全 文 ：中革鸯ChineseTraditionalndHerbalDrugs第37卷第3期2006年3月·447·
HPLC测定不同川芎药材中藁本内酯
汪程远“2，张
(1，四川大学华西药学院，四川成都 610041
川芎为伞形科藁本属植物Ligusticumchuanw-
iongHort．的干燥根茎，具有行气活血、祛风止痛之
功效，为活血化瘀常用中药。川芎在中医中应用较
广，在中成药制剂中也有广泛使用。川芎所含的成分
较为复杂。有极性差异很大的各类成分，其挥发油是
川芎的主要有效部位，而其中藁本内酯的量最高，是
公认的主要有效成分，且有较强的药理作用“]。对各
种川芎药材中藁本内酯的系统测定比较尚未见报
道，而以往报道[。’”中对藁本内酯的HPLC测定均
采用内标法．也未见用外标法测定的报道。因而本实
验建立了HPLC的外标法，测定了川芎道地产
区——四川灌县各地产的不同采收时间的多批川芎
药材以及不同川芎品种(山川芎、奶芎、日本川芎)中
藁本内酯的量，揭示了川芎药材中藁本内酯的变化
规律，为川芎的合理利用提供了依据。
1仪器与试药
岛津LC—10Avp高效液相色谱仪(带有I，c一
10AT双泵、CTO--10A柱温箱、sPD一10AV检测
器、SCL一10A系统控制器、Class—vp色谱工作站
等)(日本岛津公司)；KQ3200超声波清洗器(昆山
市超声仪器有限公司)。藁本内酯对照品(自制，GC
检测质量分数>99％)；甲醇、异丙醇为HPLC级；
二次重蒸水；各种川芎药材(成都中医药大学贾敏如
教授鉴定)；其他试剂均为分析纯。
2方法与结果
2．1色谱条件：色谱柱：岛津ODS一18(150mm×
4．6mm，5pm)柱：流动相：甲醇一5％异丙醇水溶液
(55，45)；检测波长为280nm；体积流量为1．0
mL／min；柱温为25℃。在此条件下，样品中的藁本
内酯与其他峰均能达到基线分离，其理论塔板数为
9500．藁本内酯与相邻后峰的分离度为2．8，对称
因子为0．98。藁本内酯的保留时间为22．1min，对
照品和样品的色谱图见图1。
2．2标准曲线的制备：精密称取藁本内酯对照品
5．5mg，加甲醇溶解定容至i0ml，。按上述色谱条
鉴鍪县留：眢曩嚣蓉瓷重点科技攻关计划项目(。。929。2。8)
*通讯作者张浩Tel：(028)85503037
浩”，钱忠明2
2．香港理工大学应用生物及化学技术系，香港)
a一藁率内醋
a—ligustilide
围1对照品(A)和川芎样品(B)色谌图
Fig．1HPLCChromatogramsfreferencesubstance(A)
andL．chuanxiongsample(B)
件，分别进样1、2、4、6、8、10pL，测定，记录各自峰
面积，以对照品质量为横坐标，以峰面积为纵坐标，
藁本内酯线性回归方程为：Y一3×106X一1．07×
105，(r一0．9997)。结果表明：藁本内酯的进样量在
0．55～5．5pg时与峰面积呈良好线性关系，可用外
标两点法计算质量分数。
2．3样品溶液制备：分别取各种川芎药材，粉碎过
40目筛，精密称取1g粉末，分别加入20mL甲醇，
超声提取20min，滤过，药渣再分别加甲醇(10、10
mL)按上述方法超声提取两次，滤液滤过后合并，甲
醇定容至50mL，备用。
2．4精密度试验：取同一样品溶液，按上述色谱条
件，重复进样5次，每次5“I。，测定藁本内酯峰面
积，RSD为1．0％，表明精密度良好。
2．5稳定性试验：取同一样品溶液，分别于0、2、4、
6、8h，按上述色谱条件，分别进样5皿，测定藁本内
酯峰面积，其RSD为1．7％，表明样品溶液在至少8
h内稳定。
2．6重现性试验：分别称取1g同一川芎药材粉末
5份，按样品溶液制备方法制备5份供试液，按上述
色谱条件，分别各进样5止，测定藁本内酯峰面积，
并计算其量的RSD为1．4％，表明该分析方法的重
现性良好。
2．7回收率试验：分别称取0．5g同--9I芎药材粉
末6份，分别定量加入藁本内酯对照品溶液(4．2
万方数据
·448· 中革喃ChineseTraditionalandHerbDrugs第37卷第3期2006年3月
mg／mL)各0．5、0．5、1、1、2、2mL，按样品溶液制备
方法制备加样回收供试品溶液，并按上述色谱条件
进行测定，计算回收率，结果藁本内酯的平均回收率
为99．2％，其RSD为1．1％。
2．8样品测定：分别取各制备好的样品溶液，按上
述色谱条件，进样5pL，测定，记录藁本内酯峰面
积，重复测定3次，取平均值，计算各自藁本内酯的
量，结果见表1。
裹1各种川芎中藁本内醋的量(Ⅳ一3)
Table1 Determinationofligustilidenvarious
L．chuanxiong(月=3)
3讨论
3．1 实验在建立HPLC方法时，对检测波长的确
定、流动相的选择、柱温和不同色谱柱等进行了系统
考察，最终选择了本实验的色谱条件，并通过对其柱
效、分离度、对称因子及方法学的考察，证实所选的
色谱系统适用性好，结果可靠。本方法简便、准确、重
现性好，完全适用于藁本内酯的测定，并为川芎以及
含藁本内酯药材的测定提供了典范。
3．2在HPI。C流动相的选择中，比较了甲醇一水与
己腈一水的不同比例，发现藁本内酯由于极性太小易
在柱上滞留不易洗脱，在流动相中加入氯仿01或异
丙醇01可提高洗脱力，并阻止其在柱上滞留，适当保
护柱子，因而试验了甲醇(1％CHCl3)水(cHCl。饱
和)、乙腈(1％CHCI。)一水(cHcl。饱和)、乙腈一10％
异丙醇、乙腈一5％异丙醇系统的不同比例，发现这些
系统中藁本内酯相邻峰难达基线分离；又比较甲醇一
10％异丙醇与甲醇一5％异丙醇系统，发现藁本内酯
与相邻峰能达基线分离，但甲醇一5％异丙醇系统的
分离度与柱效比甲醇一10％异丙醇好，因而选用甲
醇一5％异丙醇系统，最终确定甲醇一5％异丙醇(55：
45)为流动相。
3．3大量实验研究报道[4”3藁本内酯纯品的稳定
性较差，特别是在室温下放置极易异构化。但本实验
通过反复摸索后，发现藁本内酯在甲醇中稳定性良
好，从而使用外标法来测定藁本内酯成为可能，因而
选用甲醇为提取溶剂。
3．4藁本内酯作为川芎中量最高的主要有效成分，
直接反应川芎药材的质量。传统观点认为川芎药材
中本身含有一定比例的各种内酯成分，使其中量最
高的藁本内酯的异构化反应趋于平衡，从而使药材
中藁本内酯量基本稳定。但本实验的测定结果发现
各种川芎药材随着采收后放置时间的延长，藁本内
酯的量有逐渐降低的趋势，这可能是由于在放置过
程中藁本内酯缓慢异构化为其他内酯成分所造成的
(此将另文报道)，这为川芎的合理利用和开发提供
了有力的理论依据，因而建议川芎在采收后不易放
置太久时间后再使用。
3．5实验发现山川芎和川芎中藁本内酯量相似，奶
芎中量则低一些，说明山川芎在某种程度上可代替
川芎使用，而奶芎则不可，这与山JI『芎与奶芎的民间
使用是相符合。而日本川芎中藁本内酯量明显低很
多，其量的显著差别说明了其药理药效必定有差别，
这从成分方面揭示了JII芎与日本川芎种属的不同，
为日本川芎与川芎在临床上的区别应用提供了有力
证据。
致谢：川芎药材大部分由成都中医药大学的贾
敏如教授提供。
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天津地区黄花蒿中青蒿素测定
齐向娟，李士雨，何玉娟
(天津大学化工学院，天津300072)
黄花蒿又名青蒿，为菊科植物Awtemisiaannua
I，．的干燥全草，20世纪70年代我国学者从中分离
得到的青蒿素(artemisinin)是我国唯一得到国际承
认的抗疟新药o]。
目前，商用的青蒿素主要来自植物提取物。除黄
花蒿外，尚未发现含有青蒿素的其他天然植物资源。
黄花蒿虽然系世界广布种，但青蒿素量随产地不同
差异极大。据迄今的研究结果，除我国重庆东部、福
建、广西、海南部分地区外，世界绝大多数地区生产
的黄花蒿中的青蒿素的量都很低(不足0．1％)，无
生产价值，使得青蒿素的天然资源相对匮乏口]。天津
地区黄花蒿资源丰富，但至今仍未得到开发利用。本
实验对天津地区黄花蒿植物资源的青蒿素的量进行
了定量测定，力求真实客观地反映药材的质量，同时
为该地区黄花蒿的开发利用提供依据。
1材料
1．1仪器及试剂：仪器包括xF20C型粉碎机(振
兴机电仪器厂)；DEG一403型电热真空干燥箱(天
津市天宇实验仪器有限公司)；AL204型分析天平
(上海梅特勒仪器有限公司)；RE52AA型旋转蒸发
器(上海亚荣生化仪器厂)；90—3型定时恒温双向
磁力搅拌器(上海亚荣生化仪器厂)；2XZ—l型真
空泵(浙江黄岩求精真空泵厂)；UV9100型紫外分
光光度计(北京瑞丽分析仪器有限公司)。主要试剂
有石油醚(30～60℃)、乙醇、氢氧化钠，均为分析
纯；青蒿素对照品(质量分数99％，昆明同持医药研
究有限公司提供)。
1．2试药：实验所用黄花蒿植株8月份采自天津市
武清区，野生，经北京中医药研究院附属医院孟广义
主任药师鉴定为菊科植物黄花蒿A．annuaL．的地
上千燥全草。将干黄花蒿样品用粉碎机粉碎后，过
筛，制成黄花蒿粉末，置于干燥器(40～60C)备用。
2方法与结果
2．1对照品溶液的制备：精确称取80℃干燥至恒
重的青蒿素对照品10mg置100mL量瓶中，用
95％乙醇稀释至刻度。分别吸取0，2、4、6、8、10mL
于50mL量瓶中，以95％乙醇补充至10mI，，补加
0．2％NaOH溶液至刻度，置50℃水浴中反应30
min，流水冷却至室温。
取10mL95％乙醇置于50mL量瓶中，补加
0．2％NaOH溶液至刻度配置空白溶液。
2．2供试品溶液的制备：将干黄花蒿样品粉碎后，
过筛，制成青蒿粉末。称取经干燥的黄花蒿样品粉末
1．0804g，置于250mL索氏提取器中，加入60mL
石油醚(30～60℃)浸渍4h，50℃恒温水浴提取至
无色(48h)。提取液抽滤，滤液置于分液漏斗中，加
入2％NaOH溶液洗去碱溶性部分，弃去下层碱液
后，以蒸馏水洗涤至中性。经水洗后的提取液置于茄
形烧瓶中50c旋转蒸发，得到含青蒿素的浸膏，再
以95％乙醇溶解浸膏，并定容于100mL量瓶中备
测。量取样液5mL于50ml。量瓶中，补充95％乙
醇至10mL后，加入0．2％NaOH溶液至刻度。50
℃水浴中反应30min后取出，流水冷却至室温作为
供试品溶液。
2．3测定波长的选择：青蒿素紫外无吸收峰，其乙
醇溶液与0．z％NaOH溶液反应后产生具有紫外吸
收的化合物(q，口不饱和酮酸盐)。取2．1制备的1
mg／mL对照品溶液，测定其紫外光谱图(260～340
鉴鐾最留：契莓诺警镰科学基盒项目。。。。。。。。，。，
作者筒介：齐向娟(1978--)，女，山东省东营市人，天津大学化工学院讲师
万方数据
HPLC测定不同川芎药材中藁本内酯
作者： 汪程远， 张浩， 钱忠明
作者单位： 汪程远(四川大学华西药学院,四川,成都,610041;香港理工大学,应用生物及化学技术系,香
港)， 张浩(四川大学华西药学院,四川,成都,610041)， 钱忠明(香港理工大学,应用生物及
化学技术系,香港)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(3)
被引用次数： 5次

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3.王雪艳.郑晓晖.赵新锋.王锐.王世祥 川芎水提物中内酯类成分固相萃取工艺的优化[期刊论文]-中成药 2010(4)
4.汪程远.张燕.谭月晗 含川芎、当归中成药中藁本内酯的检测分析[期刊论文]-中国医药导报 2012(26)
5.乔雪.徐曼.韩健.果德安 中药复方冠心Ⅱ号的化学成分及药理研究进展[期刊论文]-世界科学技术-中医药现代化
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