全 文 ：中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第4期2005年4月·603·
小叶丁香组织培养生成橄榄苦苷(I)
吴呜建h2，董建军2，张海艳1’2，郭唯2，赵天增h2
(1．郑州大学化工学院，河南郑州450002；2．河南省生物技术开发中心，河南郑州450002)
橄榄苦苷(oleuropein)具有多种药理作用，如抗
菌抗炎、抗病毒、抗真菌、抗癌、抗氧化、降血压与抗
心律不齐、降血糖等[1~6]，是小叶丁香S．microphyz—
laDiels的主要活性成分[7]。研究表明，小叶丁香是
一种很有潜力的药用植物，主要分布于河南、河北、
陕西、山西、甘肃等地，生长在海拔800～2400m山
地、沟内或崖石上，但由于采用这种野生植物的花作
为主要药用部位，受地域与季节所限，自然资源较
少，因此，对小叶丁香进行组织培养方面的研究，开
辟新的资源途径具有重要意义。本实验选择了以小
叶丁香为外植体进行组织培养生成橄榄苦苷的研
究，为进一步解决资源问题探索有效途径。
1实验部分
1．1 外植体的来源与选择：外植体采自河南省嵩县
车村镇南山坡，经河南农业大学朱长山教授鉴定为
木犀科丁香属SyringaL．植物小叶丁香S．mitto-
phyllaDiels。
选取生长良好、健康的小叶丁香的植物叶片、嫩
茎、芽或根尖，先用自来水冲洗，再用0．1％HgCl。
溶液处理清洗后，用无菌滤纸吸干水分，将叶片切成
正方形(5mm×5ram)、茎或根切成段(6～8ram)，
置于无菌容器中备用。
1．2愈伤组织的诱导：将消毒灭菌处理后的外植体放
入分别附加植物生长调节剂并经过灭菌的培养基表
面，置于培养箱中进行愈伤组织诱导。诱导条件为暗诱
导(无光照)和光诱导(10h／d)，诱导温度为25℃。
1．3 愈伤组织的继代培养：愈伤组织生长到一定时
间后进行转接继代。选择生长良好、健壮的愈伤组
织，并将大的愈伤组织切成小块(直径为3～5
ram)，放入相应的新培养基上继续培养。继代培养
所选用的培养基为LS培养基或MS培养基，所用
的植物生长调节剂列于表1，培养条件与愈伤组织
诱导条件相同。
1．4生长周期与生长曲线的测定：将培养试样定期
取出测定愈伤组织鲜重和干重。愈伤组织细胞生长
表1植物生长调节剂的种类与比例(mg／L)
Table1 Varietiesandproportionsofplantgrowthregulaters
．。一 生长调节剂／(mg·L1)编{争——
KT 2，4一D NAA IAA 6一BA
1．0～3．0
1．O～2．0
1．O～2．0
量和生长倍数分别按下式计算：
愈伤组织生长量一收获鲜重一接种鲜重
愈伤组织增长率一收获干重一接种干重／接种干重
愈伤组织生长倍数一收获鲜重／接种鲜重
1．5愈伤组织中橄榄苦苷的提取和含量测定：将收
获的愈伤组织在40℃烘干至恒重后研碎，加入无水
乙醇或甲醇回流3次，每次3h，收集滤液，减压浓缩
至干，样品采用文献所确定的RP—HPLC法测定愈
伤组织中橄榄苦苷的含量[8]。色谱柱为Shim—pack
CLC一0DSC18柱(200mmx4．6mm，5弘m)，流动相
为甲醇一水(50：50)，柱温25℃，体积流量：1．0
mL／min，检测波长为285nm，进样量10pL。
2结果与讨论
2．r愈伤组织的不同细胞系的生长状况比较：外植
体的不同部位诱导所产生的愈伤组织，在不同条件
下进行培养形成的不同细胞系有所不同。实验结果
表明，在加有1mg／LKT和1mg／LNAA的LS培
养基上，嫩叶在诱导5～7d后切口边缘开始膨大，
7～9d有浅绿色愈伤组织出现，愈伤组织呈块状，
较松散，触之易碎。而用幼茎诱导产生的愈伤组织则
相对坚硬并有较深的绿色，含水量较低。图1为愈伤
组织培养照片，不同条件下培养所得愈伤组织的生
长状况比较列于表2。从观察结果可知，选择小叶丁
香的嫩叶为外植体，采用LS培养基，诱导产生的愈
伤组织生长较好。其次为幼茎。
收稿日期；2004—08—02
作者简介：吴鸣建，女，博士，教授，主要从事有机化学、天然产物与制药工程方向的教学与研究。
Tel：(0371)5725915E—mail：wumj@ZZU．edu．cn
O3～O
O
O
O1；
万方数据
·604· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第4期2005年4月
图1愈伤组织培养照片
Fig．1Picturesofcallusculture
表2愈伤组织的形态特征和生长状况比较
Table2 Comparisonamo gformandgrowthofdifferentcalli
2．2外植体诱导形成愈伤组织及对诱导率的影响
因素：外植体采集的不同时间、所选择的不同部位、
不同种类的培养基与植物生长调节剂以及不同的诱
导条件(温度、光照时间)对愈伤组织诱导率的影响
结果分别列于表3～8。
从实验结果来看，在5、6月份采集的外植体诱
导率较高，可达到约90％；选用嫩叶、幼茎和芽的诱
导率为嫩叶>芽>幼茎，其中嫩叶诱导率>90％；在
实验所选的4种培养基中，采用LS培养基并添加
表3外植体采集的不同时间对愈伤组织诱导率的影响，
Table3 Influencei differentcollectingtimeofexplants
oninductionrateofcallus
表4外植体的不同种类对愈伤组织诱导率的影响
Table4 Influencei differentki dsofexplants
oninductionrateofcallus
表5不同培养基对愈伤组织诱导率的影响
Table5 Influencei differentm diaoninduction
rateofcallus
表6不同植物生长调节物质对愈伤组织诱导率的影响
Table6 Influencei differentplantgrowthregulaters
oninductionratefcallus
植物生长调节剂 接种外植体数形成愈伤组织数诱导率／％
表7不同培养温度对愈伤组织诱导率的影响
Table7 Influenceindifferentcul uraltemperature
oninductionratefcallus
植物生长调节剂KT和NAA，有利于愈伤组织的形
成，其诱导率高于另外几种组合；培养条件亦对愈伤
组织的诱导具有较大影响，实验结果表明，在25℃、
光照10h／d时，诱导率较高，达到93％以上。
2．3细胞生长曲线：愈伤组织培养的细胞生长曲线
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第4期2005年4月·605·
表8光照时间对愈伤组织诱导率的影响
Table8 Influencei illuminationtime
oninductionratefcallus
如图2所示，所用的基
。8
本培养基为Ls培养基，赢6
添加植物生长调节剂 当4
(PGR)为KT1．0mg／熏2
日
表9不同外植体所得愈伤组织的不同细胞系中
橄榄苦苷的含量
Table9 Oleuropeinindifferentc lllines
ofcallusfromdifferentexplants
经过溶剂回流提取、柱色谱和高压制备液相，从
培养的愈伤组织中分离纯化得到目标产物橄榄苦
苷，并且利用1H—NMR和”C—NMR证实其结构。
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p、驴电争趔K够坩痧q乳西坳移《》趔h面坳《》、移、护谚《砌《争趔h移、驴、驴、矿、扩、驴谚也》、移、护、扩、扩、驴、驴、驴、驴、驴、夕卅凇匈
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万方数据
小叶丁香组织培养生成橄榄苦苷(Ⅰ)
作者： 吴鸣建， 董建军， 张海艳， 郭唯， 赵天增
作者单位： 吴鸣建,张海艳,赵天增(郑州大学化工学院,河南,郑州,450002;河南省生物技术开发中心,河
南,郑州,450002)， 董建军,郭唯(河南省生物技术开发中心,河南,郑州,450002)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(4)
被引用次数： 2次

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国药 2010(9)
2.文涛.梁莉.曾杨.喻晓 不同光照强度对虎杖愈伤组织的影响[期刊论文]-中国中药杂志 2007(13)


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