全 文 ：中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第5期2005年5月·713·
MDA生成作用，且抑制率与浓度呈正相关，表明黄
芩苷是黄芩药液和含药血清中的抗氧化物质。但
10t-g／mL黄芩苷抑制率远远低于含药血清的抑制
率，表明其并非是含药血清中唯一的抗氧化物质，可
能尚存在其他物质亦可发挥抗氧化作用。
结果还表明，相应血药浓度的小檗碱溶液并不
能对体外肝匀浆MDA的生成产生明显的抑制作
用。笔者曾试图提高小檗碱浓度进行实验，发现小檗
碱在10ng／mL以下时，基本无抑制作用；质量浓度
在10～100ng／mL时，抑制率在10％以下；而质量
浓度达250ng／mL时，抑制率也只有12％，远远弱
于含药血清及稀释药液的作用。这表明了在黄连中
可能尚含有其他具抗氧化活性的物质。同时，有文献
研究表明，大鼠ig给予小檗碱[(10、20mg／(kg·
d)，10d]有抗氧化能力，提示其体内抗氧化作用可
能是通过体内特异的机制发挥的[1]。另外，小檗碱质
量浓度在10和3．3ng／mL时，黄芩苷与小檗碱混
合液抑制作用与黄芩苷溶液作用一致，并无明显增
强现象，表明在血药浓度的范围内，小檗碱对黄芩苷
的抗氧化作用并无明显的促进。 ‘
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红曲有效成分洛伐他汀对高脂小鼠血脂代谢及
脂蛋白脂酶mRNA表达的作用
陈运中1’2，陈春艳1，张声华1
(1．华中农业大学食品科技学院功能食品与分子生物学基础研究室，湖北武汉430071；
2．武汉工业学院食品科学与工程学院，湖北武汉430023)
摘 要：目的 探讨红曲有效成分洛伐他汀对高脂小鼠血脂代谢调节的分子机制。方法 昆明种雌性小鼠48只，
按血清总胆固醇(TC)分为A、B、C、D、E、F6组：正常对照组、高脂对照组、绞股蓝总苷阳性对照组、洛伐他汀低、
中、高(5、15、30mg／kg)剂量组。A组喂饲基础饲料，其他各组喂饲高脂饲料；按剂量分别培给药6周，禁食12h
后，测定小鼠血脂水平相关指标；用Trizol试剂法提取总RNA，用反转录聚合酶链反应(RT—PCR)法检测肝、脾
组织脂蛋白脂酶(LPL)mRNA的表达。结果实验6周末，洛伐他汀低、中、高各剂量组使小鼠动脉硬化指数
(AI)均极显著低于高脂组(P三酯(TG)、低密度脂蛋白一胆固醇(LDL—C)均极显著低于高脂组(P相比，显著升高血清高密度脂蛋白一胆固醇(HDL—C)(PmRNA的表达，且呈剂量依赖关系。结论洛伐他汀通过促进LPLmRNA转录而调节高ll旨d,鼠血清血脂代谢水
平，这可能是其调节血脂，预防动脉粥样硬化(AS)等心脑血管疾病的机制之一。
收稿日期：2004—10—09
基金项目：湖北省自然科学基金项目(2002AB080)
作者简介：陈运中(1962一)，男，博士，教授，华中农业大学博士，主要从事食品资源开发及工程化技术研究，天然活性产物及功能研究，
曾获湖北省科技进步三等奖一项，获国家发明专利一项。
Tel：(027)83956210E—mail：chenyunzhong@whpu．edu．an；ehyzh6204@126．corn
万方数据
·714· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第5期2005年5月
关键词：红曲；洛伐他汀；高脂血症；动脉粥样硬化；脂蛋白脂酶(LPL)；反转录聚合酶链反应(RT—PCR)
中图分类号：R286．26 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2005)05—0713—05
EffectofLovastatinfromRedKojiconlipidmetabolismandexpression
oflipoproteinlipasemRNAinhyperlipidemicmice
CHENYun—zhon91”。CHENChun—yanl，ZHANGSheng—hual
(1．DepartmentofFu ctionF odandMolecularBiology，CollegeofScienceandTechnology，Huazhong
AgriculturealUniversity，Wuhan430071，China；2．CollegeofFoodScienceandEngineering，
WuhanPolytechnicUniversity，Wuhan430023，China)
Abstract：ObjectiveTostudyth ffectofLovastatinfromRedKojiconlipidmetabolisminmicefed
high—fatdietanditsanti—hyperlipidemicmolecularechanism．MethodsAccor ingto erumTClevel，48
femalemicewererandomlydividedintosixgroups：A—normalc ntrolgroup；B—high—fatcontrolgroup；C—
Gypenosides(20mg／kg)positivecontrolgroup；D，E，F—Lovastatin5，15，and30mg／kggroups．Group
Awasfedbasicdietandtheotherg oupswerefedhigh—fatdietforsixweeks．GroupsAandBwereig
normalwater，groupCwasigGypenosides20mg／kg，andgroupsD，E，FwereigLovastatin5，15，and
30mg／kg，respectively．Bloodlipidleve sweredeterminedaft r12h—starvation．ThemRNAexpression
oflipoproteinlipase(LPL)inliverandspleenwasdetectedbyreversetranscriptionpolymerasech inr ac—
tion(RT—PCR)．ResultsSerumTC，TG，andLDL—ClevelweresignificantlyloweringroupsC，E，F
thaningroupB，groupDwaslowerthangroupB，buttherewasnotsignificantlydifferentatthendof
sixweeks．SerumHDL—ClevelsweresignificantlyhigheringroupsD，E，FthaningroupB．A1wassig—
nificantlyloweringroupsD，E，FthaningroupB．Lovastatinincreasedth xpressionofLPLmRNAin
liverdose—dependently．ConclusionItissugge tedthatLovastatincouldmodulatebloodlipidbypromot—
ingmRNAexpressionofLPLinliver．ThismaybeoneimportantmechnaismofLovastatintomodulate
bloodlipidandpreventatherosclerosis(AS)．
Keywords：RedKojic；Lovastatin；hyperlipidemia；atherosclerosis(AS)；lipoproteinlipa e(LPL)；
reversetranscriptionpolymerasechainreaction(RT—PCR)
高脂血症引起血管内皮细胞损伤、平滑肌细胞
异常增殖、凝血活性增强及纤溶系统的抑制，导致血
栓形成、动脉粥样硬化等心脑血管疾病n]。脂蛋白脂
酶(1ipoproteinlipaseLPL)的活性增强能影响血
浆胆固醇如总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白一胆固醇
(LDL—C)、高密度脂蛋白一胆固醇(HDL—C)、极低密
度脂蛋白一胆固醇(VLDL—C)等的水平[2]，从而调
节血浆脂蛋白中的脂质代谢，抵抗高脂血症的发生。
LPL的下降可引起高脂血症[3]。
红曲是我国的传统中药，系用红曲霉属真菌紫
色红曲霉MonascuspurpureusW nt接种于大米发
酵制备而成，具有活血化瘀、健脾消食功效。现代医
学研究表明，功能红曲有效成分洛伐他汀(Lovas—
tatin)是3一羟基一3一甲基戊二酰辅酶A(HMG—
CoA)还原酶抑制剂，具有降低胆固醇、调节血脂作
用[4]。在国外，洛伐他汀作为长期安全的血脂调节药
物在临床应用[5“]。在国内，对红曲粉提取物血脂
康[71和国产洛伐他汀[8~1们的血脂调节生理功能作用
进行了研究。但从国产红曲中分离纯化有效成分洛
伐他汀，通过动物体内试验探讨其对肝脏、脾脏组织
的LPLmRNA表达的调节作用及其血脂调节的分
子作用机制的研究未见报道。本实验以自制的红曲
米为原料，制备纯洛伐他汀，通过动物实验，观察洛
伐他汀对实验高脂小鼠脂质代谢的影响及其对肝
脏、脾脏组织的LPLmRNA表达的调节作用，探讨
其血脂调节的分子作用机制。
1材料
1．1洛伐他汀制备：红曲米(60～80目)粉用醋酸
乙酯索式抽提1h，萃取液40℃真空浓缩，中性氧
化铝柱色谱分离(色谱柱3cm×35cm，中性氧化
铝上海新城精细化工有限公司生产，用石油醚一醋酸
乙酯梯度洗脱，收集无色组分)，真空浓缩至干，甲醇
复溶经紫外及可见光扫描仪，在229、237、247nm
有特征吸收；HPLC分析检测呈单一峰，出峰时间与
洛伐他汀对照品一致，与文献报道一致，证明其组分
为洛伐他汀。经HPLC—MS测其相对分子质量404，
进一步经1H—NMR、”C—NMR和IR鉴定其结构。
经HPLC定量分析纯度达99％，用1％CMC水溶
液配制成乳状液，每周配1次。
1．2动物：昆明种小鼠(SPF级)，雌性，体重18～
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第5期2005年5月·715·
22g，由湖北省医学动物实验中心提供。
1．3试剂与仪器：洛伐他汀(Lovastatin)对照品，
美国Sigma公司；胆固醇，武汉生命技术有限公司；
脱氧胆酸，武汉中健科技发展有限公司：绞股蓝总苷
片，广州白云山中药厂，批号0203016；血清TC，血
清甘油三酯(TG)，HDL—C酶法测定试剂盒，上海
科欣技术研究所；Trizol试剂，Invitrogen公司；
RNaseInhibitor、M—MLVRT酶、dNTP，Promega
公司；Taq酶(5U／pL)，MBI公司；其他试剂均为
分析纯。GeneAmpPCRSystem9700(PEApplied
Biosystems)RT—PCR仪，TanonGis一1000凝胶图
像处理系统。
1．4饲料：基础饲料由湖北省医学动物实验中心提
供。高脂饲料配方：88．7％基础饲料、1％胆固醇、
10％猪油、0．3％脱氧胆酸。
2 方法
2．1 动物分组及洛伐他汀对食用高脂饲料小鼠的
预防实验：昆明种雌性小鼠48只，喂养1星期以适
应环境。小鼠禁食12h后，次日晨取尾尖血测定
TC水平，根据TC水平，随机分为A、B、C、D、E、F
共6组，每组8只。A组为正常对照组，B组为高脂
模型组，C组为阳性(绞股蓝皂苷)对照组，D、E、F
组分别为洛伐他汀低、中、高剂量(5、15、30mg／kg)
组。A组给普通饲料，其他组给高脂饲料，自由饮水
饲养6周。A、B组ig蒸馏水，C组ig绞股蓝总苷20
mg／kg，D、E、F组分别ig洛伐他汀5、15、30
mg／kg。连续给药6周。末次给药后，所有动物禁食
18h，眼球取血，3000r／min离心10min，分离血
清，待测。取血后处死动物，取肝、脾、肾、胸腺称重
(实验期间死掉一只实验小鼠)，称重后立即放入液
氮罐在一70℃储存，待用。
2．2 观察指标及测定方法：血清TC、TG、HDL—C
测定均采用酶联比色法，按试剂盒说明方法进行，以
751分光光度计比色测定。LDL—C水平和动脉硬化
指数(AI)值用公式计算[I川。LDL—C用Friedwald
公式计算FLDL—C(mmol／L)一TC(mmol／L)一
HDL℃(mmol／L)一TG(mmol／L)×0．2；AI一
(TC—HDL—C)／HDL—C]。
肝脏指数一肝脏质量(g)／小鼠体重(g)×1000
脾脏指数、肾脏指数、胸腺指数表示方法同肝脏指数。
2．3 RNA分离与鉴定：用Trizol试剂法提取肝脏
和脾脏组织总RNA，按试剂盒说明书操作。紫外分
光光度法测定提取的总RNA的吸光度(A)值，
A猢／A：。。>1．7，用甲醛变性凝胶电泳对总RNA进
行定性分析，在甲醛变性凝胶电泳上可清晰看到
28S和18S两条带，其亮度为2：1，并可见5S条
带。表明所提取的总RNA纯度高，没有降解，可作
为逆转录反应的模板。
2．4 引物设计与合成：根据Genebank中LPL
mRNA的全序列并利用计算机辅助设计，LPL
(BC003305)上游引物LPLl：5，-CGCTGTAA—
CAATCTGGGCTAT一37；下游引物LPL2：5，-
CCACCTCCGTGTAAATCAA一3
7
(产物大小为
268bp)。13-肌动蛋白(13一actin)：上游引物Actin—A：
5’一TGCTGTCCCTGTATGCCTCT一3‘；下游引物
Actin—B：57一GGTCTTTACGGATGTCAACG一3
7
(产物大小为462bp)，经PAGE纯化。引物由中科
开瑞生物芯片科技公司合成。
2．5 反转录聚合酶链式反应(RT—PCR)：反转录
合成cDNA，条件是：先加模板RNA1肛L，50
umol／LOligodT引物1弘L，RNA—freeH2010
tLL，70℃、5min，迅速置冰上，加入dNTP(10
／1mol／L)2肛L，5×缓冲液4pL，40U／／』LRNase
抑制剂0．5弘L，200U／uLM—MLVRT酶1pL，
RNA—freeH20补至20弘L。42℃、60min，然后
95℃、5min，最后置冰上。以2tLLRT产物为模板
进行PCR扩增反应，反应条件：94oC、5min；35个
循环：94℃、30s；53℃、30S；72。C、30S；72℃、5
min；最后置4℃。PCR产物以1．5％凝胶电泳检
测，用凝胶图像处理系统对照片进行扫描定量分析。
2．6 统计分析：数据均以z±s表示，结果采用
SAS统计软件进行t检验和方差分析，并以LSD法
进行各组间的两两比较。
3结果
3．1小鼠体重变化情况：由表1可以看出，实验前
根据小鼠血清TC随机分组，各组间小鼠体重差异
不显著。实验结束时，各组小鼠体重变化较大，高脂
组小鼠体重明显高于正常小鼠(P期食用高脂食物，容易引起肥胖。绞股蓝组和洛伐他
汀各剂量组的小鼠体重低于高脂组，但无统计学
差异。
3．2洛伐他汀对小鼠脏器指数的影响：由表1可以
看出，洛伐他汀各组肝脏指数均极显著高于正常对
照组(P脏指数、肾脏指数各组之间差异均不显著。高脂组胸
腺指数显著低于正常组(P量组的胸腺指数高于高脂组，但差异不显著。表明洛
伐他汀不会明显影响实验小鼠的脏器指数。
万方数据
·716· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第5期2005年5月
与A组比较：。P’P3．3洛伐他汀对小鼠血脂水平的影响：由表2可
见，饲喂高脂饲料各组小鼠其血清TC极显著高于
正常对照组(P<0．01)，血清TG明显高于正常
组，说明实验期间高脂模型成功。洛伐他汀低剂量组
血清TC低于高脂组，但无统计学差异。绞股蓝组和
洛伐他汀中、高剂量组血清TC极显著低于高脂组
(P低于高脂组(P高剂量组的小鼠血清TG均极显著低于高脂组
(P有降低作用，且呈剂量依赖关系。洛伐他汀低剂量组
可以升高高脂小鼠血清HDL—C，但与高脂组差异不
显著。洛伐他汀中剂量组显著升高高脂小鼠血清
HDL—C(P高脂小鼠血清HDL—C(P<0．01)，且与正常组差异
不显著。说明洛伐他汀对高脂小鼠具有升高血清
HDL—C作用，且呈剂量依赖关系。高脂饲料组小鼠
血清LDL—C水平极显著高于正常对照组(P<
0．01)，绞股蓝和洛伐他汀中、高剂量组小鼠血清
LDL—C水平极显著低于高脂组(P他汀低剂量组小鼠血清LDL—C水平低于高脂对照
组，但无统计学差异。说明洛伐他汀具有降低高脂小
鼠血清LDL—C的作用，且与剂量呈正相关关系。
与高脂模型组相比，洛伐他汀低、中、高各剂量
组分别使小鼠血清TC降低10．47％、30．12％和
39．58％；分别使血清TG降低18．35％、57．59％
和54．43％；分别使血清HDL—C升高7．14％、
25．51％和39．80％；分别使血清LDL—C降低
12．07％、36．22％和47．53％。说明洛伐他汀对高
脂小鼠血脂代谢具有良好的调节作用，且呈剂量依
赖关系。
3．4 洛伐他汀对AI的影响：从表2可以看出，饲
喂高脂饲料各组小鼠AI极显著高于正常组(P<
0．01)，绞股蓝和洛伐他汀低、中、高剂量组小鼠AI
值均极显著低于高脂组(P具有降低高脂小鼠AI的作用，且呈剂量依赖关系。
表2洛伐他汀对小鼠血脂水平和Al的影响(j±s)
Table2 EffectofLovastatinonbloodlipidlevelsandAIinmice(；士s)
与A组比较：一P—P3．5 洛伐他汀对小鼠肝脏和脾脏LPLmRNA表
达的促进作用：以各组肝脏、脾脏组织LPL与p_
actinmRNA的mRNA基因表达凝胶照片吸光度
值的比值为纵坐标，以各组(A、B、C、D、E、F)为横
坐标，RT—PCR结果显示(图1)，高脂模型组与正
常对照组相比较，肝组织中LPLmRNA表达水平
降低20％；而洛伐他汀和绞股蓝用药组，与高脂模
型组相比较，LPLmRNA表达水平显著升高，绞股
蓝组，洛伐他汀低、中、高剂量组比高脂模型组分别
升高18％、50％、81％、90％；尤其是洛伐他汀中、高
剂量组，比正常组分别升高21％、54％。脾组织中的
LPLmRNA表达差异不大，无统计学意义。
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第5期2005年5月·717·
羞
墨
呈
麦
耋
一
阿1
l!壁壁I
A B C D E F
图1洛伐他汀对高脂小鼠肝脏、脾脏组织
LPLmRNA表达的影响
Fig．1EffectofLovastatinonLPLmRNAexpression
inliverandspleentissueofhyperlipidemicmice
4讨论
本实验以绞股蓝总苷为阳性对照，观察功能红
曲有效成分洛伐他汀对高脂饲料喂养小鼠的脂质代
谢和肝、脾组织中LPLmRNA表达的影响。结果表
明，高脂组小鼠的血清TC、TG、LDL—C均显著高于
正常组，HDL—C显著低于正常组，说明动物实验高
脂模型是成功的。实验结果显示，绞股蓝总苷阳性对
照组和洛伐他汀各剂量组均影响高脂小鼠的血脂代
谢。绞股蓝总苷阳性对照组和洛伐他汀中、高剂量组
与高脂组相比，能显著降低高脂小鼠血清TC、TG、
LDL—C的水平(P显著升高实验小鼠血清HDL—C的水平，与高脂组
比较差异显著(P结果是一致的[8]。说明洛伐他汀对实验小鼠血脂代
谢具有良好的调节作用，且呈剂量相关关系。洛伐他
汀各剂量组均能显著升高高脂小鼠血清HDL—C的
水平，与极显著降低高脂小鼠AI(P用是一致的。HDL—C的水平升高有利于外周胆固醇
的清除，防止胆固醇在动脉壁沉积，从而阻碍动脉粥
样硬化(AS)形成。
LPL，一方面可以催化载有丰富胆固醇的乳糜
微粒(CM)和极低密度脂蛋白(VLDL)中的TG
水解，产生缺乏TG的CM和VLDL残粒，二者可
在肝脏中被迅速代谢清除，结果使血液中的TG和
VLDL—C水平降低[12]；另一方面，除肝脏和小肠分
泌合成HDL—C外，CM和VLDL的分解代谢产物
也是HDL—C的一个重要来源[1引，故LPL的水平升
高，可大量水解血液中VLDL和CM，提高血液
HDL—C的水平。本实验结果表明，洛伐他汀明显提
高高脂血症小鼠肝组织中LPLmRNA的表达水
平，且呈剂量正相关依赖关系；同时，LPLmRNA
的表达水平提高与实验小鼠肝组织中LPL活性增
强，及其对高脂小鼠血清中TG、TC、LDL—C的降低
作用和HDL—C的升高作用呈正相关。洛伐他汀对
高脂小鼠血清HDL—C的升高作用与降低AI的作
用也是一致的。
本实验结果提示，洛伐他汀提高LPLmRNA
的表达可能是其调节血脂水平，防治AS的重要分
子作用机制之一。
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更正：2005年第4期第582页“荒漠肉苁蓉茎腐病的初步研究”作者将文内绿“享”更正为绿“亨”。
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万方数据
红曲有效成分洛伐他汀对高脂小鼠血脂代谢及脂蛋白脂酶
mRNA表达的作用
作者： 陈运中， 陈春艳， 张声华， CHEN Yun-zhong， CHEN Chun-yan， ZHANG Sheng-hua
作者单位： 陈运中,CHEN Yun-zhong(华中农业大学食品科技学院,功能食品与分子生物学基础研究室,湖
北,武汉,430071;武汉工业学院食品科学与工程学院,湖北,武汉,430023)， 陈春艳,张声华
,CHEN Chun-yan,ZHANG Sheng-hua(华中农业大学食品科技学院,功能食品与分子生物学基础
研究室,湖北,武汉,430071)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(5)
被引用次数： 9次

参考文献(13条)
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细胞双向调节作用的实验研究[期刊论文]-中华普通外科杂志2010,25(8)
3. 红曲米提取物的抗疲劳作用动物实验[期刊论文]-营养学报2005,27(5)
4. 胡晓清.袁梦仙.陈福生.王汝毅.周有祥 双向薄层层析测定红曲中Monacolin K[期刊论文]-中国酿造2004(2)
5. 王东.丁华.徐红岩.魏欣冰 洛伐他汀、普罗布考对小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇含量的影响[期刊论文]-
中国药理学通报2004,20(6)
6. 崔淑珍 辛伐他汀治疗高脂血症120例疗效观察[期刊论文]-中西医结合心脑血管病杂志2008,6(9)
7. 吴顶锋.刘婧 洛伐他汀治疗高脂血症80例疗效观察[期刊论文]-航空航天医药2010,21(9)
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9. 陈志辉.徐良梅.单安山.宋凯.程宝晶 小麦水溶性非淀粉多糖含量对肉仔鸡脂代谢的影响[期刊论文]-中国饲料
2010(22)
10. 罗远琼.糜漫天.许红霞.韦娜.张乾勇 洛伐他汀对BRCA1基因高表达MCF-7乳腺癌细胞p21的影响[期刊论文]-第
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引证文献(9条)
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2.王永春.邢建生 氟伐他汀与辛伐他汀治疗原发性高胆固醇血症的成本-疗效分析[期刊论文]-现代药物与临床
2010(4)
3.胡青.崔泠.张甦.王柯.季申 降血脂和降血糖类中药及保健食品中违禁添加17种化学药物的液相色谱-离子阱质谱
定性检测[期刊论文]-中国医药工业杂志 2009(2)
4.李雪梅.沈兴海.段震文.郭树仁 红曲霉代谢产物的研究进展[期刊论文]-中草药 2011(5)
5.汪小根.张健泓 山红调脂滴丸的制备工艺研究[期刊论文]-中国药师 2009(7)
6.赵珺彦.刘小杰 红曲-植物甾醇酯复方制剂调血脂作用研究[期刊论文]-中草药 2011(11)
7.刘兆玺.杜金华.傅贸润.马明 红曲功能及其研究进展[期刊论文]-酿酒 2006(4)
8.吴利花.范春雷 脂蛋白脂酶与疾病的关系及中药对脂蛋白脂酶的作用[期刊论文]-现代生物医学进展 2008(4)
9.李安林 硫辛酸和N-乙酰半胱氨酸对大鼠血脂代谢影响[学位论文]硕士 2006


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