全 文 ：表 3　泽兰 L. F04对大鼠体内血栓形成的影响 (x± s)
Table 3　 Ef fect of L. F04 on thrombosis
in rats in v ivo (x± s )
组　别 动物 /只 剂量
/ ( g· k g- 1 )
血栓湿重
/g
血栓形成抑
制率 /%
正常对照 11 - 35. 82± 10. 88 -
L. F04 10 0. 204 26. 10± 9. 97* 27. 14
10 0. 408 26. 10± 7. 16* 27. 41
复方丹参片 10 1. 175 24. 40± 9. 90* 31. 88
　　与正常对照组比较: * P < 0. 05
　　* P < 0. 05 vs normal cont rol group
形成血栓的主要因素。观察泽兰 L. F04对血小板聚
集和血栓形成的影响 ,是研究其活血化瘀作用机制
的一个重要组成部分。 本实验结果表明 ,泽兰 L.
F04高、低剂量 ig给药对血瘀证大鼠 ADP诱导的
血小板聚集皆有显著的抑制作用 ,且呈剂量依赖关
系 ,与预期结果相一致 ,并为确定 L. F04为泽兰活
血化瘀作用的主要有效部分提供了进一步的证据。
本实验结果还表明 ,泽兰 L. F04 0. 408, 0. 204
g /kg均能有效地减轻血瘀大鼠体外血栓湿、干质量
及抑制大鼠体内血栓形成 ,其中高剂量组的抗血栓
作用尤为显著。研究证实泽兰 L. F04不仅可以抑制
血小板聚集 ,还通过阻抑凝血系统功能、减少血浆纤
维蛋白原含量来抑制血栓形成。同时 L. F04具有较
强的改善红细胞变形能力、抑制红细胞聚集、降低血
液黏度等特点 [5 ] ,说明 L. F04从多种途径、多种作
用环节干预血栓形成过程。其中抑制血小板聚集起
关键性作用。
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板蓝根中丁香酸的抗内毒素作用
刘云海 ,方建国 ,贡雪 ,谢　委
(华中科技大学同济医学院附属同济医院 ,湖北 武汉　 430030)
摘　要: 目的　研究从板蓝根中分离出的丁香酸的抗内毒素作用。方法　将丁香酸配成 1% 水溶液 ,鲎试验法做抗
内毒素定量测定 ;用内毒素致兔发热实验检测丁香酸体内抗内毒素作用 ;内毒素致小鼠死亡实验测定丁香酸保护
作用。结果　 0. 334 mg /m L丁香酸可使 4 EU内毒素降为 0. 777 EU ,破坏率为 83. 16% ; 1% 丁香酸溶液可使内毒
素引起的兔热显著降低 ;使同等剂量脂多糖引起的小鼠死亡率由 68% 降为 20%。结论　丁香酸有抗内毒素作用。
关键词: 丁香酸 ; 抗内毒素 ; 板蓝根
中图分类号: R285. 5　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 10 0926 03
Anti-endotoxic effects of syringic acid inRadix Isatidis
LIU Yun-hai , FAN G Jiang-guo , GON G Xue-peng , XIE Wei
( Tong ji Hospital, Tong ji Medical Co lleg e, Hua zhong Univ ersity o f Science and Tech no lo gy , Wuhan 430030, China )
Abstract: Object　 To study the anti-endotoxic effect of syringic acid ( SA) w hich w as isola ted f rom
Radix Isatidis ( Banlangen in Chinese, BLG) . Methods　 SA was ex t racted and isolated f rom BLG and
made to 1% solution. The content of SA-pret reated ET w as quantitativ ely determined using Limulus
Test. Then the abili ty of fev er induction of endotoxin ( ET) pret reated w ith SA was measured using endo-
·926· 中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 10期 2003年 10月
收稿日期: 2002-10-11基金项目: 国家自然科学基金资助项目 ( 39870872) ; 卫生部科学研究基金资助项目 ( 98-2-110)作者简介: 刘云海 ( 1942— ) ,男 ,江苏如东人 ,主任药师 ,主要从事医院药学研究。 Tel: ( 027) 83649095　83624090
E-mail: liuyunhaitong ji@ Yahoo. com. cn
toxin-induced fever test in rabbi ts. At last, the lipopoly saccha ride ( LPS) -induced dea th in mice pret reated
w ith and without SA w as compa red. Results　 Being pret reated wi th SA, 83. 16% ET was dest roy ed, the
ET-induced fever in rabbi ts reliev ed markedly and the LPS-induced dea th rate in mice dropped from 68%
to 20% . Conclusion　 SA isolated f rom BLG has anti-endo toxic ef fects.
Key words: sy ringic acid ( SA) ; anti-endo toxin; Radix Isatidis ( BLG)
　　中药清热解毒作用的药理基础是其活性成分的
抗菌、抗内毒素作用。板蓝根抗大肠杆菌 O111 B4内毒
素作用已有报道 [1～ 3 ] ,本实验在对板蓝根提取部位
抗内毒素作用大量研究基础上 ,对其化学成分丁香
酸的抗内毒素作用进行了研究。
1　材料
1. 1　丁香酸提取和分离: 板蓝根产于河北邢台 ,经
华中科技大学同济医学院药学院张长弓教授鉴定为
十字花科菘蓝 Isatis indigot ica L. 的干燥根。 将其
粉碎成细粉 ,用 95% 乙醇浸泡 72 h,继用乙醇渗
漉 ,回收乙醇至无醇味并浓缩至浸膏状 ,用石油醚反
复萃取 ,除尽石油醚部位 ,继用氯仿反复萃取得氯仿
部位 (得率 0. 8% ) ;采用硅胶柱色谱 ,用不同比例
氯仿-甲醇液作梯度洗脱 ,并用体内外多种抗内毒素
活性实验筛选 [4, 5 ] ,最终得抗内毒素活性最强成分 ,
经中国科学院上海药物研究所鉴定为丁香酸 ( sy-
rigic acid, S A)。
1. 2　丁香酸溶液配制:取丁香酸 1 g ,加适当助溶
剂 ,加热熔化 ,加水稀释到 100 mL,用 NaOH液调
pH 6～ 7,灭菌消毒备用。
1. 3　试剂:脂多糖 ( E. Coli O26 B6 ,每支 5 mg ,批号
11K4040) 购自 Sigma公司 ;内毒素工作标准品
( E. Coli O111B4 ,每支 120 EU ,批号 2000— 4) 购自
中国药品生物制品检定所 ;鲎试剂 ( T AL, 0. 1 mL /
支 ,灵敏度 0. 05 EU /mL,批号 0008152)和细菌内
毒素溶解水 ( BET,内毒素限量 0. 015 EU /mL,批号
000308)均购自湛江安度斯生物制品有限公司 ;卡
介苗 ( BCG, 50 mg /支 ,批号 990901)购自上海生物
制品研究所。
1. 4　动物:日本大耳白兔 ,体重 2. 0～ 2. 5 kg ,雌雄
兼用 ;昆明种小鼠 ,体重 16～ 18 g ,雌性 ,均由华中
科技大学同济医学院医学动物实验中心提供。
1. 5　仪器: EDS98型细菌内毒素检测仪 ,购自北京
金山川科技发展有限公司 ; XW型旋涡混合器由上
海医科大学研究所提供。
2　实验方法
2. 1　丁香酸破坏内毒素定量测定
2. 1. 1　内毒素液配制:取内毒素工作标准品 ( 120
EU /支 )加入 1 mL细菌内毒素溶解水 ,于旋涡混
合器振荡 30 s,即成 120 EU /mL内毒素液。
2. 1. 2　标准曲线制备: 分别取内毒素液适量 ,用细
菌内毒素溶解水稀释成 5. 0, 2. 5, 1. 0, 0. 5, 0. 25和
0. 1 EU /mL系列内毒素浓度 (C ) ,各取 0. 2 m L加
入鲎试剂中 (双管法 ) ,旋涡混合器振荡后迅速插入
内毒素定量测定仪 ,记录凝胶形成时间 ( T g ) ,用
logTg对 logC作图 ,得标准曲线 logTg= 2. 800 49-
0. 233 26 logC , r = 0. 990 5,内毒素在 0. 1～ 5. 0
EU /mL浓度与凝胶形成时间呈线性关系 ,最低检
出限为 0. 05 EU /mL。
2. 1. 3　回收率:按上述方法 ,取鲎试剂 5支 ,分别
精密加入浓度为 4 EU /mL内毒素液 0. 2 mL,测定
凝胶形成时间 ,按标准曲线计算浓度为 ( 4. 726±
0. 243) EU /m L,回收率为 ( 118. 15± 10. 52)%。
2. 1. 4　样品测定: 取 0. 5 mL丁香酸液 ( 1% ) 与
0. 1 mL内毒素液混合 ,于水浴 ( 37± 1)℃ 温育
( 60± 2) min,温育后取 0. 1 mL溶液加入 0. 4 mL
细菌内毒素溶解水 ,使丁香酸和内毒素终浓度分别
为 0. 334 mg /mL和 4 EU /m L,此为样品组 ,同时
用 0. 334 mg /L丁香酸和 4 EU /m L内毒素液分别
作阴性和阳性对照组 ,测定内毒素浓度。丁香酸对内
毒素的破坏率按下列公式计算:
r= [ 1- (样品组 -阴性对照组 ) /(阳性对照组 -阴性对
照组 ) ]× 100% [6]。
2. 2　丁香酸对脂多糖致兔发热的影响
2. 2. 1　内毒素液配制:将内毒素工作标准品用氯化
钠注射液 6 mL溶解 ,使成 20 EU /mL内毒素液。
2. 2. 2　动物实验: 实验前 1周将兔于实验室饲养 ;
实验前 3 d,每天测肛温 2次 ,使兔适应操作环境 ;
实验前 1 d下午开始兔禁食不禁水 ;实验时 ,隔 30
min测肛温 1次。选体温在正常范围内且肛温差≤
0. 2℃ 的兔 15只 ,随机分为 3组 ,每组 5只。样品
组和丁香酸液组分别按 5 mL /kg 自耳缘静脉 iv
1% 丁香酸液 ,内毒素模型组注入等量氯化钠注射
液 , 10 min后 ,样品组和内毒素模型组按同法注入 2
mL内毒素液 ,注射后 0. 5 h开始 ,每隔 0. 5 h测肛
温 1次 ,共测 8次 [7 ]。
·927·中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 10期 2003年 10月
2. 3　丁香酸对脂多糖致小鼠死亡的保护作用
2. 3. 1　卡介苗敏化小鼠:将卡介苗 ( 50 mg /支 )加
氯化钠注射液溶解成 5 mL,按文献方法 [ 8] ,小鼠 ip
200 mg /kg ,按常规方法饲养 ,第 10天开始实验。
2. 3. 2　脂多糖液配制:取脂多糖 1支 ,加氯化钠注
射液溶解成 5 mL。
2. 3. 3　动物实验:实验前 16 h小鼠禁食不禁水 ,实
验时将小鼠随机分为 3组 ,每组 20只 ;样品组和丁
香酸液组按 20 m L /kg ip丁香酸液 ,脂多糖模型组
按同样量注射氯化钠注射液 , 1. 5 h后 ,样品组和内
毒素模型组自尾静脉 iv 2. 42 mL /kg脂多糖液 ,于
72 h内观察小鼠死亡情况。
3　结果
3. 1　丁香酸对内毒素的破坏作用:样品管、阳性对
照管和阴性对照管内毒素平均浓度分别为 0. 777,
4. 366和 0. 055 EU /mL,浓度为 0. 334 mg /m L的
丁香酸液对内毒素的破坏率为 83. 16% 。
3. 2　丁香酸对内毒素致兔发热的影响:按每只兔给
药后的最大升温数与给药前平均基础体温之差求每
组兔平均最大升温 ΔTmax ,另按每只兔给药后 4 h
内体温随时间变化求体温反应指数 T RI4 ( 4 h内兔
体温变化曲线下面积 )。结果见表 1。结果显示 ,兔给
予内毒素 ( 40 EU /kg )可引起典型发热反应 ,而给
予 1% 丁香酸溶液 ( 5 m L /kg ) 后再给予等量内毒
素液 ,则 TRI4和 ΔTmax均降低 ,而样品组与丁香酸
液组引起兔发热差异无显著性。
表 1　丁香酸对内毒素致兔发热影响 (x± s,n= 5)
Table 1　 Effect of SA on rabbits fever induced
by endotoxin (x± s, n= 5)
组　别 基础体温 /℃ TRI4 /cm2 ΔTmax /℃
样品 39. 15± 0. 25 1. 16± 0. 21 0. 36± 0. 07* *
丁香酸液 39. 20± 0. 36 0. 16± 0. 13 0. 13± 0. 12* *
内毒素模型 38. 94± 0. 34 3. 21± 0. 27 1. 14± 0. 32
　　与内毒素模型组比较: * * P < 0. 01
　　* * P < 0. 01 vs end otoxin model group
3. 3　丁香酸对小鼠死亡的影响:样品组 ( 20只 ) 10
h后死亡 4只 ,死亡率 20% ;脂多糖模型组 ( 19只 )
5 h内死亡 13只 ,死亡率 68% ;丁香酸组 ( 20只 )
72 h内全部存活。样品组与脂多糖模型组比 ,经 χ2
检验存活率差异有显著性 ( P < 0. 01)。
4　讨论
4. 1　动态显色凝胶法操作简单 ,灵敏度高 ,测定范
围广 ,通常内毒素浓度在 0. 05～ 300 EU /m L浓度
内均可作定量测定。 本实验经丁香酸液 ( 0. 334
mg /mL) 作用后 ,内毒素浓度由 4 EU /m L降为
0. 777 EU /mL,破坏率达 83. 16%。
4. 2　致热是内毒素的主要特性之一 ,兔对内毒素最
敏感 ,故常被用于清热解毒药研究。关于引起兔发热
的剂量 ,各家报道不一致 ,我们发现内毒素模型组给
予 40 EU /kg E. Co li O111 B4可产生典型发热反应 ,
与只给丁香酸液相比差异显著。
4. 3　不同种类实验动物对脂多糖敏感性不同。文献
报道 ,小鼠脂多糖半数致死量为 25 mg /kg [8 ] ,经用
卡介苗增敏 , 2. 42 mg /kg脂多糖可致 70% 小鼠死
亡 ,因卡介苗能刺激 T细胞活化吞噬细胞 ,减少脂
多糖量。 我们实验发现 ,给脂多糖前给丁香酸 ,对小
鼠死亡有保护作用 ,而在给脂多糖后给丁香酸 ,则效
果差。可见在免疫系统激活前给与丁香酸 ,有助抗内
毒素作用发挥。 小鼠内毒素模型组因注射方法不当
死亡 1只 ,故用 19只参加计算。
4. 4　中药化学成分是中药药理作用的物质基础 ,本
实验结果显示 ,板蓝根所含丁香酸于体内、外均有抗
内毒素活性 ,可以作为板蓝根抗内毒素药物研究的
指标成分。
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