+
KT0．5mg／L
围3愈伤组织在培养基MS+KT0．5mg／L+
NAAO．1mg／L未分化或苗
Fig．3Callusunformingadventitiousbudsinmedia
MS+KT0．5mg／L+NAA0．1mg／L
图4种子在MS+KT0，5mg／L+NAA0．1mg／L中
形成癜伤组织和苗
Fig．4CaJlusandadvenUtiousbudsfromseedinmedia
MS+KT0．5mg／L+NAA0．1mg／L
能100％诱导腋芽萌发，③号组合MS+KT0．5+
NAA0．1诱导青羊参腋芽萌发的效果最好。不仅腋
芽萌发所需时间最短，而且芽长势最好。①号组合
MS+KTl．0+NAA0．2诱导芽萌发也有较好效果，
但苗在生长后期有枯叶现象。③、④号培养基中苗的
长势均不如②号，见表7。
囊7不同质量浓度的KT与NAA对腋芽的影响
Table7 Influenceofdifferentco centrationsofKT
andNAAonaxillarybourgeonlng
序号培养基激素配比篙宇兹苗鼬ii：
①MS+KTl0+NAA0．28
②MS+KT0．5+NAAo．19
③MS+KT0．3+NAA0．1511
④MS+KT0．1+NAA002 1Z
100 较好 有
100 最好 有
100 好 有
100 一般 有
z．8青羊参对庆大霉素敏感性测定：100pg／mL的
庆大霉素为转基因植物最佳选择压力，在100tzg／mL
质量浓度的培养基中，所有愈伤均褐变死亡。而在75
vg／mL质量浓度的培养基中，仍有20％的愈伤能正
常生长，因此不宜作为最佳选择压力。对表8的死亡
率进行统计分析，结果表明，z2—275．64>埔o-=
13．28，P<0．01，说明不同庆大霉素质量浓度间差
异极显著。
裹g青羊参对庆大霉素敏感性测定
Table8 MeasurementofC-o op时lum
sensitivity011Gentamlcin
3讨论
3．1青羊参的果实为闭果，种子具有较高的清洁
度。另外，青羊参为草质攀援藤本，茎尖离地面较远，
植株表面无毛状附属物，其幼茎也具有较好的清洁
度。因此，以青羊参的种子或幼茎作外材，易于消毒。
使用10％Naclo对青羊参的种子进行消毒，具有
较高的无菌率，同时又不毒害种子，具有较好的萌发
率。10％NaCIO对幼茎的毒害较小，但消毒效果不
够理想，无菌率低，仅45％。0．2％的HgCI。捎毒幼
茎3rain效果较好，超过3rain，无菌率虽高，但材料
中毒现象明显，死亡率较高。0．2％的HgCI：不仅对
幼茎有毒害作用，而且对种子的毒害作用更大，
0．2％的HgCI。消毒种子，虽然无菌率很高，但萌发
率较低。
3．2青羊参易于形成愈伤组织，不论是青羊参的种
子，还是根、茎、叶均易形成愈伤组织。在表4的实验
万方数据
·1712· 中革焉ChineseTraditionalandHerbalDr gs第38卷第11期2007年11月
中，有2，4-D的①～⑤号培养基效果优于无2，4-D
的⑥与⑦号，说明2，4-D对青羊参愈伤组织的形成
是必要的，其效果优于NAA。②、④、⑤培养基诱导
愈伤组织的效果优于①、⑥及⑦号，说明生长素2，4．
D与细胞分裂素配合诱导青羊参愈伤组织的形成是
必要的，其效果优于生长素2，4-D与生长素NAA配
合o]。青羊参对细胞分裂素KT较为敏感，不论KT
与2，4一D配合诱导愈伤组织形成，还是KT与NAA
配合诱导腋芽萌发，均有较为显著的效果．
3．3青羊参不易形成不定芽，青羊参的愈伤组织不
论来源于种子．还是来源于根、茎、叶f不论使用激素
6-BA，还是使用KT、ZT、2ip，均未观察到愈伤组织
分化形成不定芽。而且愈伤组织在光照条件下由黄
色转变为绿色速度极慢，转化率极低。在由种子、茎
段直接诱导芽形成中，除种子的顶芽、茎段基部的腋
芽能萌发成苗外，没有观察到不定芽的形成。在由种
子、茎段诱导愈伤组织的形成中，每粒种子形成的愈
伤组织中总有一个苗形成，每个茎段形成的愈伤中
也总有一个苗形成。经研究发现，这些苗来源于种子
的胚芽、茎段最基部的腋芽，不是来源于愈伤组织。
这与青羊参在遗传上具有较强的顶端优势有较大关
系“]，顶端优势抑制了靠近顶茅的腋芽萌发，只有距
顶芽最远的腋芽萌发成苗。
2，4一D对大多植物愈伤组织的形成是必要的，
但z，4一D的使用往往导致某些植物愈伤组织不能
分化成芽o]，这可能是该实验中未观察到愈伤组织
分化成芽的一个原因。
生长素的浓度与术质部分化过程之闻存在着一
种反比关系，而木质部中管胞的分化率与细胞分裂
素的浓度成正相关“。本实验使用了1t 5的生长索
与细胞分裂素诱导不定芽形成，该比例不够恰当，细
胞分裂素的浓度不够高，而生长素的质量浓度不够
低可能是该实验中未观察到愈伤组织分化成芽的第
2个原因。
糖的种类和质量浓度对愈伤组织的分化有较大
影响，不同植物愈伤组织分化所需的糖质量浓度各
不相同，有的植物1．5％的蔗糖便能促进术质部分
化，而有的植物要8％的蔗糖才能促进木质部分
化“】。本实验仅使用了3％的蔗糖，蔗糖质量浓度的
梯度范围不够，可能是该实验中未观察到愈伤组织
分化成芽第3个原因。
高质量浓度的还原态氮有利于胚胎发生，一般还
原态氮和氧化态氮的最适合比例为10mmo|／L
NH．Cl和40mmol／LKN03口]即NH。+：N03～；
l：4。本实验使用了NH。、NO。与KNO，，未使用
NH4cl，而且NH‘+：N03一=1I 2，NHl+与NOa。
的绝对质量浓度及比例的不恰当可能是该实验中未
观察到愈伤组织分化成芽第4个原因。
有报道在一个马铃薯品种叶肉原生质获得的愈
伤组织中，只有在培养基中加入0．2～o．3mol／L的
甘露醇才可能出现茎芽的分化，否则愈伤组织不能
变绿，而愈伤组织变绿是芽分化的前提o]。本实验中
发现青羊参的愈伤组织不易变绿，有必要在培养基
中添加甘露醇开展进一步的研究。
另外加入水解酪蛋白，提高培养基中PO。-3的
水平，减少愈伤组织继代次数也能促进芽分化o]，这
些因素是否有助于青羊参的愈伤组织分化成芽将在
下一步的实验中作进一步的研究。
3．4青羊参通过基因枪介导转基因时，选择种子或
茎段在MS+2，4一D1．0mg／L+KT1．0mg／L培养
基上萌动14～15d形成愈伤(表5)，但未形成苗的材
料作为基因枪轰击材料较好。植物转基因过程中，常
在目的基因上携带抗生素抗性基因作为转基因识别
标志，如庆大霉素抗性基因。因此常在培养基中加入
抗生素作为转基因抗性植物的选择压力，凡被基因枪
轰击而成功转基因的胚芽细胞或腋芽细胞能在含有
庆大霉素的选择培养基中正常成苗，而未被成功转基
因的细胞不能在选择培养基中成活““]。100_ug／mL
的庆大霉素是青羊参转基因植株筛选的最佳压力。
References：
[i]“QZ。7k＆玳妇∞thePlantingTechnologyofCy,zanchum
otophylumSchneid[D]Kunming：YunnanAgricult ral
University．2005．
[2]ZhaoPJ，CanFY．ZhuN．Hal，Studiesonthetissuecul-
ttigeofC2ma≈chumotophyl／船andcallichemicalconstituents
[J]．ChinBullBot，2003．20(5)；565—571．
Is]xbngL．WuLRTheTissueCultureandMassPrndweof
AdmireFlower(观赏花卉的组织培养与大规模生产)[M]．
Beljing；ChemicalIndustryPress，2003．
[43GuHYtQuLJ，MingxT，do．PlantG㈨4nd肘ok}
larManipulations(植物基因与分子操作)[M]．Beijing‘
PekingUniversityPublishingHouse，1995．
[5]QuLJ，GaHY，FuP．矗耐．如即a妇加如m“h
Biotechnotogy(现代生物技术介绍)[M]．BeijinglHigherE-
ducationPublishingHouse．2002．
Is]QiuLtQuLJ．ThestudyoftissueculturesystemoD
Erjgeronbreolscapu_f(V。-nt)Hand．一Maz&ingenetim*
formation[刀．dAnhulAgric5a．2006．34(”t19—22．
万方数据
青羊参遗传转化中组织培养系统的研究
作者： 邱璐， 王波， 范树国， 罗春梅， 李艳华， 陈凯， 周银燕， 杨启国， 杨福锁， QIU
Lu， WANG Bo， FAN Shu-guo， LUO Chun-mei， LI Yan-hua， CHEN Kai， ZHOU Yin-yan
， YANG Qi-guo， YANG Fu-suo
作者单位： 邱璐,王波,范树国,陈凯,周银燕,杨启国,杨福锁,QIU Lu,WANG Bo,FAN Shu-guo,CHEN
Kai,ZHOU Yin-yan,YANG Qi-guo,YANG Fu-suo(云南省楚雄师范学院,云南,楚雄,675000)，
罗春梅,李艳华,LUO Chun-mei,LI Yan-hua(云南省楚雄农业学校,云南,楚雄,675000)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(11)
被引用次数： 3次

参考文献(6条)
1.Li Q Z The Study on the Planting Technology of Cynanchum otophylum Schneid 2005
2.Zhao P J;Gan F Y;Zhu N Studies on the tissue culture of Cynanchum otophyllun and calli chemical
constituents[期刊论文]-Chinese Bulletin of Botany 2003(05)
3.Xiong L;Wu L F 观赏花卉的组织培养与大规模生产 2003
4.Gu H Y;Qu L J;Ming X T 植物基因与分子操作 1995
5.Qu L J;Gu H Y;Fu P 现代生物技术介绍 2002
6.Qiu L;Qu L J The study of tissue culture system on Erigeron breviscapus (Vant) Hand.-Mazz.in
genetic transformation[期刊论文]-J Anhui Agric Sci 2006(01)

引证文献(3条)
1.邱璐.杨启国.范树国.杨海艳.陈凯.邹银燕.黄静.郑才智 青羊参愈伤组织对抗生素敏感性研究[期刊论文]-江苏
农业科学 2010(3)
2.邱璐.杨海艳.胡明建.范树国.邹银燕.郑才智.吕加燕.杨启国 彝药青羊参离体培养庆大霉素抗性筛选[期刊论文]
-江苏农业科学 2008(6)
3.邱璐.黄静.范树国.杨海艳.邹银燕.郑才智.吕加燕.杨启国 半夏愈伤组织的诱导与分化研究[期刊论文]-江苏农
业科学 2009(6)


本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200711039.aspx