全 文 ：黄连配方颗粒的 HPLC 指纹图谱研究
周　晖, 刘　萌Ξ
(温州市药品检验所, 浙江 温州　325028)
　　配方颗粒是我国 1993 年尝试中药改革而发展
的新剂型。产品采用将中药饮片经浸提、浓缩、干燥
等若干工艺精制而成, 保持原中药饮片的性味与功
能。2001 年国家药品监督管理局发布的《中药配方
颗粒管理暂行规定》已明确规定配方颗粒可以在全
国范围试点临床医院进行使用, 并对其质量标准的
研究作了技术要求。本实验对批准研制的 3 家企业
的黄连配方颗粒进行H PL C 指纹图谱研究, 以便了
解配方颗粒与原料饮片、药材在总成分和有效成分
方面的符合程度, 比较和评价不同制备工艺与产品
的内在质量、均一性等关系, 建立符合中药特点的质
量标准。
1　仪器与材料
W aters 高效液相色谱仪, 515 泵二组, 2487 紫
外检测器, 717 自动进样系统。乙腈为色谱纯, 其他
试剂为分析纯。黄连配方颗粒及原料饮片由临床试
用医院和研制企业提供 (表 1)。黄连对照药材和盐
酸小檗碱对照品由中国药品生物制品检定所提供。
表 1　样品来源
Table 1　Sample resources
编号 批　号 规　格 生产单位与来源
A 1 010320 每袋相当饮片 3 g 深圳三九医药贸易有限公司
A 2 021020 同上 同上
A 3 021115 同上 同上
A 饮片 饮片 同上 (产地: 四川)
B1 020914 每袋相当饮片 3 g 广东一方制药有限公司
B2 021231 同上 同上
B3 030850 同上 同上
B饮片 饮片 同上 (产地: 四川)
C1 0204051 每袋相当饮片 3 g 江阴天江药业有限公司
C2 0210073 同上 同上
C3 0309025 同上 同上
C饮片 饮片 同上 (产地: 四川)
2　方法和结果
211　色谱条件: 色谱柱为A lltech C18 (250 mm ×
416 mm , 5 Λm ) , 流动相为乙腈20105 mo löL 磷酸二
氢钾, 梯度洗脱: 0～ 15 m in 乙腈由 15% 升为 25% ,
保持 15 m in, 30～ 45 m in 乙腈由 25% 升为 35% , 再
保持 15 m in 至 60 m in; 流速为 015 mL öm in; 检测波
长为 350 nm ; 温度为 30 ℃; 进样量为 10 ΛL。
212　对照品溶液的制备: 精密称取盐酸小檗碱对照
品适量, 用 1% 醋酸水溶液稀释成 40 ΛgömL 的溶
液, 即得。
213　对照药材溶液的制备: 精密称取黄连对照药材
粉末 1 g, 置 100 mL 量瓶中, 加 1% 醋酸水溶液约
80 mL , 超声 30 m in, 放冷, 加溶剂至刻度, 摇匀, 滤
过。精密取续滤液 3 mL 置 25 mL 量瓶中, 加 1% 醋
酸水溶液稀释至刻度, 摇匀, 即得。
214　供试品溶液的制备: 取黄连配方颗粒 1ö3 袋
(相当于饮片 1 g) 及原料黄连饮片 1 g (研成粉末) ,
精密称定, 分别置 100 mL 量瓶中, 按对照药材溶液
的制备方法制备, 即得。
215　测定方法: 取各供试品溶液和对照品溶液, 按
上述色谱条件注入高效液相色谱仪, 记录色谱图, 计
算, 即得。
216　方法学考察
21611　精密度试验: 取同批供试品溶液连续进样 6
次, 测共有峰 11 个, 各共有峰相对峰面积R SD < 3%。
21612　重复性试验: 取同批颗粒 6 份, 按供试品溶
液制备法制备, 分别进样, 测得各共有峰相对峰面积
的R SD < 3%。
21613　稳定性试验: 取同批供试品溶液分别在 0,
6, 12, 24, 36 h 进样, 测得各共有峰相对峰面积的
R SD < 3% , 表明供试品溶液在 36 h 内稳定。
217　指纹图谱与各项技术参数
21711　共有峰的指定: 比较对照药材与供试品的
H PL C 图和相关参数, 得出其中共有峰 11 个 (图 1)。
21712　共有峰的相对保留时间、峰面积、相对峰面
积: 11 号峰为盐酸小檗碱, 是黄连的主成分, 其峰面
积平均占总峰面积的 57% , 比较稳定, 选择作为参
照峰。共有峰的相对保留时间和相对峰面积见表 2,
3。由表 3 可见样品间的共有峰相对面积 R SD <
4%。共有峰峰面积占总峰面积的 9915% , R SD 为
012% , 符合指纹图谱的有关规定 (表 4)。
·046· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 6 期 2004 年 6 月
Ξ 收稿日期: 2003211213
表 2　样品和对照药材的共有峰相对保留时间
Table 2　Relative reten tion time of common peaks of samples and Rh izom a Cop tid is
编　号
共有峰相对保留时间
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 r
对照药材 0. 14 0. 17 0. 21 0. 24 0. 58 0. 73 0. 76 0. 77 0. 81 0. 96 1 1. 000
A 1 0. 14 0. 16 0. 20 0. 23 0. 57 0. 72 0. 75 0. 76 0. 80 0. 95 1 1. 000
A 2 0. 14 0. 16 0. 21 0. 24 0. 57 0. 74 0. 76 0. 78 0. 82 0. 96 1 1. 000
A 3 0. 14 0. 16 0. 20 0. 23 0. 57 0. 73 0. 76 0. 77 0. 81 0. 96 1 1. 000
A 饮片 0. 14 0. 16 0. 21 0. 24 0. 57 0. 72 0. 75 0. 77 0. 81 0. 96 1 1. 000
B1 0. 14 0. 16 0. 20 0. 22 0. 57 0. 73 0. 76 0. 77 0. 81 0. 96 1 1. 000
B2 0. 14 0. 17 0. 21 0. 24 0. 58 0. 73 0. 75 0. 77 0. 81 0. 96 1 1. 000
B3 0. 14 0. 16 0. 21 0. 24 0. 57 0. 74 0. 77 0. 78 0. 82 0. 96 1 1. 000
B饮片 0. 14 0. 16 0. 21 0. 24 0. 57 0. 73 0. 76 0. 77 0. 81 0. 96 1 1. 000
C1 0. 14 0. 16 0. 20 0. 23 0. 57 0. 72 0. 75 0. 77 0. 81 0. 96 1 1. 000
C2 0. 14 0. 17 0. 21 0. 24 0. 58 0. 73 0. 76 0. 77 0. 81 0. 96 1 1. 000
C3 0. 14 0. 16 0. 20 0. 23 0. 57 0. 73 0. 75 0. 77 0. 81 0. 96 1 1. 000
C饮片 0. 14 0. 17 0. 21 0. 24 0. 57 0. 73 0. 75 0. 77 0. 81 0. 96 1 1. 000
均值 0. 14 0. 16 0. 21 0. 24 0. 57 0. 73 0. 76 0. 77 0. 81 0. 96 1 1. 000
表 3　样品和对照药材的共有峰相对峰面积
Table 3　Relative areas of common peaks of samples and Rh izom a Cop tid is
编　号
共有峰相对峰面积
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 r
对照药材 0. 01 0. 02 0. 02 0. 02 0. 11 0. 04 0. 04 0. 22 0. 28 0. 16 1 0. 975
A 1 0. 01 0. 01 0. 01 0. 01 0. 02 0. 06 0. 07 0. 05 0. 14 0. 25 1 0. 995
A 2 0. 01 0. 01 0. 01 0. 01 0. 02 0. 06 0. 07 0. 05 0. 15 0. 24 1 0. 996
A 3 0. 01 0. 01 0. 01 0. 01 0. 01 0. 02 0. 07 0. 05 0. 15 0. 25 1 0. 995
A 饮片 0. 003 0. 01 0. 01 0. 01 0. 03 0. 07 0. 16 0. 06 0. 29 0. 26 1 0. 998
B1 0. 01 0. 02 0. 01 0. 01 0. 02 0. 06 0. 12 0. 06 0. 23 0. 24 1 1. 000
B2 0. 004 0. 01 0. 01 0. 01 0. 03 0. 06 0. 10 0. 06 0. 22 0. 23 1 1. 000
B3 0. 002 0. 01 0. 01 0. 01 0. 03 0. 06 0. 11 0. 06 0. 22 0. 25 1 1. 000
B饮片 0. 003 0. 01 0. 01 0. 01 0. 04 0. 07 0. 17 0. 06 0. 31 0. 28 2 0. 996
C1 0. 005 0. 01 0. 01 0. 01 0. 02 0. 06 0. 12 0. 06 0. 23 0. 25 1 1. 000
C2 0. 003 0. 02 0. 02 0. 02 0. 03 0. 06 0. 12 0. 06 0. 24 0. 25 1 1. 000
C3 0. 003 0. 01 0. 01 0. 01 0. 03 0. 06 0. 13 0. 06 0. 25 0. 24 1 1. 000
C饮片 0. 003 0. 02 0. 01 0. 01 0. 05 0. 07 0. 19 0. 07 0. 33 0. 29 1 0. 993
均值 0. 005 0. 01 0. 01 0. 01 0. 03 0. 06 0. 12 0. 06 0. 23 0. 23 1 1. 000
RSD ö% 0. 34 0. 45 0. 29 0. 29 1. 03 1. 24 3. 52 0. 55 2. 67 1. 37 0
图 1　黄连对照品(A)和黄连配方颗粒(B)的HPLC 指纹图
F ig. 1　HPLC f ingerpr in t of Rh izom a Cop tid is (A)
and its granules (B)
　　r=
∑
n
K = 1
X K iX K j
(∑
n
K= 1
X2Ki) (∑
n
K= 1
X2Kj)
218　共有成分相对含量的计算: 将每克对照药材与
配方颗粒黄连及原料黄连饮片的共有峰面积进行比
较, 计算共有成分的相对含量, 同时计算盐酸小檗碱
含量, 结果见表 4。
表 4　共有峰面积和相对含量
Table 4　Areas of common peaks and rela tive con ten t
编　号
共有峰峰面积相对值ö%
总峰面积 对照药材共有峰
盐酸小檗碱
含量ö% 平均ö% R SD ö%
对照药材 98. 9 100　 5. 6
A 1 99. 1 42. 4 2. 7
A 2 99. 6 38. 4 2. 5
A 3 99. 8 42. 7 2. 8 2. 7 5. 4
A 饮片 99. 4 187. 1 10. 4
B 1 99. 3 49. 9 3. 0
B 2 99. 7 45. 9 2. 8
B 3 99. 6 60. 5 3. 7 3. 3 14. 4
B饮片 99. 5 201. 4 10. 8
C1 99. 4 108. 5 6. 5
C2 99. 5 102. 9 6. 1
C3 99. 7 109. 1 6. 4 6. 3 3. 3
C饮片 99. 6 215. 6 11. 2
·146·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 6 期 2004 年 6 月
3　讨论
311　本实验采用 1% 醋酸水溶液为溶剂, 黄连配方
颗粒和饮片溶出较好; 采用乙腈20105 mo löL 磷酸
二氢钾梯度洗脱, 黄连中各成分得到较好分离,
H PL C 色谱图效果良好。经方法学考察: 盐酸小檗碱
精密度、重复性、稳定性试验良好; 在 4～ 80 ΛgömL
与峰面积呈良好线性关系, 方程为A = 84 917 C -
59 263, r= 01999 9; 平均回收率为 9916% , R SD 为
111% (n= 3)。本法可用于黄连饮片及其配方颗粒
的质量评价和控制。
312　从指纹图看, 3 厂家 9 批配方颗粒与原料饮片、 对照药材在总成分和有效成分方面具有良好的相似性。采用相似度计算法计算, 与平均样品值比较, 共有峰相对保留时间的相似系数 r≥01999 9; 共有峰相对峰面积的相似系数 r≥01993。平均共有峰总面积在 99% 以上。提示各家黄连配方颗粒的生产工艺基本成熟, 用于生产的原料饮片品种稳定、质量可靠。313　相对于对照药材, 3 个厂家黄连配方颗粒的共有峰总面积和盐酸小檗碱的含量差异较大。提示各厂家有必要按有关规定规范工艺和质量, 研究颗粒与饮片的等效性关系, 合理调整配方颗粒的标示规格, 制定出科学、统一的质量标准。
HPLC 法测定鼻炎灵片中欧前胡素的含量
赵春香1, 梁　英2, 王丽娜1Ξ
(11 吉林省药品检验所, 吉林 长春　130062; 21 吉林省利华制药厂, 吉林 长春　130000)
　　鼻炎灵片是由苍耳子、黄芩、白芷等 8 味中药经
提取加工制成的中药复方制剂。具有透窍消肿、祛风
退热之功效, 主要用于慢性鼻窦炎、鼻炎及鼻塞头痛,
浊涕臭气, 嗅觉失灵等。原质量标准没有含量测定项。
本实验采用H PL C 法对制剂中欧前胡素进行了含量
测定。方法简便、快速, 可以有效地控制产品的质量。
1　仪器与试药
L C—10A T vp 高效液相色谱仪, SPD—10A vp
紫外检测器,W DL —95 工作站。
　　欧前胡素 (批号: 082629502) 对照品购自中国药
品生物制品检定所, 鼻炎灵片由吉林省博维药业有
限公司提供。甲醇为优级纯, 其他试剂均为分析纯。
2　方法与结果
211　色谱条件: 用A gilen t Zo rbax 80A Ex tend2C 18
(250 mm ×416 mm , 5 Λm ) 色谱柱, 甲醇2013% 磷酸
溶液 (60∶40)为流动相, 检测波长为 248 nm。理论
塔板数按欧前胡素峰计不得低于 8 000。
212　供试品溶液的制备: 取本品 10 片, 除去糖衣
后, 精密称定, 研细, 精密称取 017 g, 置索氏提取器
中, 加甲醇适量, 回流提取 3 h, 提取液蒸干, 残渣加
甲醇使溶解, 并转移至 25 mL 量瓶中, 加甲醇至刻
度, 摇匀。用微孔滤膜滤过, 取续滤液, 即得。
213　标准曲线的制备: 精密称取欧前胡素对照品
5121 m g, 置 25 mL 量瓶中, 用甲醇溶解并稀释至刻
度, 摇匀, 作为对照品溶液。精密量取 011, 0125,
015, 110, 210, 310 mL , 分别置 25 mL 量瓶中, 加甲
醇稀释至刻度, 摇匀, 分别精密量取 10 ΛL 注入液相
色谱仪, 记录峰面积积分值。以进样量为横坐标, 峰
面积积分值为纵坐标, 绘制标准曲线, 得回归方程
为: A = 72 422 776 C + 94 150, r= 01999 8。结果表
明欧前胡素在 01008 3～ 0125 Λg 与峰面积呈良好
的线性关系。
214　空白试验: 按处方比例及制备工艺配制缺白芷
的阴性对照适量, 称取 017 g, 按 212 项下的方法操
作, 并测定, 结果阴性对照无干扰, 见图 1。
215　精密度试验: 取同一对照品溶液, 连续进样 5
次, 每次 10 ΛL , 记录欧前胡素峰面积, 结果峰面积
R SD = 014%。
216 　 重 现 性 试 验: 取 同 一 批 号 样 品 ( 批 号
20021101) , 制备供试品溶液, 平行测定 5 份, 得欧前
胡素的含量为 2312 Λgö片, R SD 为 210%。
217　稳定性试验: 取同一对照品溶液, 每隔 24 h 注
入液相色谱仪 10 ΛL , 记录峰面积, 结果欧前胡素峰
面积R SD 为 014% (n= 6) , 结果表明对照品溶液在
5 d 内稳定性良好。
218　加样回收试验: 精密称取已知含量的样品适量
(批号: 20021101, 含欧前胡素约 44 Λg) , 置索氏提
取器中, 精密加入 01208 4 m gömL 欧前胡素对照品
·246· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 6 期 2004 年 6 月
Ξ 收稿日期: 2003210203