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新疆党参总黄酮和多糖的含量测定



全 文 :光光度法, 在 413 nm 波长处测定吸光度, 以淫羊藿
苷对照品浓度为横坐标, 吸光度为纵坐标, 绘制标准
曲 线, 进 行 线 性 回 归, 得 回 归 方 程 为:
Y = 010 144 X - 01000 9 相关系数: r= 01999 9, 结
果表明, 淫羊藿苷对照品在 10104~ 80132 ΛgömL
线性关系良好。
217 精密度考察: 取供试品溶液 310 mL , 置于 10
mL 量瓶中, 对同一供试品溶液连续测定 5 次,
R SD = 0. 37% , 结果表明该方法精密度良好。
218 回收率试验: 取淫羊藿样品 5 份, 每份约 012
g, 精密称定, 置 50 mL 具塞锥形瓶中, 分别精密加
入淫羊藿苷对照品约 15 m g, 按供试品溶液制备方
法制备供试品溶液, 取供试品溶液 310 mL , 置于 10
mL 量瓶中, 测定含量, 计算得平均回收率为
99194% , R SD = 1142%。
219 重现性试验: 取同一批淫羊藿样品 5 份, 分别
按供试品溶液制备项下的方法制备供试品溶液, 测
定 含 量, 结 果 分 别 为 7158% , 7143% , 7162% ,
7156% 和 7166% , R SD = 1174%。
2110 两种方法测量的结果比较: 将 219 中的 5 份
供试品溶液按《中华人民共和国药典》方法测量, 结
果分别为 10114% , 9197% , 10103% , 10111% 和
10107% , 平均值为 10106%。219 项下测量结果的
平均值为 7157%。
3 结论
  通过比较淫羊藿苷、淫羊藿提取液经 1% A lC l3
(甲醇) 试液显色前后的紫外吸收光谱, 认为淫羊藿
提取液经 1% A lC l3 (甲醇) 试液显色后, 采用分光
光度法, 以淫羊藿苷为对照品, 在 413 nm 处测定药
材中 T FE 含量更合理。
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新疆党参总黄酮和多糖的含量测定
李 艳1, 兰 卫2, 孙 萍1, 刘 霞3, 谢建新3Ξ
(11 石河子大学师范学院, 新疆 石河子 832003; 21 石河子大学药学院, 新疆 石河子 832003;
31 石河子大学医学院, 新疆 石河子 832003)
  新疆党参Cod onop sis clem a tid ea (Sch renk) C.
B. C larke 为桔梗科党参属多年生草本植物, 药用根,
其性甘、平, 补脾胃、益气血、生津止渴, 是重要传统补
益药, 民间用于治疗功能性子宫出血、体虚无力、胃下
垂、风湿性心脏病等[1 ]。据报道, 新疆党参含 12 种生
命必需微量元素; 含 37 种挥发油[2 ] , 含糖类、皂苷、生
物碱等[1 ]。新疆党参在新疆均有分布, 且储量丰富, 但
并未得到充分开发利用。本实验首次运用超声技术[3 ]
从新疆党参中连续提取总黄酮、多糖并测定其含
量[4, 5 ] , 为正确评价新疆党参质量提供依据。
1 仪器、试剂及样品
111 仪器: 岛津UV —2401PC 紫外可见分光光度
计,DL 2360 超声波仪 (35 kH z, 浙江象山县石浦海天
电子仪器厂) , T G328B 分析天平, D ZKW —C 电子
恒温水浴 (北京光明医疗仪器厂) , R 2201 旋转蒸发
器 (上海申胜生物技术有限公司) , 索氏提取器。
112 材料与试剂: 新疆党参: 采自新疆天山, 经石河 子大学药学院生药教研室成玉怀副教授鉴定为新疆党参C. clem a tid ea (Sch renk) C. B. C larke。秋季挖取, 洗净, 阴干, 粉碎后过 65 目筛, 细粉于烘箱中60 ℃干燥 4 h 待用。芦丁对照品购自中国药品生物制品检定所。其余试剂均为分析纯。2 新疆党参中总黄酮、多糖含量测定211 供试品溶液制备: 精密称取党参粉约 2 g, 置索氏提取器中, 用石油醚 (60 ℃~ 90 ℃) 水浴回流脱脂 2 次 (每次 2 h)。残渣挥干溶剂后, 置锥形瓶中, 加85% 乙醇 50 mL 浸泡 12 h, 超声提取 2 次, 每次 30m in。滤过, 另用少量 85% 乙醇多次洗涤滤渣, 并入提取液, 并转入 100 mL 量瓶中, 用 85% 乙醇定容,即得测总黄酮的新疆党参供试品液É。  将提尽黄酮后的党参残渣置 100 mL 锥形瓶中, 加 80% 乙醇 50 mL 超声提取 20 m in, 以除去单糖及一些苷类。残渣挥干乙醇后, 加水 50 mL 超声提取 30 m in 后滤过, 再加水 50 mL 重复超声提取 1
·412· 中草药 Ch inese T radit ional and H erbal D rugs 第 35 卷第 2 期 2004 年 2 月
Ξ 收稿日期: 2003205218
次, 合并两次提取液, 然后定容于 250 mL 量瓶中,
即为测多糖的新疆党参供试品液Ê。
212 总黄酮含量测定
21211 标准曲线的制备: 精密称取 120 ℃干燥恒重
的芦丁对照品 10 m g, 加 85% 乙醇溶解, 定容至 50
mL 量瓶中, 摇匀, 制成 012 m gömL 的对照品溶液。
分别取该溶液 010, 012, 015, 110, 210, 310, 410 mL
于 10 mL 量瓶中, 加 5% 亚硝酸钠 014 mL , 放置 6
m in 后, 加 10% 硝酸铝 014 mL , 放置 6 m in, 再加
4% 氢氧化钠 4 mL , 加水至刻度, 摇匀, 放置 15 m in,
进行全波长扫描, 在 510 nm 处均有最大吸收。以
510 nm 处吸光度值为横坐标, 以样品浓度为纵坐标
计算得直线方程 C = 79123A - 01459, r= 01998 1。
在 40~ 800 ΛgömL 有良好的线性关系。
21212 精密度试验: 精密吸取对照品溶液 110 mL
(6 份) , 按 21211 项的方法测定, R SD = 211%。
21213 稳定性试验: 取同一供试品液在 6, 12, 24,
36, 48 h 不同时间测定吸光度值。结果表明, R SD =
1189% (n= 5) , 吸光度值在 48 h 内基本保持不变。
21214 重现性试验: 取样品 5 份, 依样品含量测定
步骤重复测定, R SD = 110%。
21215 回收率试验: 取已知总黄酮含量的供试品溶
液 015 mL 于 10 mL 量瓶中, 再加入 012 m gömL 的
对照品溶液 015 mL , 依法测定, 平均回收率为
99103% , R SD = 1111% (n= 6)。
21216 样品含量测定: 精密吸取供试品液É 110
mL , 置 10 mL 量瓶中, 按 21211 项的方法显色测定。
通过标准曲线, 计算出样品总黄酮的含量, 见表 1。
213 多糖含量测定
21311 标准曲线制备: 精确称取干燥恒重的葡萄糖
2512 m g, 加适量水溶解, 转移至250 mL 量瓶中, 加水
至刻度, 摇匀, 配成 10018 ΛgömL 葡萄糖溶液。精确量
取葡萄糖溶液 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017 mL
置干燥试管中, 分别加水使成 110 mL , 再分别加入
5% 苯酚溶液 116 mL , 摇匀, 然后加浓 H 2SO 4 710
mL , 充分摇匀, 室温放置 25 m in, 同时做一空白。进行
全波长扫描, 在 490 nm 处均有最大吸收。以 490 nm
处吸光度为纵坐标, 以样品浓度为横坐标绘制标准曲
线, 回归方程: A = 01056 54C + 5147× 10- 4, r =
01999 8。在 10~ 70 ΛgömL 有良好的线性关系。
21312 精密度试验: 精密吸取对照品溶液 015 mL
(6 份) , 按 21311 项的方法测定吸光度值, 求得
R SD = 0189% (n= 6)。
21313 稳定性试验: 取同一供试品溶液在 6, 12,
24, 36, 48 m in 不同时间测定吸光度值。结果表明,
R SD = 2103% (n = 5) , 吸光度值在 48 m in 内基本
保持不变。
21314 回收率试验: 精密称取党参样粉 0115 g, 加
入精制葡萄糖 5 m g, 按供试品液制备和葡萄糖含量
测定方法操作, 测得葡萄糖平均回收率为 98178% ,
R SD = 0183% (n= 6)。
21315 重现性和样品含量测定: 精密吸取供试品液Ê 1 mL , 定量稀释 10 倍后, 再精密吸取稀释液 1
mL , 按 21311 项方法测吸光度值, 按下式计算多糖含
量: 多糖含量% = CD föW ×100。式中: C 为样品溶液
的葡萄糖的浓度 (ΛgömL ) ,D 为样品溶液稀释倍数, f
为换算因素,W 为样品质量 (Λg)。求得多糖平均含量
为 541352% , R SD = 1105% (n= 5) , 见表 1。
表 1 新疆党参中总黄酮及多糖的含量 (n= 5)
Table 1 D eterm ination of f lavone and
polysacchar ide in samples (n= 5)
检测项目 含量ö% RSD ö%
总黄酮 0. 220 1. 642
多 糖 54. 352 1. 051
3 讨论
  从提取方法和测定结果来看, 超声技术应用于
植物细胞破壁, 有效地提高了收率。多糖含量由传统
方法的 50101% 提高到 54135%。曾经采用微波技术
从新疆党参中提取多糖, 多糖提取率不如超声法。提
取时间比传统方法可缩短 4 倍, 节省原料, 操作步骤
简便。提取全过程无须加热, 避免了多糖和黄酮的分
解。超声波破碎过程是一个物理过程, 浸提过程中无
化学反应, 被浸提的生物活性物质在一定时间内保持
不变, 该法对于某些热敏成分的提取最为合适。因此,
采用超声法提取黄酮和多糖, 可避免因结构改变而使
后续的结构分析及药理活性研究产生错误结论。所用
仪器简单, 操作方便, 且自动化程度高, 便于大规模工
业生产。以超声提取黄酮和多糖的最优化条件及其结
构组成和药理活性有待进一步研究。
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