全 文 ：·1320· 中革焉ChineseTraditionalndHerbalDrugs第33卷第9期2007年9月
表4紫杉醇一HP一}CD形成包台物前后紫杉
醇化学位移的变化
Table4 111一NMRChemicalshiftofpaclltaxelbefore
andafterinclusioncomplexwithpaclitaxel
包合物中质子的化学位移是主客分子相互作用
的结果，由于紫杉醇的相对分子质量较大，其空间构
象复杂，根据计算机程序模拟环糊精母核和紫杉醇
萜环分子模型，紫杉醇萜环跨距大于环糊精母核的
内腔直径，紫杉醇分子不能完整进入环糊精空穴中。
结合HP一}CD对紫杉醇增溶曲线两者相互作用形
成的包合物无固定比例可以推断，主客分子之问没
有固定的包合比例．不能形成恒定结合常数的包合
物，故其包合物形成的空间结构尚不能用现有信息
对计算分子模型作出准确的推论。结合紫杉醇包合
前后质子化学位移的改变，间接地推断紫杉醇被包
含的部位为紫杉醇的3个芳香环，对照紫杉醇包合
前后质子信号，3个芳香环质子的化学位移均明显，
提示可能是芳香环随机进人主分子的亲水空穴中，
且3个芳香环基团分别被不同的环糊精所包合“。1。
此外，由于紫杉醇立体空间较大，芳香环插入环糊精
内腔后受环糊精外层亲水羟基的作用，结果导致主
客分子的质子发生不同程度的位移，其中紫杉醇萜
环上一CH。和一OAc位移较为明显，从而提示主客分
子之间相互作用在侧链形成包合可能性。
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痰热清氯化钠注射液指纹图谱的研究
宋汉敏1，刘乃强‘，刘素梅2，聂桂华1
(1．河南省食品药品检验所，河南郑州450003I2．河南省兽药监察所。河南郑州450008)
捕要：目的建立痰热清氯化钠注射液的指纹图谱。方法采用HPLC—ELSD法检测痰热清注射液中非挥发性
成分，以黄芩苷对照品为参照，标定共有峰，计算相对保留时间和相对峰面积比值。确定lo批样品之间的相似度。
结果在全面方法学研究的基础上，对10批痰热清氯化钠注射液进行检测分析，HPLC指纹图谱有16个共有峰，
其相对保留时间及相对峰面积比值均符合要求。结论建立的指纹图谱可作为痰热清氯化钠注射液质量评价的重
要依据之一。
收疆日期：2006-11-01
万方数据
中草番ChineseTraditionalndHerbalDrags第38卷第9期2007年9月·1321·
关键谒：痍热清氯化钠注射液；黄芩苷；高效液相色谱；指纹图谱
中田分类号：R286．02 文献标识码：A 文章缡号：0253—2670(2007)09—1320—04
ChromatographicfingerprintofTanreqingNaCIInjection
SONGHan—minl，LIUNai—qian91，LIUSu—mei2，NIEGui—hual
(1．HenanInstituteforFoodandDrugControl，Zhengzhou450003·ChinaI2．HenanInstitute
forAnimalDrugContr01．Zhengzhou450008，China)
Abstract：ObjectiveToestablishthefingerprintdetectingstandardfoTanreqingNaClInjection．
MethodsUsingbaiealinasrefereneesubstancetocalibratethecommonpeaksbyHPLC—ELSD．Accord—
ingtothetechnicalrequirementsonfingerprintoftraditionalChinesemedicineinj ction，theirrelativere-
tentiontimesandpeakarearatioswerecalculatedandthesimilarityoftenbatchsof ampleswadeter-
mined．ResultsOnthebasisofsystematicmethodology，tenbatch sofinjectionsamplesw retestedand
analyzedsoastoestablishHPLCfingerprintfortheinjection．ConelusionTherelativeretentionmes
andpeakarearatiosof16commonpeaksonHPLCfingerprintallconformtotherequirement．Sothes-
tablishedfingerprintcanbeusedastheoneofimportantfoundationsforqualitycontrolofTanreqingNaCl
Injection·
Keywords：TanreqingNaClInjection；baicalinIHPLC；fingerprint
痰热清氧化钠注射液由黄芩、熊胆粉、山羊角、
金银花、连翘以及辅料丙二醇，工一盐酸半胱氨酸、枸
橼酸和氯化钠组成，具有清热、解毒、化痰的功效，用
于风温肺热病属痰热阻肺症。为了加强中药注射剂
的质量管理，确保中药注射剂的质量稳定、可控，国
家食品药品监督管理局要求中药注射剂必须进行指
纹图谱的研究。根据此要求，本实验对痰热清氯化钠
注射液进行了指纹图谱的研究。
1仪器与试药
Waters2690／5液相色谱仪，AlltechELSD检
测器。乙腈、三氟乙酸均为色谱纯，水为超纯水。黄
芩苷对照品(批号：0715—9708)购于中国药品生物制
品检定所。痰热清氯化钠注射液(规格为100mL)由
河南省新谊药业股份有限公司提供。
2方法与结果
2．1色谱条件：AgilentZorbaxSBC18分析柱(250
mm×4．6mm，5pm)；流动相为0．5％三氟乙酸水
溶液(A)一乙腈(B)，梯度洗脱，o～24min，流动相A
的比例从90蹦递减到58％，z4～30min，流动相A
的比例从58％递减到26％，30～40rain，流动相A
的比例从26％递减到10％；体积流量：0．5mL／min；
记录40rain色谱图；检测器参数：载气流量为2，5
mL／min，漂移管温度为95℃，撞击器关，增益4。
2．2供试品溶液的制备：精密吸取本品5mL，精密
加水5mL，摇匀，加到已活化并水洗的c。。小柱
(500mg，3mL，加甲醇5mL，待甲醇流完后，加水
10mL洗，备用)，用水0．4mL洗脱，弃去水洗脱
液，再用4mL甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液，用0．45
pm微孔滤膜滤过，即得。
2．3参照物的选择：由于痰热清氯化钠注射液中黄
芩苷和熊去氧胆酸为其主要有效成分，两个成分色
谱峰的积分面积在指纹图谱中所占的比例达80％
以上，并且色谱峰稳定，重现性好，加之黄芩苷峰处
在图谱中部，有助于色谱峰的辨认，因此选择黄芩昔
作为参照物。 一
2．4参照物溶液的制备：精密称取黄芩苷对照品适
量，加甲酵使溶解，制成0．3mg／mL的溶液，即得。
2．5测定方法：进样40此时色谱峰信号丰富，但
主要有效成分黄芩苷和熊去氧胆酸为平头峰，无法
进行相对面积的计算，而进样5pL时没有平头蜂，
但会失去许多小色谱峰信息，所以采用进样40pL
和5pL两个不同进样量，分别进行相对保留时间和
相对峰面积的计算，并生成两个指纹图谱，两者相互
补充。分别精密量取供试品溶液40止和5pL注入
高效液相色潜仪，分别记录色谱图，计算各个峰的保
留时间和积分面积，见图1。
2．6黄芩苷、熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸对照品峰的
0
Fig．1
j Io 15 20 25 30 35 柏
t／ndn
田1痰热清氯化钠注射液HPLC圈谱
HPLCChromatogramofTanreqingNaCIInjection
万方数据
·1322- 中革茵ChineseTradltlanRlandHerbalDrugs第38卷第9期2007年9月
确认：取黄芩苷、熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸对照品溶
液进样10pL，记录色谱图，见图2。由图可知，9号
峰即峰s为黄芩苷，14号峰为熊去氧胆酸，16号峰
为鹅去氧胆酸。
14
一． I ．1芏40
S-黄苓苷14-熊去氧胆酸16一磊去氧胆陵
S-baicalin14一ursodeoxyeholicacicl16-chenodeoxycholicacid
圈2黄葶苷，熊去氯胆酸和藕去氯胆酸对照品
tlPLC色谱圈
Fig·2HPLCChromatogrmofImicalln，ursodeoxy-
cholica id·andchenodeoxycholicacid
2．7方法学考察
2．7．1稳定性试验：取批号050303本品制备供试
品溶液，分别在0、2．5、5．0、7．5、10．0、12．5、15．0h
进样40止和5pL分析，记录色谱图并积分，图谱
导人中药色普指纹图谱相似度评价系统A版处理，
得到相似度系数，计算得其RSD均为0。
2．7．2精密度试验：取批号050303本品制备供试
品溶液，连续进样5次，每次40pL和5pL，记录色
谱图并积分，图谱导人中药色谱指纹图谱相似度评
价系统A版处理，得到相似度系数，计算得其RSD
均为0。
2．7．3重现性试验：取批号050303本品6份，制备
供试品溶液，进样40pL和5pL分析，记录色谱图
并积分，图谱导人中药色谱指纹图谱相似度评价系
统A版处理，得到相似度系数，计算得其RSD分别
为0．04％和0。
2．8样品测定；对10批痰热清氯化钠注射液制备
供试品溶液，取40皿和5止．分别进样测定。从各
个色谱图可以看出整个系统比较稳定，重现性好。40
pL进样量图谱，目的考察小峰代表成分与成品标准
图谱的相关性，但是黄芩苷峰和熊去氧胆酸峰超出
信号记录范围，形成平头峰，因而失去部分整体信
息，无法计算共有峰面积比，主要用来描述相关共有
峰和其相对保留时间}以5肛L进样，图谱失去部分
小峰信息，主要用来补充考察整体信息及主要大峰
之间的面积比。将10批样品两个进样量的图谱分别
导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统，按平均值
法分别生成不同进样量标准图谱，相似度见表1。可
见平均值法生成的对照图潜具有较好的代表性，与
寰1 lO批样品相似度评价结果
hMel Similarttyof enb_tchoofsampleg
10批痰热清氯化钠注射液图谱比较，相似度系数均
达到0．99以上。
因此，该对照图谱作为标准图谱，见圉3。可以
看出，采用两个进样量指纹图谱相互补充，较大进样
量图谱反映共有峰信息，小进样量反映主要共有峰
之间面积比(量比)信息，同时两个图谱均与对应标
准图谱比较，相似度系数均不低于0．99。除色谱图8
rain前无机盐峰外，一般有16个共有峰，标号为l～
16号峰，经确认，l、5号峰为连翘的相关峰。2号峰
为山羊角的相关峰，3、4、6、7、8号峰为金银花的相
关峰，9、10、11、12号峰为黄芩的相关峰，13、14、15、
16号峰为熊胆粉的相关峰。
9
12
l
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口 ’1 。，
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6g 1012 13 16
0 5 10 15 20 25 30 35
t／n“n
田3 40uL(A)和5IJL(B)的标准图谱
Fig．3NormalChromtogramsof40uL(A)
and5uL(B)
10批样品共有峰相对保留时间变动范围如下
(共有峰相对保留时间变动范围的设定，系取10批
样品共有峰相对保留时间的平均值士10％)：相对保
万方数据
中革番chhe”TraditionalsadHerbalD九-掣第鹞卷第9期2007年9月·1323·
留时间10．455～0．458(峰1)、0．485～0．488(峰2)、
0．626～0．630(峰3)、0．670～0．674(峰4)、0．794～
0．799(峰5)、0．834～0．841(峰6)、0．880～0．886
(峰7)、0．907～0．913(峰8)、S(峰9)、1．106～
1．113(●董10)、1．120～1．127(it1 )、1．156～1．163
(峰12)、1．438～1．448(峰13)、1，463～1．472(峰
14)、1．518～I．528(峰15)、1．599～1．609(峰16)。
共有峰相对面积：按《中药注射剂指纹图谱研究
的技术要求(暂行)》规定．单峰面积占总峰面积5％
以下的不做规定。色谱图中仅有14号共有峰单峰面
积占总峰面积超过5％，按规定“号峰相对s峰面
积比不得超过(20％士0．69％)。非共有峰占总蜂面
积不到0．3“，符合《中药注射剂指纹图谱研究的技
术要求(暂行)》规定。
3讨论
根据指纹图谱相似度评价分析结果，方法的稳
定性、精密度和重复性的相关系数均在0．999以上，
10批样品相似度均在0．99以上，具有很好的相关
性，可以作为痰热清氯化钠注射液质量控制标准。
黄芩苷为方中的主要有效成分，在使用紫外检
测器扫描时，其最大吸收在280ilm处r1]，但熊胆粉
中主要有效成分熊去氧胆酸没有吸收，未表现出相
关性。使用蒸发光散射检测器可以克服此不足口～，
显示更多的信息，根据信息最大化原则，选择ELSD
进行分析测定。。 ，，
由于痰热清氯化钠注射液有效成分质量浓度较
低，直接进样时所显示的色谱峰信息量很少，不能达
到指纹图谱的要求，且注射液中有辅料氯化钠，较多
的氯化钠对ELSD污染严重口4]，需要进行前处理，
以去除或基本除去无机盐，使成分质量浓度达到信
息量的要求。经过考察，采用本实验供试品溶液的制
备项下的方法进行样品处理，既基本除去了氯化钠，
又使供试品得到富集。
根据痰热清氯化钠注射液生产工艺，成品中加
有辅料上广盐酸半胱氨酸、枸橼酸，蒸发光散射检测
器对两者也能产生信号响应，氯化钠虽然经处理基
本除去，但还有残留，也产生信号响应。为考察指纹
图谱中三者对色谱峰的干扰情况，对L-盐酸半胱氨
酸、枸橼酸和氯化钠进行了考察，结果发现其色谱峰
保留时间均在5～6rain，对色谱峰无干扰。
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近红外光谱法预测红参醇提过程中总皂苷的变化研究
王静1，莫曲琪2，李斌1，瞿海斌”，程翼宇1。 。
(1．浙江大学中药科学与工程学系，浙江杭州310027，2．正大青春宝药业有限公司，浙江杭州310023)
擅耍：目的应用近红外(NIR)光谱技术快速分析红参乙醇回流提取过程。方法采用比色法测定提取液样品
的总皂苷质量浓度作为对照值，同时采集提取液样品的N1R光谱。运用正交信号校正算法消除光谱中的干扰信息，
采用偏最小=乘回归法建立NIR光谱校正模型。结果NIR光谱校正模型能够准确地预浏红参提取过程总皂苛
质量浓度。结论NIR光谱技术可用于红参醇提过程快速分析。
关键词；红参#近红外光谱；正交信号校正
中国分类号：R286．02，文献标识码；A 文章编号t0253—2670(2007)09’1323—04
Determinationofginsenosideinethanolextractingprocessofredginseng
usingear—infraredspectroscopy
WANGjin91，MOBi—qi2，LIBinl，QUHai—binl，CHENGYi—yul
(1．DepartmentofChineseMedicineSci nceandEngineering，ZhejiangUniversity，Haugzhou310027·
China·2．ChiataiQ nchunbaoPharmaceuticalCo．，Ltd．，Hangzhou310023，China)
Abstract：ObjectiveN ar—infrared(NIR)spectroscopywaus das．afastanalyticaltechniqueinth
譬銎是蓍舞茬吾翁襄厅重大科技计划(。21103519)
-通汛作者■海斌E—mailIquhb@ziu．edu．ca
万方数据
痰热清氯化钠注射液指纹图谱的研究
作者： 宋汉敏， 刘乃强， 刘素梅， 聂桂华， SONG Han-min， LIU Nai-qiang， LIU Su-mei，
NIE Gui-hua
作者单位： 宋汉敏,刘乃强,聂桂华,SONG Han-min,LIU Nai-qiang,NIE Gui-hua(河南省食品药品检验所
,河南,郑州,450003)， 刘素梅,LIU Su-mei(河南省兽药监察所,河南,郑州,450008)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(9)

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