全 文 ：中草焉 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第1I期2008年11月· 723·
表2不同激素配比不定芽的诱导率
Table2 Adventitioussh otinducingratesfrom
cotyledonandhypocotylwithdifferent
hormonecombinations
子叶 下胚轴
培养基／(mg·L-1)产生不定芽不定芽诱产生不定芽不定芽诱
的外植体数导率／％的外植体数导率／％
mg／L，诱导率分别为90％和95％，适宜子叶不定芽
诱导的激素组合是MS+IAA0．3mg／L+6-BA4
mg／L，适宜下胚轴不定芽诱导的激素组合是MS+
KT2mg／L+NAA0．2mg／L。生根培养均采用
1／2MS+NAA0．1mg／L，7d后生根率为100％。实
验中MS+KT2mg／L+NAA0．5mg／L可诱导菊
花子叶和下胚轴愈伤组织直接出苗，成苗周期大大
缩短，不定芽生长健壮。
在本实验中，随着2，4一D质量浓度的升高，愈伤
组织诱导率增大，但其诱导的愈伤组织普遍呈现出
紫红色，在其后期的生长过程中出现严重褐化现象，
这可能是由于2，4一D易引起培养物突变的结果[8]。
鉴于2，4一D的高诱导率，在不定芽诱导中，可以选择
其他的激素配合2，4一D使用，以充分利用其诱导率
高的优点。但在菊花愈伤组织诱导时，不宜添加2，4一
D，以防止褐化发生。
参考文献：
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叶下珠愈伤组织的诱导与培养
常莉1’2，薛建平h2‘
(1．淮北煤炭师范学院生命科学学院，安徽淮北 235000；2．资源植物生物学安徽省重点实验室，安徽淮北235000)
摘要：目的建立叶下珠愈伤组织培养方法。方法采用组织培养方法，比较不同外植体、蔗糖、植物生长物质及
其配比对叶下珠愈伤组织诱导的影响。结果茎段的诱导率最高，为55．56％，叶片诱导不出愈伤组织。6-BA是叶
下珠愈伤组织形成的主要影响因素，2，4-D、NAA、蔗糖次之。结论叶下珠愈伤组织诱导及继代的适宜培养基为
MS+2，4一D0．5mg／L+6-BA1．0mg／L+NAA0．1mg／L+蔗糖10g／L。
关键词：叶下珠；组织培养；愈伤组织
中图分类号：R282．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)11—1723—04
Callusinductionandcultivationofmvllanthusurinaria
CHANGLil．2。XUEJian—pingh2
(1．DepartmentofBiology，HuaibeiCoalIndustryTeacher’SCollege，Huaibei235000，ChinaI2．AnhuiKey
LaboratoryofPlantResourcesandBiology，Huaibei235000，China)
Abstract：ObjectiveToestablishculturemethodforPhyllanthusurinaria．MethodsTostu ythe
possibleeff ctivefactorsfcultureconditionbycomparingw thdifferentexplants，sucrose，plantgrowth
substance，anditsr tio．ResultsTheinductivityofs emwasthehighestabout55．56％，butcallusof
收稿日期：2008—01．14
基金项目：国家农业成果转化基金项目(05EFN213400124)I淮北市重大专项(06085)
作者简介：常莉(1981一)，女，安徽砀山人，讲师．硕士．主要从事组织培养技术研究．
*通讯作者 薛建平Tel：(0561)3802025E—mail：xuejp2000@yahoo．corn．cn
万方数据
·1724- 中草蒋ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第11期2008年11月
leavescouldnotbeinduced．6-BAwasthemostimportantf ctorncallusinduction。followedby2，4一D
NAAandsucrose．ConclusionTheoptimalediumtoinduceandsubcultureisMS+2，4一D0．5mg／L+
6-BA1．0mg／L+NAA0．1mg／L+sucrose10g／L．
Keywords：PhyllanthusurinaHaL．Itissue—culture；callus
叶下珠PhyllanthusuHnaHaL．为大戟科叶下
珠属植物，全草人药，有清肝明目、收敛利水、解毒消
积等功效。现代研究表明，其主含酚类、萜类、黄酮、
生物碱以及脂类化合物，其中已初步证实短叶苏木
酚酸甲酯等成分具明显的抗乙肝病毒的活性和护肝
作用n]。近年来国内外对叶下珠的研究较深入，并报
道有抗艾滋病毒逆转录酶活性[2]。叶下珠全草还有
利尿、降血糖、降压作用，能显著降低患者收缩压，其
有效成分鞣花酸、短叶苏木酚酸甲酯、乙酯，均具有
醛糖还原酶抑制活性[3]。由于人们对该类药物需求
的不断增长，野生资源在不断减少，通过采收野生资
源的方式已经不能满足社会需求的发展[4]，因而通
过组织培养方式进行快速繁殖是解决这一问题的有
效方法。而近年来许多学者对叶下珠的研究多集中
在研究其药理方面[5’6]，在组织培养快繁方面的研究
还很少r7。。本实验主要通过研究激素和蔗糖等对叶
下珠愈伤组织形成的影响，从而更好地满足植物化
学和药理学进一步研究及制药工业日益增长的需要。
1材料和方法
1．1 材料：叶下珠为淮北煤炭师范学院资源生物学
安徽省重点实验室提供的无菌苗，经安徽大学生命
科学学院何家庆教授鉴定为大戟科叶下珠属植物叶
下珠PhyllanthusuHnariaL．。不同外植体比较研究
取叶片和茎段为试验材料；不同质量浓度蔗糖和植
物生长物质的正交试验研究取茎段作为试验材料。
1．2方法
1．2．1试管苗的培养：在超净台上，将无菌试管苗
的茎段和叶片分别接种到L。(34)正交试验表设计的
培养基(表1)，每种处理接种20瓶，每瓶接3个外植
体，重复3次，定期观察记录，30d后统计愈伤组织
的诱导率。
表1正交试验因素水平裹L．(3‘)
Table1 FactorsandlevelsofL·(3．)orthogonaltest
1．2．2愈伤组织的褐化分析：褐化程序采用目视
法，根据每块愈伤组织的褐化程度大小分为5级，
用+表示，+越多表示褐化程度越大，一表示无褐化。
1．3培养基及培养条件：以MS为基本培养基，用
0．6％的琼脂固化，pH5．8～6．0，附加不同质量浓度
的蔗糖和植物生长物质，分装于100mL的三角烧瓶
中，在121℃湿热灭菌15～20min。材料接种后放在
光照培养箱中培养，温度(25士1)℃，愈伤组织诱导
期间不用光照。
2结果与分析
2．1不同外植体对愈伤组织诱导的影响：由表2可
知，茎段的诱导率高，为55．56％，而叶片诱导率为
0％。8d左右发现愈伤组织从茎段伤口处长出来。
12d左右发现茎段外植体两端不同程度膨大并呈
不对称哑铃形(图1一A)。但是叶片在20d时只是有
稍微卷曲，叶片颜色泛白，仍没有愈伤组织出现。从
材料来源的可取性分析叶下珠愈伤组织诱导是茎段
优于叶片。
表2不同外植体对愈伤组织诱导的影响
Table2 Effectofdifferentexplantsoncallusinduction
A一哑铃形愈伤组织B褐化的茎段C一白色愈伤组织n继代的愈伤组织
A—dumbbell—shapedcalliB-browningstemsC—whiteealliD—subculturecalli
图l诱导与培养形成的不同叶下珠愈伤组织
Fig．1InductionandcultivationofdifferentcallusofP·urinaria
万方数据
中草葛ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第11期2008年11,El·1725·
2．2不同培养条件对茎段愈伤组织诱导的影响
2．2．1正交试验极差分析：从表3可以看出，因子B
的极差最大，因子D的极差最小。即6一BA的诱导能
力最大，而蔗糖质量浓度的影响最小。各因子对叶下
珠愈伤组织诱导作用大小依次为6一BA>2，4一D>
NAA>蔗糖。正交表中均值越大，则说明代表该因
子的某水平越好，从诱导率的角度看，极差分析的结
果可以认为叶下珠愈伤诱导的培养基以A．B：C。D。
为最优组合，即2，4一D0．5mg／L十6-BA1．0mg／L+
NAA0．1mg／L+蔗糖10g／L。试验观察发现，6一
BA质量浓度为0的1、4和7号培养基，茎段刚开始
可以诱导出愈伤组织，渐渐褐化，直至枯死(图1一B)。
其中2号和9号培养基中愈伤生长最好，愈伤白色疏
松(图1一C)，诱导率分别达到100％和95．83％。
表3叶下珠茎段愈伤组织诱导正交试验结果
Table3 Orthogonaltestoncallusinduction
ofstemsfromP．unnann
2．2．2方差分析：为了进一步反映各因子之间的差
异，以便寻求最佳水平，笔者进行了方差分析。结果
表明(表4)，因子B(6一BA)对愈伤组织的诱导率有极
显著差异，因子A对愈伤组织诱导显著，因子C和D
对愈伤组织的诱导作用不显著。由此可见，6一BA和
2，4一D是影响叶下珠愈伤组织诱导率大小的主要因
素，而且此结果与极差分析的结果相吻合。
2．2．3激素浓度最佳水平的选择：综合考虑极差分
析和方差分析的结果，正交设计是一种均一性设计，
不可能含有所有处理组合，所以A，B。C：D，在实验中
没有显示出来。用此种配比的培养基进行了验证实
验和多次继代培养，愈伤质地疏松、白色、愈伤组织
诱导快、生长量大、诱导率高，从而证明试验结果是
袭4叶下珠茎段愈伤组织诱导的方差分析
Table4 Varianceofanalysisoncallusinduction
ofstemsfromP．unnana
Po．05【2·Z)一19．00，Po．Ol(2，2)=99．00
正确的。
3讨论
3．1外植体类型对叶下珠组织培养的影响：根据细
胞全能性理论，植物任何器官都可以用作外植体，但
不同组织器官培养成功的难易程度是不同的，同一
种植物不同的组织和器官再生能力也有很大差异，
接种材料的组织部位、植株年龄、取材季节以及植株
的生理状态等都会直接影响培养效果[8]。在叶下珠
组织培养的快速繁殖和愈伤组织诱导过程中，正确
的选择外植体的部位极其重要。
本研究采用叶下珠叶片、茎段作为培养材料，茎
段诱导愈伤组织效果最好，叶片诱导不出愈伤组织。
这与其他植物[9]叶片诱导效果高于茎段不同，可能
是所选的激素及其激素的浓度配比对叶片诱导愈伤
组织不适宜；也可能就是叶下珠与其他植物的不同
之处。
3．2植物生长物质对叶下珠组织培养的影响：叶下
珠茎段接种8d左右后，发现愈伤组织从茎段伤口
处长出来。12d左右发现茎段外植体两端不同程度
膨大并呈不对称哑铃形。生长调节物质和蔗糖对叶
下珠茎段愈伤组织的诱导有非常重要的影响，添加
不同的激素和蔗糖对愈伤组织的形成是不同的。在
叶下珠茎段离体培养研究中，研究了NAA、6-BA、
2，4一D3种植物生长物质和蔗糖共4个因素3个水
平组合的9次实验，每种组合均能诱导出愈伤组
织。本实验筛选出叶下珠茎段愈伤组织诱导和继代
的最佳组合为MS+2，4一D0．5mg／L+6一BA1．0
mg／L+NAA0．1mg／L+蔗糖10g／L。
试验发现，6-BA在叶下珠茎段愈伤组织形成中
的作用最大，同时发现如果培养基中没有6-BA，愈
伤组织褐化严重，直至愈伤枯死。2，4一D、NAA作用
次之，蔗糖的作用最小。本试验条件下产生的愈伤组
织在以后的继代繁殖过程中发现有红色、淡黄色、淡
绿色的愈伤组织(图l—D)出现，不同颜色可能跟药
万方数据
·1726· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第11期2008年11月
用成分有关。由于我国是乙肝病毒高发地区，对叶下
珠的需求与日俱增，加之对叶下珠的组织培养技术
研究还甚少，利用叶下珠愈伤组织培养技术来提取
愈伤组织药用有效成分有待于进一步研究，能否进
一步通过器官分化途径再生出完整的植物，正在试
验中，以期减少对自然资源的采挖压力。
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空心莲子草的高效毛细管电泳指纹图谱研究
师磊，朱红，王佳馨，马 卓，刘焱文‘
(湖北中医学院中药资源与中药复方省部共建教育部重点实验室，湖北武汉430061)
摘要：目的利用高效毛细管电泳技术建立空心莲子草药材的指纹图谱。方法采用60am×75pm毛细管柱，以
50mmol／L硼砂溶液一50mmol／L磷酸盐溶液为缓冲液．运行电压为20kV，检测波长220nm。柱温25℃。结果建
立的指纹图谱中共有18个共有峰，且方法学考察符合规定的标准。结论该法准确简便，可作为控制空心莲子草药
材内在质量的有效手段。
关键词：空心莲子草；高效毛细管电泳；指纹图谱
中图分类号：R282．7 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)11—1726-04
HPCEFingerprintofAlternantheraphiloxerodes
SHILei，ZHUHong，WANGJia—xin，MAZhuo，LIUYall—wen
(Provincea dMinistryCo—EstablishedKeyLaboratoryofResourceSeienceandComplexPrescriptioninTraditionalChinese
Medieine．MinistryofEducation，HubeiCollegeofTraditionalChineseMedicine，Wuhan430061，China)
Abstract：ObjectiveToin estigatethehighperformancecapillaryelectrophoresis(HPCE)
fingerprintofAl ernantheraphiloxerodes．MethodsSeparationwasperformedona 60emX75pm
uncoatedcapillarywith50mmol／Lboratesolution一50mmol／Lphosphatesolution(pH8．76)asPCE
buffer．Therunningvoltagewas20kV，thed tectionwavelengthwas220amandtemperature25℃．
ResultsFingerprintwasestablishedwith18commonpeaks．ConclusionThemethodiSaccurate。
simple。andsuitabletothequalitycontrolofA．philoxerodes．
Keywords：Alternantheraphiloxerodes(Mart．)Griseb．；HPCE；fingerprint
空心莲子草Alternantheraphiloxerodes
(Mart．)Griseb．为苋科莲子草属(Alternanthera
Forst．)多年生宿根草本植物，又名空心苋、螃蜞菊、
水花生等[1]。曾收载于《中国药典》1997年一部，具
有清热解毒、凉血利尿的功效。现代药理研究表明，
空心莲子草具有抗流感病毒[z]、流行性出血热病
毒[3]、抗乙型肝炎病毒[4]等多种抗病毒药理作用。空
心莲子草药材在我国资源丰富，分布广泛，各地品质
差异较大。然而，到目前为止，对于空心莲子草药材
的品质研究尚未见报道，本实验室运用高效毛细管
电泳技术对采自湖南、湖北、江苏、浙江、江西、福建
等6个省份10个不同地市的空心莲子草进行指纹图
收稿日期：2008—03—06
蕹喜蓄异：霈家i磊自然(1科98学1--基)i981餐器需晏箔艾j翌舅翥北中医学院在读硕士研究生，主要从事中药及其制剂有效成分的研究。作者简介：师 ，男．河南安阳人，现为湖北中医学院在读硕士研究生，主要从事中 刑 敢 研究。
Tel：(027)88920834E．mail：shilei2967627@163．corn
-通讯作者刘嶷文．教授，博士生导师。Tel：(027)62623577E—mail：ywliu@puplic．wh．hb．crl
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万方数据
叶下珠愈伤组织的诱导与培养
作者： 常莉， 薛建平， CHANG Li， XUE Jian-ping
作者单位： 淮北煤炭师范学院生命科学学院,安徽,淮北,235000;资源植物生物学安徽省重点实验室,安
徽,淮北,235000
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(11)
被引用次数： 1次

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