全 文 ：中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月·1203·
茶多酚对大鼠肠缺血再灌注肝损伤的保护作用
吕 莉1，王 利2，韩国柱r，任洪灿1，金越1，吕勇1，李 楠3
(1．大连医科大学药理教研室，辽宁大连 116027；2．大连市友谊医院普外科，辽宁大连116001；
3．大连理工大学分析教研室，辽宁大连 116023)
摘要：目的研究茶多酚(TP)对大鼠肠缺血再灌注(I／R)肝损伤的保护作用及其可能的作用机制，为其临床
新用途提供实验依据。方法大鼠随机分为模型组、假手术组及TP(100．0、50．0、25．0、12．5mg／kg)组，通过夹闭
肠系膜上动脉60min、再灌注120min，建立肠I／R损伤模型。于缺血前20min舌下iv药物，假手术组仅分离不夹
闭肠系膜上动脉。再灌120min后，各组取血及肝组织，测定血清及肝组织中SOD活力、MDA和NO水平，光镜下
观察肝组织形态学改变。结果与假手术组相比，肠I／R损伤后，血清及肝组织中的soD活力降低，MDA、N0水
平升高，镜检发现肝有明显组织形态学损伤。与模型组相比，TP呈剂量依赖性增强SOD活力，降低MDA及NO
水平，减轻肝组织形态学损伤。结论TP对肠I／R所致肝损伤有显著的剂量依赖性的保护作用，可能与其自由基
清除作用、减轻中性粒细胞聚集及活化、抑制大量N0释放有关。
关键词：茶多酚；肠缺血再灌注；丙二醛；超氧化物歧化酶；一氧化氮
中图分类号：R285．5 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2006)08—1203一04
Protectiveeffectsofteapolyphenolso liverinjuryinduced
byintestinalischemiareperfusioninrats
LULil，WANGLi2，HANGUO—zhul，RENHong—canl，JINYuel，LUYon91，LINan3
(1．DepartmentofPharmacology，DalianMedicalUniversity，Dalian116027，China；2．DepartmentofSurgery，
DalianFriendshipHospital，Dalian116001，China；3．DepartmentofAnalyticalChemistry，
DalianUniversityofTechnology，Dalian116023，China)
Abstract：ObjectiveToinvestigatetheprotectiveeffectsofteapolyphenols(TP)onintestinal
ischemiareperfusion(I／R)inducedinjuryofliverinratsandpossibleactionmechanism，SOastoprovide
preclinicalpharmacologicalbasisforitsnewclinicaluses．MethodsRatswererandomlydividedintosix
groups：Shamgroup，modelgroup，andTP(100．0，50．0，25．0，and12 5mg／kg)groups．Intestinal／R
modelwasestablishedbyclampingsuperiormesentericarteryfor60minandreperfusingfor120min．TP
wasadministeredbysublingualveint20minbeforeischemia．InShamgroup，superiorm sentericartery
wasonlyisolatedwithoutclamping，Bloodsamplesandlivertissuesamplesw recollectedafterreperfusion
lasting120min．SODactivity，MDAandNOlevelsin erumandlivertissuew redetermined．Histomor—
phologychangesoflivertissuew reobservedwithlightmicroscope．ResultsComparedwithSham
group，afterin stinalI／Rinjury，activityofSODwasdecreased，whilethelevelsofMDAandNOwasin—
creasedinserumandlivertissue．Atthesametime，histomorphologyfliverwasdestroyedbviously．，as
seenbylightmicroscope．Incomparisonwithmodelgroup。TPcoulddose—dependentlyincreaseSODac—
tivity．decreaseMDAndNO1evelsin erumandlivertissue．Also，TPcoulddose—dependentlyattenuate
livertissueinjury，asevidencedbymicroscopicexaminationofhistomorphology．ConclusionTPcan
dose—dependentlyprotectliversignificantlyandattenuateintestinalI／Rinjury．Theseprotectiveeffectsare
relatedotheiranti—-free——radicalactionswithdiminishingt eag regationndactivationofp lymorphonu—·
clearneutrophils(PMN)andinhibitingthereleaseofNO．
Keywords：teapolyphenols(TP)；intestinalischemiar perfusion(I／R)；malondialdehyde(MDA)；
superoxided smutase(SOD)；NO
肠缺血再灌注损伤(ischemiareperfusion，I／R)是外科常见的组织器官损伤，在严重感染、损伤、
收稿日期：2005—12-28
作者简介：吕 莉(1972一)，女，天津人，讲师，硕士，主要从事药效学研究。
*通讯作者韩国柱Tel：(0411)84720229E—mail：hgzhx2236@sina．corn
万方数据
·1204· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月
休克、心肺功能不全等疾病的病理演变过程中起重
要作用，其损伤产生的机制尚不清楚，目前认为主要
与氧自由基以及No大量生成导致组织器官脂质
过氧化等因素有关[1]。肠I／R不仅可以引起消化道
局部的组织损害，而且可以导致肠内细菌和毒素移
位到体循环，引起网状内皮系统发生系列反应，进而
导致大量相关介质和细胞因子的释放，造成远隔器
官损伤，甚至引发多系统器官功能不全综合征瞳]。
茶多酚(teapolyphenols，TP)是从茶叶中分
离提取的多酚类化合物，具有强抗氧化作用和显著
的自由基清除能力。有研究表明，TPiv给药对I／R
脑损伤和心肌损伤有保护作用[3~6]，但对肠I／R损
伤的保护作用迄今未见报道。本实验以大鼠肠I／R
所致肝损伤的模型，探讨TPiv给药对大鼠肠I／R
肝损伤的保护作用及其可能的作用机制。
l材料与方法
1．1 药品与试剂：茶多酚(TP)购自江西茶场茶多
酚分厂，质量分数>98％，批号020613，实验时以生
理盐水(NS)为溶剂配制成所需浓度。考马斯亮蓝
法定量蛋白、No、丙二醛(MDA)及超氧化物歧化
酶(SOD)测定试剂盒均购自南京建成生物工程研
究所。
1．2动物：SD大鼠，雄性，180～220g，由大连医科
大学实验动物中心提供，一级，辽实动质字[20003
028号。
1．3仪器：UV一754紫外可见分光光度计，上海精
密科学仪器有限公司；TGL一16G台式高速冷冻离
心机，上海安廷科学仪器厂；显微镜，日本Olympus
公司产品。
1．4 模型制备[7’8]：采用肠系膜上动脉(superior
mesentericartery，SMA)夹闭一松夹方式复制肠I／
R模型。受试大鼠术前禁食12h后ip乌拉坦1g／
kg麻醉，取右侧卧位固定于手术板上，沿左肋缘弧
形切口，取腹膜后入腹，暴露并在根部游离SMA，
；以显微手术用无损伤动脉夹夹闭SMA，关腹；60
min后沿原切口入腹，松开动脉夹再灌，关腹；再灌
120min后，于腹主动脉取血及快速放血处死动物。
手术期间，间断地ip约30mL／kg温生理盐水(fi-
庆大霉素32万U／L)，以预防腹腔感染以及松夹后
出现一过性低血容量反应。
1．5动物分组及给药：SD大鼠60只，随机分为6
组(每组10只)：假手术组、肠I／R组(模型组)、肠
I／R并同时分别给予TP100．0、50．0、25．0、12．5
mg／kg剂量组。大鼠舌下iv受试药物，模型组和假
手术组大鼠iv等容量生理盐水。20min后，模型组
及不同剂量TP组大鼠夹闭SMA，假手术组大鼠只
分离SMA，但不夹闭。
1。6样本采集及处理：大鼠肠I／R后，于腹主动脉
取血5mL，3000r／rain离心10min，取上清液即
得血清样本，于～50。C冰箱保存备用。迅速取肝，
经冰冷的NS轻柔冲洗后，用滤纸吸干，取部分置于
10％甲醛(福尔马林)中固定，另一部分以1g组织
加10mLNS的比例在冰水浴中用电动匀浆机制成
均一混悬液，于低温离心机中3000r／rain离心lo
min，取上清液即得10％组织匀浆标本，以NS稀
释后即得1％组织匀浆标本，于一50℃冰箱保存
备用。
1．7 测定指标和方法：血清及肝组织中SoD活
力、MDA和NO水平，分别采用黄嘌呤氧化酶法、
硫代巴比妥酸法和化学法进行测定。以上指标的操
作按试剂盒说明进行。并将结果按下式计算各给药
组与模型组比较的SOD活力增加率、MDA抑制率
和NO抑制率。soD活力增加率一堡Q旦堑李蕞羚紊筹：掣×
100％MDA抑制率一器麓恶誊嵩粥×
100％No抑制率一器篆案引糕×loo％
1．8肝组织形态学观察：肝组织经福尔马林固定
后，酒精梯度脱水、石蜡包埋、切片，HE染色，光镜
下观察组织形态学改变。
1．9统计学分析：数据应用SPSS10．0统计软件
包进行统计学处理分析，显著性检验方法采用方差
分析，小g检验，结果均以．27±s表示。
2 结果
2．1 TP对肠I／R损伤大鼠血清SOD活力、MDA
及NO水平的影响：由表1可知，与假手术组相比，
模型组血清中SOD活力显著降低，提示大鼠肠I／R
损伤时，血液中清除氧自由基的能力下降；血清中
MDA水平显著增加，提示大鼠肠I／R损伤时，血液
中细胞发生了氧自由基所致的损伤；血清中No水
平显著增加，表明大鼠肠I／R损伤时生成了大量的
NO，外周血液中NO浓度明显增加，过多的NO具
有细胞毒性，可造成组织损伤。与模型组相比，ivTP
可显著提高血清中SOD活力、降低血清中MDA
和NO水平。TP呈剂量依赖性提高血清中SOD活
力，降低血清中MDA和N0水平，表明TP能有效
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月·1205·
提高血中清除氧自由基的能力，减少血中脂质过氧
化物产生，减轻细胞损伤，并能有效减轻过多的NO
造成的细胞毒性和组织损伤。
2．2 TP对肠I／R损伤大鼠肝组织SOD活力、
MDA及NO水平的影响：由表2可知，模型组与假
手术组相比，肝组织中SOD活力显著降低，MDA
和No水平显著增加，提示大鼠肠I／R损伤时，可
造成肝组织中氧自由基清除能力的下降、脂质过氧
化和NO生成增加。与模型组相比，TP呈剂量依赖
性提高肝组织中SOD活力，表明其能有效提高肝
组织清除氧自由基的能力。同时TP呈剂量依赖性
降低肝组织中MDA和N0水平，表明TP能有效
减少脂质过氧化物及过多的NO产生，减轻肝组织
细胞损伤。
表1 TP对肠I／R损伤大鼠血清SOD活力、MDA及NO水平的影响(z±s，n—10)
Table1 EffectsofTPonSODactivity，MDAandNOlevelsin erumofratsinjuriedbyintestinalI／R(i±s，辟一10)
与假手术组比较：z∑zxp<：0．01；与模型组比较：‘P
Table2 EffectsofTPonSODactivity。MDAandNOlevelsinlivertissueofratsinjuriedbyintestinalI／R(；±s，n一10)
与假手术组比较：△6P
影响：光镜下可见，假手术组肝小叶结构和肝细胞形
态正常；模型组可见肝细胞索排列紊乱，中央静脉及
汇管区小血管瘀血、大量炎性细胞浸润，肝窦扩张、
瘀血，大量炎性细胞浸润，灶性肝细胞变性，肝细胞
肿胀、排列紊乱，不成索状，肝小叶中央静脉瘀血，小
静脉瘀血，说明肠I／R造成远隔器官肝脏严重受
损；TP给药组较模型组呈剂量依赖性减轻肝损害。
3讨论
本研究表明肠I／R可引起肝的严重损伤。镜下
可见肝细胞索排列紊乱，中央静脉及汇管区小血管
瘀血，肝窦瘀血，大量炎性细胞浸润，灶性肝细胞变
性，表明肠I／R引起肠屏障严重受损，致远隔器官
肝组织结构、功能严重损伤。
普遍认为，组织器官脂质过氧化、中性粒细胞激
活以及NO大量释放与肠I／R所致多器官损伤有
关。本研究表明，肠缺血60min，再灌注120min可
致血清及肝组织中MDA水平增高，而SOD活力
降低。提示肠I／R使机体组织器官脂质过氧化、组
织细胞受损，同时机体清除氧自由基的能力不足。
本研究中还发现，肠I／R后镜下可见大量中性
粒细胞在肝浸润聚集。研究证实，在肠I／R过程中，
介导肝损伤的中性粒细胞是在肠道启动和激活的。
在肠I／R过程中，中性粒细胞在内毒素、细胞因子、
氧自由基等刺激下激活[9]，促进中性粒细胞与内皮
细胞表达众多黏附分子，导致中性粒细胞在组织中
聚集。激活的中性粒细胞释放大量的自由基、溶酶体
酶、血栓素和白三烯等炎性介质，进一步损伤血管
壁，导致组织损伤，甚至发生多器官功能障碍综合征
(MODS)。
本研究中，肠I／R后外周血中NO水平增高，
提示肠I／R过程中生成大量NO，具有细胞毒性，造
成组织损伤。肠I／R后外周血中NO大量生成，可
能与内毒素、肿瘤坏死因子、白介素等多种因子活化
万方数据
·1206· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月
iNOS等有关，产生大量No释放入血，从而产生毒
性作用。
TP是从绿茶中提取的多酚类化合物，主要成
分为儿茶素类，具抗氧化、抗突变、抗癌及抗衰老等
多种生理活性。本研究发现ivTP可呈剂量依赖性
减轻肠I／R所致肝组织形态学改变，表明TP对肠
I／R所致肝损伤具有保护作用。其机制可能为：①抑
制自由基生成，防止脂质过氧化。TP是多酚类化合
物，具很强还原性，可使体内多种过氧化物所产生的
自由基转化为惰性化合物而被清除，并防止脂质过
氧化[1⋯，因而TP可降低肠I／R时MDA的水平。
本研究结果证明了TP抗自由基并防止脂质过氧化
的作用：TP呈剂量依赖性降低肠I／R所致血清和
肝组织中MDA水平的升高，即降低脂质过氧化程
度；而同时呈剂量依赖性增强SOD活力，即提高机
体清除和／或抑制氧自由基能力。②抑制中性粒细胞
聚集。TP呈剂量依赖性减少中性粒细胞在肝的浸
润聚集，从而减轻中性粒细胞的损伤作用。③抑制过
量NO的生成。TP呈剂量依赖性降低外周血及肝
中No水平。推测，TP对内毒素、肿瘤坏死因子、白
介素等多种因子活化iNOS有抑制作用；TP通过抑
制NO与氧自由基相互作用，使OoNO一生成减少，
从而对组织损伤有保护作用。
本研究表明，TP通过保护肠道屏障，抑制自由
基生成，防止脂质过氧化，抑制中性粒细胞聚集及抑
制No的过量生成，对肠I／R引起的肝损伤有保护
作用。TP作为一种资源丰富、成本低廉的天然药物
有着十分广阔的前景。本研究为其扩展临床新用途
提供了有价值的实验依据。
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芍药苷对人骨髓基质细胞HFCL蛋白质表达的作用
郭平1，王升启2
(1．山东中医药大学生化教研室，山东济南250014；2．军事医学科学院放射医学研究所，北京100800)
摘 要：目的 检测芍药苷对人骨髓成纤维样基质细胞系HFCL增殖及蛋白质表达的影响，探讨芍药苷补血作用
的分子机制。方法采用流式细胞术和蛋白质组学方法测定芍药苷对HFCL细胞周期及蛋白质表达的影响。结果
芍药苷能促进HFCL由G。／G-期进入S期，提高增殖指数，使HFCL的9种蛋白质表达上调，5种下调。上调的蛋
白质有Ras相关核蛋白、核纤层蛋白A／C、异柠檬酸脱氢酶、磷酸丙糖异构酶、ATP合酶、核蛋白体蛋白质P2和
CCT；下调的蛋白质有人类ee趋化因子和Bax。结论芍药苷能促进HFCL增殖，作用于HFCL多个靶点，促进细
胞结构蛋白质的合成和蛋白质分子伴侣的表达，促进HFCL的能量代谢，抑制HFCL凋亡，间接发挥补血作用。
关键词：芍药苷；骨髓基质细胞；细胞增殖；蛋白质组学
中图分类号：R285．5 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2006)08—1206一05
收稿日期：2005—1I-23
基金项目：国家自然科学基金资助项目(30271617)；全军医药卫生科研基金资助项目(012019)
作者简介：郭平(1960一)，女，四川资中人，副教授，博士，主要从事中药作用分子机制的研究。
Tel：(0531)86253861E—mail：guop86@163．com
*通讯作者王升启Tel：(OLO)66932211E—mail：sqwang@mic．bmi．ac．en
万方数据
茶多酚对大鼠肠缺血再灌注肝损伤的保护作用
作者： 吕莉， 王利， 韩国柱， 任洪灿， 金越， 吕勇， 李楠， L(U) Li， WANG Li， HAN
Guo-zhu， REN Hong-can， JIN Yue， L(U) Yong， LI Nan
作者单位： 吕莉,韩国柱,任洪灿,金越,吕勇,L(U) Li,HAN Guo-zhu,REN Hong-can,JIN Yue,L(U)
Yong(大连医科大学,药理教研室,辽宁,大连,116027)， 王利,WANG Li(大连市友谊医院,普
外科,辽宁,大连,116001)， 李楠,LI Nan(大连理工大学,分析教研室,辽宁,大连,116023)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(8)
被引用次数： 3次
参考文献(10条)
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本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200608037.aspx