全 文 ：中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第7期2005年7月·1065·
不高，但仍表明：采用浸苗法将野生天麻总DNA导
入马铃薯中的方法是可行的。
GAFP其相对分子质量为14kd，它能强烈抑
制腐生性真菌生长，从而阻止密环菌侵染顶生球茎，
使其得以正常生长。马铃薯中不存在此蛋白，通过
SDS--PAGE发现在转化的植株中有GAFP，说明
GAFP基因已整合到马铃薯基因组中，并且通过基
因表达调控而翻译GAFPL1j。
野生天麻的有效成分为天麻素即对羟基苯一口一D一
葡萄糖吡喃糖苷，它是一种小分子有机物质，其甲醇
液在220nm有最大吸收峰。本实验通过紫外扫描法
从200株转化的马铃薯中检测到21株的扫描图谱与
正常对照组有明显差异，说明天麻的基因在马铃薯中
已经表达并且导致马铃薯发生变异。变异的发生可能
通过受、供体基因同源重组这一整合途径或通过供体
DNA片断插入到受体基因组中[1⋯。
笔者通过薄层色谱法在3株转化的植株中检测
到天麻素，而天麻素不属于蛋白质，说明天麻的基因
在马铃薯中已经表达并且通过一系列复杂的体内代
谢产生了天麻的有效药用成分天麻素。但转基因马
铃薯中含天麻素很少(样品浓缩200倍)，如何提高
转基因马铃薯中野生天麻的有效药用成分——天麻
素的量有待于进一步研究。
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雷公藤属3种植物不同群体和个体中雷公藤甲素的研究
黄文华1，郭宝林H，斯金平2，阮秀春2，余竞光1，孙兰1
(1．中国医学科学院中国协和医科大学药用植物研究所，北京100094；
2．浙江省丽水市林业科学研究所，浙江丽水 323000)
摘要：目的测定雷公藤属3种植物(雷公藤、昆明山海棠和黑蔓)不同群体和个体中雷公藤甲素(triptolide)，为
评价雷公藤药材质量和寻找雷公藤的优质种质奠定基础。方法建立雷公藤甲素HPLC测定方法，并测定了全国
主要分布区25个群体91个个体的木质部和韧皮部中的雷公藤甲素。结果黑蔓的雷公藤甲素质量分数很低；雷
公藤和昆明山海棠种间的雷公藤甲素差异不明显，个体质量分数木质部为1．0×10“～5．83×10_5；韧皮部为
2．3×10“～1．030×10～。结论雷公藤和昆明山海棠不同个体雷公藤甲素质量分数最高值与最低值相差约50
倍，不同居群雷公藤甲素质量分数最高值与最低值相差10多倍，不同来源的药材质量差异极大，严重影响用药的
安全性；雷公藤甲素质量分数高的居群位于浙江西南部和中部、湖南新宁、贵州雷山和安徽黄山；湖南新宁、贵州雷
山和浙江江山居群中有雷公藤甲素质量分数极高的个体，值得进一步研究，以寻找质量分数高的优良单株。
关键词：雷公藤属；雷公藤；昆明山海棠；黑蔓；雷公藤甲素；高效液相色谱法
中图分类号：R282．6 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2005)07—1065—04
收稿日期：2004—11—23
基金项目：浙江省林业重大科研项目“木本药材高效栽培技术及有效成分提取工艺的研究”资助项目(2002A01)
作者简介：黄文华(1969一)，女，新疆石河子市人，助理研究员，硕士，中国医学科学院中国协和医科大学药用植物研究所工作，从事天然
药物和药用植物资源的科研工作。Tel：(010)·62899728Fax：(OLO)62899717E—mail：hwhzh69@sohu．com
*通讯作者郭宝林Tel：(010)62899732E—mail：guobaolin010@yahoo．eom．cn
万方数据
·1066· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第7期2005年7月
Triptolideindifferentpopulationsandi dividualsofthreespeciesofTripterygiumHook．f．
HUANGWen—hual，GUOBao—linl，SIJin—pin92，RUANXiu—chun2，YUJing—guan91，SUNLanl
(1．InstituteofMedicinalPl ntDevelopment，ChineseAcademyofMedicalSciencesandPekingUnionMedicalCollege，
Beijing100094，China；2．InstituteofForestrySci ncesofLishui，Lishui323000，China)
Abstract：ObjectiveTodeterminethetriptolideindifferentpopulationsandi dividualsofthree
speciesofTripterygiumHook．f．(Tripterygiumwilfordii，T．hypoglaucum，andT．regellii)，establisha
foundationforevaluatingthequalityofspeciesnTripterygiumHook．f．，andfindgoodgermplasmof
TripterygiumHook．f．MethodsHPLCmethodf reterminingtriptolidewasestablished．Thetriptolide
inxylemandphloemof25populationsand91individualsfrommaindistributionareasinChinaw sdeter—
mined．ResultsTheriptolideinT．regelliiwasverylow．TheinterspeciesdifferencebetweenT．wil-
fordiiandT．hypoglaucumwasnotconspicuous．Therangeoftriptolideofthindividualwas1．0×10一一
5．83X10—5inxylemand2．3X10～6—1．030X1 —4inphloem．ConclusionThequalityofspeciesn
TripterygiumHook．f．fromdifferentsourcesvariesignificantly．Itwi laffectseriouslythesecurityof
administeringdrugs．Thehighestvalueoftriptolideisabout50timesa thelowestvalueindifferentindi—
vidualsndmorethan10timesindifferentpopulations．Thepopulationsw thhighertriptolideareinthe
southwestandmiddlepartsofZhejiangProvince，Xinning，HunanProvince，Leishan，GuizhouProvince，
andHuangshan，AnhuiProvince．Theindividualswithveryhighcontentsof riptolideexistsinXinning，
HunanProvince，Leishan，GuizhouProvince，andJi gshan，ZhejiangProv ncepopulations．Sofurther
studyonthethreepopulationssh uldbecarriedoutofindgoodindividuals．
Keywords：TripterygiumHook．f．；T．wilfordiiHook．f．；T．hypoglaucum(Levi．)Hutch；
T．regelliiSpragueetTakeda；triptolide；HPLC
雷公藤TripterygiumwilfordiiHook．f．系卫
矛科雷公藤属植物，具有抗炎、抗菌、免疫调节、抗肿
瘤及抗生育等多种药理作用，其原生药及其各类制剂
的临床应用极为广泛，用于治疗类风湿性关节炎、系
统性红斑狼疮、肾脏病和多种皮肤病，均取得良好的
疗效，尤其是治疗各种免疫亢进性疾病的首选药物。
但雷公藤又具有一定的毒性，其主要有效成分同时又
是毒性成分，治疗安全范围比较窄，临床使用的不良
反应时有报道，因此，严格控制雷公藤制剂的质量是
当前雷公藤应用最关键的问题，而药材质量控制是首
要环节，但迄今为止，该方面的研究极为薄弱。
雷公藤同属植物昆明山海棠T．hypoglaucum
(L6v1．)Hutch．和黑蔓T．regelliiSpra ueet
Takeda含有与雷公藤相同和类似的成分，具有相近
的功效，也有相应的临床使用制剂。本课题组通过对
雷公藤属3种植物在全国主要分布地区资源的调查
和药材及活植物的采集、引种，研究其中的主要有效
成分质量分数以及其影响的主要因素，系统评价雷
公藤药材的质量，并从中筛选出优良的种质，为今后
的种植推广，最终实现雷公藤药材质量的稳定可控
奠定基础。本实验首先对雷公藤属3种植物25个群
体及其中的个体中雷公藤甲素质量分数进行研究。
笔者采集的雷公藤活植物经种植后发现，采集
于浙江和福建泰宁海拔高于500m的样品，依据其
形态特征无法将其归于雷公藤或昆明山海棠，暂定
名为拟雷公藤和拟昆明山海棠，即依据《中国植物
志》：雷公藤叶小，叶背无白粉；昆明山海棠叶片大，
叶背白粉明显；而拟雷公藤叶片较小，白粉较少或
无，接近雷公藤；拟昆明山海棠，叶片较大，叶背有白
粉，接近昆明山海棠。另外又发现嫩叶颜色特别的两
种类型：C：紫红，D：嫩绿。本实验先据此分类，形态
学以及形态与质量的关系待以后进一步研究。
1仪器、试剂与药材
1．1 仪器：Waters一高效液相色谱仪：Waters600
型泵，2487型检测器，Millennium32色谱工作站。
1．2试剂：甲醇为色谱纯，重蒸水，其他提取用有机溶
剂为分析纯。雷公藤甲素对照品由笔者从雷公藤植物
根中分离得到，其光谱和熔点测定结果与文献报道一
致，HPLC色谱归一法测定质量分数大于99％。
1．3药材：试验所用雷公藤属3种植物的根采自浙
江、福建、湖南、湖北、贵州、云南、江西、安徽、吉林9
个省的22个市县的25个居群，每个居群取3～5个
个体，共计91个样本(表1)，采集时问为2002年和
2003年10～12月。由于雷公藤根的韧皮部和木质
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第7期2005年7月·1067·
部所含的成分种类和质量分数以及所具有的毒性有
较大差别，本实验均将每一个个体样本分为两个部
位测定，取粗细基本一致的根进行分析。
2方法与结果
2．1色谱条件：色谱柱：Merck公司的Lichrospher
100RP一18e柱(250mm×4．6mm，5肛m)，流动相：
甲醇一水(45：55)，体积流量：0．75mL／min，检测波
长：218nm，柱温：22℃，进样量：10弘L。雷公藤甲素
保留时间：12．33min，对照品和样品色谱图见图1。
图1 霄公藤甲素对照品(A)和雷公藤药材样品
(B)的HPLC色谱图
Fig．1HPLCehromatogramsft iptolide(A)and
sampleofr．wilfordii(B)
2．2对照品溶液的制备：用微量分析天平精密称取
雷公藤甲素对照品适量，用甲醇一水(6：4)溶解并定
容得9．156／zg／mL溶液，作为对照品溶液。
2．3供试品溶液的制备：将每一个样本先刮去植物
根的栓皮，然后将其韧皮部与木质部分开，分别粉碎
过40目筛，备用。参照文献[1]方法精密称取样品粉
末0．27g，置磨口三角瓶中，加醋酸乙酯25mL，浸
泡过夜(16h)，超声提取45min，静置，过中性氧化
铝柱(含2．5g中性氧化铝，玻璃柱d=1．0cm)，然
后用15mL醋酸乙酯冲洗柱子，合并流出液和洗脱
液，减压回收醋酸乙酯至干，放置过夜后，用甲醇一水
(6：4)溶液溶解并定容至2mL容量瓶中，摇匀，过
0．45肛m微孔滤膜，取续滤液为进样液。
2．4 标准曲线及线性范围：精密吸取雷公藤甲素对照
品溶液，依次进样2、4、8、10、12、16、18弘L，分别进样3
次，以峰面积平均值(A)为纵坐标，对照品进样量(C)为
横坐标，得线性回归方程：A一3．64×106C一2．01×
104，r一0．9999，线性范围：0．018～0．165肛g。
2．5精密度试验：精密吸取雷公藤甲素对照品溶液
10弘L，连续进样6次，测定峰面积，平均峰面积为
330141．7，RSD一0．86％(咒一6)。
2．6稳定性试验：精密吸取样品391—2溶液10弘L，
每2h进样1次，共测定5次，雷公藤甲素的平均峰
面积为385270，RSD一1．20％(72—5)，表明供试
样品溶液在8h内稳定。
2．7重复性试验：按2．3项方法分别制备5份样品
(42—1)溶液，按上述色谱条件测定，雷公藤甲素的平
均峰面积为65860，RSD=1．41％(咒一5)。
2．8加样回收率试验：精密称取已知质量分数的样
品5份，加入适量对照品溶液，混匀，按2．3项方法
处理，在上述色谱条件下测定雷公藤甲素(肛g)，计
算平均回收率为98．06％，RSD一0．77％(咒一5)。
2．9样品测定：分别精密吸取样品溶液各10“L，
注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件各测定3次，
计算样品中雷公藤甲素，结果见表1。
3讨论
3．1本实验的测定方法经过了重复性、精密度、稳
定性和回收率试验，并且获得的药材质量分数范围
值与文献报道的使用薄层扫描、HPLC以及气相色
谱方法测定的结果基本一致[1~4]。
3．2在分析样品的结果中，雷公藤和昆明山海棠中
个体韧皮部质量分数(弘g／g)最高值103．0与最低
值2．3相差约50倍，木质部质量分数(弘g／g)最高值
58．3与最低值1．0也相差约50倍，居群韧皮部最
高值64．1与最低值5．4相差10多倍，木质部最高
值23．3与最低值1．9也相差10多倍，表明不同来
源的药材质量差异极大，对于雷公藤甲素这一安全
范围很小的成分，药材的质量至关重要。本研究未发
现文献报道[5]的类似福建永安产药材木质部质量分
数(弘g／g)达102．5和浙江新昌产药材全根质量分
数75．0的情况，有待于以后研究的进一步验证。
3．3按位于总样本数量前20％为限，木质部大于
17．099／g，或韧皮部大于50．0弘g／g个体确定为优
良单株，木质部平均质量分数(gg／g)大于15．0，或
韧皮部平均大于40．0居群确定为优良居群。可看出
韧皮部高于40．0的8个优良居群按顺序为：浙江遂
昌64．1>浙江江山49．1>浙江景宁47．3>安徽黄
山46．9>贵州雷山46．2>湖南新宁44．2>浙江义
乌44．1>浙江开化40．8；木质部高于15．0的7个
优良居群按顺序为：湖南新宁24．8>浙江松阳(拟
雷公藤)21．5>浙江松阳(雷公藤)17．6>浙江遂昌
16．4>福建泰宁15．9>浙江江山15．7>浙江庆元
15．2。据此找到值得关注的韧皮部和木质部质量分
数均比较高的优良居群分布于浙江以义乌为界，以
西以南的地区，其中遂昌和江山居群质量分数最高，
其他地区的韧皮部一般不低于30．0，木质部不低于
10．O(缙云、武义的拟昆明山海棠除外)，而位于浙江
㈠ 口㈦
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万方数据
·1068· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第7期2005年7月
表1雷公藤属植物不同个体和群体雷公藤甲素的测定结果
Table1 Determinationoftr ptolideindifferentindividualsandpopulationsofspeciesnTripterygiumHook·f．
样本编号为统一编号，便于不同研究结果的相互比较}加。一”标注的为雷公藤甲素居于前z0％的数值。
Samplecodeisuniformforintereomparisonofdifferentsearchresults；“一”means
thattriptolideiesb fore20％
沿海的苍南和乐清居群质量分数低。湖南新宁、贵州
雷山和安徽黄山的居群为质量分数高的居群，历来
认为福建泰宁产雷公藤质量较好，但笔者发现仅木
质部质量分数相对较高，因此，从雷公藤甲素质量分
数的角度看，不及浙江产。而江西、云南产雷公藤或
昆明山海棠的质量分数低，将不被考虑作为提高雷
公藤甲素质量分数良种选育的种质资源。
3．4在分析的个体样本中，湖南新宁的132号韧皮
部质量分数(弘g屈)高达103．0、木质部达58．3，在所
有分析样品中质量分数最高；其次为贵州雷山的159
号，分别为韧皮部80．0，木质部17．6；以及浙江江山
的41号(韧皮部78．3，木质部24．8)；同时发现这3
个居群个体间差异极大，将值得扩大样本研究，从中
选择出优良的单株。
3．5黑蔓(东北雷公藤)植物在所有样本中雷公藤
甲素质量分数最低，在木质部中仅为0．7／-g／g，韧皮
部为2．8pg屈，符合目前用药的实际情况，也不应作
为雷公藤入药。笔者没有发现雷公藤和昆明山海棠
种间存在雷公藤甲素的质量分数的明显差异。在形
态和质量分数的相关性方面，仅发现在同一地区分
布于高海拔的形态接近昆明山海棠的样本，其雷公
藤甲素质量分数低于分布于低海拔形态为典型雷公
藤的样本(如浙江缙云的样本，武义的拟昆明山海
棠)，是形态的或地理为主要影响因素有待进一步研
究，可以考虑在遂昌、景宁和武义采集低海拔样本，
以及测定移栽于相同环境下的样本。
3．6木质部和韧皮部的雷公藤甲素质量分数的一
致或不一致，规律不明显。
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万方数据
雷公藤属3种植物不同群体和个体中雷公藤甲素的研究
作者： 黄文华， 郭宝林， 斯金平， 阮秀春， 余竞光， 孙兰， HUANG Wen-hua， GUO Bao-lin
， SI Jin-ping， RUAN Xiu-chun， YU Jing-guang， SUN Lan
作者单位： 黄文华,郭宝林,余竞光,孙兰,HUANG Wen-hua,GUO Bao-lin,YU Jing-guang,SUN Lan(中国医
学科学院,中国协和医科大学药用植物研究所,北京,100094)， 斯金平,阮秀春,SI Jin-
ping,RUAN Xiu-chun(浙江省丽水市林业科学研究所,浙江,丽水,323000)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(7)
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