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HPLC测定藏茵陈中獐牙菜苦苷和龙胆苦苷



全 文 :·442· 中革噶ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第3期2006年3月
HPLC测定藏菌陈中獐牙菜苦苷和龙胆苦苷
田成旺,张铁军
(天津药物研究院,天津300193)
藏茵陈为我国部颁藏药,广义的藏茵陈泛指龙
胆科(Gentianacae)獐牙菜屑(SwertiaL.)的各种植
物,主要用于治疗热症、肝胆病和血液病。印度獐牙
菜S.chirayitaBuch.一Ham.和川西獐牙菜S.
mussotiiFranch均为獐牙菜属的代表性植物。我国
有关川西獐牙菜的研究已有较多o“3,而关于印度獐
牙菜的报道较少o],印度獐牙菜主要分布于印度喜
马拉雅温带地区(从克什米尔到不丹),我国应用的
印度獐牙菜多从尼泊尔民间带入“]。印度獐牙菜具
有清热消炎、利胆退黄、保肝温胃、退热缓泻的功效,
主要用于急慢性肝炎、脂肪肝、肝硬化,并具有滋补
功效o]。本实验建立了印度獐牙菜中主要有效成
分——獐牙菜苦苷(swertiamarian)和龙胆苦苷
(gentiopicroside)的高效液相色谱测定方法,该法稳
定、快速、重现性好,并对印度獐牙菜和川西獐牙菜
中两种成分的量进行了测定和比较,为资源的合理
开发利用奠定基础。
l仪器与材料
Waters高效液相色谱仪,SP8800泵,2487紫外
检测器。
獐牙菜苦苷对照品(中国药品生物制品鉴定所);
龙胆苦苷对照品(中国药品生物制品鉴定所);水为纯
净水;乙腈和甲醇为色谱纯;其他试剂为分析纯。
本试验所用药材均从青海省玉树藏族自治州购
买,经天津药物研究院张铁军研究员鉴定。
2方法与结果
2.1色谱条件:獐牙菜苦苷:色谱柱为Diomand“
(150mmX4.6mm,10pm),流动相为乙腈一水一磷
酸(8:92:0,1),体积流量1.0mL/min,检测波长
237llm,理论塔板数不低于3000。
龙胆苦苷:色谱柱为Diomandl”(150rflm×4.6
mm,10p.m),流动相为甲醇一水一冰醋酸(25:75:
0.8),体积流量1.0mL/min,检测波长270ilm,理
论塔板数不低于3000。
2.2对照品溶液的制备:精密称取獐牙菜苦苷和龙
胆苦苷对照品适量,分别用甲醇溶解制成0.178和
收稿日期;2005—07—30
0.209mg/mL的对照品溶液,0.45btm滤过,备用。
2.3供试品溶液的制备:精密称取1.0g印度獐牙
菜或川西獐牙菜干粉,加入25mL甲醇,超声提取
30rain,放冷,滤过,加甲醇至50mL量瓶中,并稀
释至刻度,0.45pm滤过,备用。
2.4线性关系考察试验:分别精密量取上述对照品
溶液2、4、6、8、10、12pL进样+以色谱峰面积对獐牙
菜苦苷和龙胆苦苷的量作图,并进行回归统计,按
2.1项色谱条件分别测定獐牙菜苦苷和龙胆苦苷,
得到獐牙莱苦苷的回归方程为Y一38574X+
56230,R2—0.9993,线性范围0.356~2.336pg;
龙胆苦苷的回归方程为Y一527866X+37912,
R2—0.9999,线性范围0.418~2.508pg。
2.5 精密度试验:精密量取上述对照品溶液lO
pL,连续进样5次,按2.1项色谱条件分别测定獐
牙菜苦苷和龙胆苦苷,测得獐牙菜苦苷和龙胆苦苷
的峰面积RSD分别为0.716%和0.972%,表明进
样精密度良好。
.6稳定性试验:精密量取供试品溶液10pL,分
别在0、2、4、8、12h进样,按2.1项色谱条件分别测
定獐牙莱苦苷和龙胆苦苷,测得獐牙菜苦苷和龙胆
苦苷的峰面积RSD分别为2.024%和1.821%,表
明样品溶液在12h内稳定。
2.7重现性试验:取同一批药材,按供试品溶液的
制备方法制得5份样品液,精密量取10pL,分别进
样,按2.1项色谱条件分别测定,测得獐牙菜苦苷和
龙胆苦苷的峰面积RSD分别为1.784%和
1.981%,表明该方法的重现性良好。
2.8回收率试验:精密称取样品6份,分别精密加
入獐牙菜苦苷和龙胆苦苷对照品溶液适量,按供试
品制备方法制成样品溶液,0.45”m滤过,依次进样
10止,按2.1项色谱条件分别测定i计算得回收率
分别为100.27%和101.34%,RSD分别为1.895%
和1.969%。
2.9样品测定:分别取印度獐牙菜和川西獐牙菜干
粉3份,按供试品溶液制备方法制成样品溶液,各进
万方数据
中革蒋ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第3期2006年3月·443-
样10扯,按2。l项色谱条件分别测定,测定峰面
积,由线性方程计算得到印度獐牙菜和川西獐牙菜
中獐牙菜苦苷和龙胆苦苷的量,结果见表1。色谱图
见图1和2。
衰1样品中獐牙菜苦苷和龙胆苦苷的量(n=3)
TableSwertiamarianandgentiopicroside
insamples(”一3)

8——.。————.—————————儿
B
。..△.6.。.. Jlk
0 S 10 15 20 25∞O5 10 15 20 25 30
t/min
圈l獐牙菜苦苷对照品(A)和样品(B)的HPLC图
Fig·1Chromatogramofswertiamarian(A)
andS.chirayitasamples(B)
.』L.盘丛一U 5 10 15 20 25 8 5 10 15 20 25
t/rain
图2龙胆苦苷对照品(A)和样品(B)的HPLC囤
Fig.2Chromatogramofgentiopicroside(A)
andS.chirayitasamples(B)
3讨论
3.1本实验还考察了不同溶剂的提取效果,甲醇经
过0.5h的超声提取,即可将印度獐牙菜的獐牙菜
苦苷和龙胆苦苷提取完全,而采用水或乙醇作为提
取溶剂,经过1h的超声提取仍不能提取完全。3.2
獐牙菜苦苷和龙胆苦苷是存在于獐牙菜属植物中
的主要活性成分,近年来用于开发保肝类药物较多,
但用HPI。C法测定印度獐牙菜中獐牙菜苦苷和龙
胆苦苷尚未见报道,本研究建立的HPLC检测方法
精密度、重现性好,杂质干扰少,样品稳定性和回收
率均较高,是一种理想的测定方法。
3.3从本试验结果可以看出,JII西獐牙菜中獐牙菜
苦苷的量高达6.314%,比以往文献报道的都要
高”],这可能与其生存环境有较大关系,同时,獐牙
菜苦苷是藏茵陈治疗肝炎的重要有效成分,因此具
有良好的开发前景。
3.4印度獐牙菜人口味感极苦,但其獐牙菜苦苷和
龙胆苦苷量并不高,其化学成分和药用价值有待进
一步研究。
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万方数据
HPLC测定藏茵陈中獐牙菜苦苷和龙胆苦苷
作者: 田成旺, 张铁军
作者单位: 天津药物研究院,天津,300193
刊名: 中草药
英文刊名: CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年,卷(期): 2006,37(3)
被引用次数: 6次

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