全 文 ：中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第11期2005年11月· 691·
的大鼠胃溃疡均有明显的保护作用，不同之处在于
新健胃片0．50g／kg可加快小鼠胃排空，这对改善
胃胀明显有益。新健胃片的促进胃排空作用可能与
其中的多种中药成分密切相关。
体外实验表明，新健胃片具有明显的中和胃酸
作用，且有明显的剂量相关性，1mg新健胃片可中
和胃液约0．1mL，其中和作用成分为NaHCO。，新
健胃片对胃酸的中和作用可快速升高胃液pH值，
改善由于胃酸过多或胃酸刺激引起的胃部不适。本
实验中所观察到的新健胃片减少胃酸总量的作用实
质为对胃酸的中和作用，丽非抑制胃酸的分泌，这与
传统的胃酸抑制剂明显不同。
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小白菊内酯诱导人肝癌BEL一7402细胞凋亡的实验研究
宋晓凯，张雯
(天津理工大学生物与化学工程学院，天津300191)
小白菊内酯属于倍半萜内酯，是墨西哥、印度药
用植物的活性成分，也是欧洲小白菊这一常用草药
的活性成分[1]，主要用于治疗偏头痛、炎症和各种肿
瘤。zo世纪90年代末，中国学者从中国特有药用植
物观光术树皮中分离得到这一抗肿瘤活性物质，并
且经过体外抑瘤实验证实，小白菊内酯(10．0pg／
mL)对人肝癌细胞的体外抑制率为67．17％，可见
其对人肝癌细胞抑制作用比较明显[z]。近年来，随着
医学技术和分子生物学技术的发展及各种检测手段
的出现，发现小白菊内酯可抑制NF—KB的激活o“]。
诱导细胞凋亡口]，产生细胞毒作用[5“]。但有关从分
子生物学水平研究小白菊内酯对人肝癌细胞的作用
机制还未见报道。本研究旨在探讨小白菊内酯对体
外培养的人肝癌BEL一7402细胞生长的影响及作用
机制，为其应用于肝癌的化学预防和治疗提供实验
和理论依据。
1材料与方法
1．1 药物、主要试剂和设备：小白菊内酯(质量分
数>99％，HPLC)购自上海康成生物工程有限公
司，用三蒸水配制成10．0#g／#L储存液。MTT，每
瓶250mg，由Sigma公司分装；RPMI一1640培养基
购自Gibco公司f胎牛血清购自中国科学院血液病
研究所；二甲基亚砜(DMSO)购自上海光铧科技有
限公司(上海新华化工厂)；PBS(磷酸盐缓冲液)
购自北京中山生物公司}溴化乙锭(EB)由Sigma
公司分装}TE缓冲液购自上海基康生物技术有限
公司；RNase购自上海贝塔生物制品有限公司；蛋
白酶K购自北京拜尔迪生物技术有限公司；琼脂糖
购自北京邦定生物医学公司；Giemsa染料购自Flu—
ka公司；氯仿、异戊醇、饱和酚、无水乙醇、甲醇均为
分析纯。环磷酰胺购自恒瑞医药股份有限公司。倒置
式生物显微镜(NikonECLIPSETE300)；5％二氧
化碳培养箱(ThermoFormaMODEL3111)l自动
酶标读数仪(TACANSPECTRAI)}三恒电泳仪
DYY一ⅡB型(BGxP一垂5×20)；凝胶成像系统。
1．2细胞株及培养二人肝癌BEL一7402细胞株由北
京医科大学实验中心细胞库提供。用RPMI一1640
培养液(含10蹦胎牛血清)，在37℃、5％co。孵箱
中常规培养。取对数生长期的细胞用于实验。
1．3 细胞增殖抑制作用的测定：采用MTT比色
法，将对数生长期的肝癌细胞制备成浓度为1×
10s／mL细胞悬液，接种于96孔培养板内，每孔200
PL，于37℃、5％CO。、饱和湿度的培养箱中培养，
待细胞生长一定浓度后换上含有不同质量浓度药物
的培养液，各设6个复孔，对照组不加药，继续培养
48h，加入0．5％MTT(5．0mg／mL)，每孔20pL，
孵育4h，再加入DMSO100．0,uL，轻微振荡使紫
蓝色沉淀溶解，用酶标仪测定492nm波长处的吸
光度(A)值，计算抑制率。
抑制率=(1一A**／A*H)×100％
鉴銎晏瞽：奖霉等公臻科学基金资助项目(。336。7611)，天津市高校科技发展基金项目(2。。lYYl5)
作者筒介：宋晓凯，男，教授，药学博士．碗士生导师。Tel}(022)23679245F＆x：(022)23679249E—mail：sxk581214@eyou．com
万方数据
·1692· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第11期2005年11月
1．4倒置显微镜观察：细胞培养同1．3项，加小自菊
内酯(15．0／19／mL)培养48h，于倒置显微镜下观察
培养瓶内加药组和未加药组的细胞形态变化情况。
1．5 Giemsa染色：96孔板培养细胞同1．3项。小
白菊内酯(15．0／zg／ml。)处理细胞。染料液配置：
Giemsa染料0．5g，甘油22．0mL，甲醇33．0mL
混合，静置于56℃恒温水浴中12h，备用。取染料
液5．0ml。，加人PBS50．0mL，混匀。将棍合液加
人96孔板内，固定30min，镜下观察，PBS分色。
1．6 DNA琼脂糖凝胶电泳：小白菊内酯(7．5、
15．0pg／mI。)及环磷酰胺(16．7mg／mI，)作用
BEL一7402细胞一定时间后，收集细胞，用PBS洗涤
数次，加入0．5mL细胞裂解液、10．0止蛋白酶K
(20．0mg／mI。)置37℃水浴中过夜后，用等体积
的饱和酚萃取，10000r／min离心5m{n，取上层，加
入等体积的氯仿一异戊醇(24：1)除蛋白，1000r／
rain离心10min，取上清液，加入3倍体积的无水乙
醇、1／10体积(3．0mol／L)的醋酸钠，置一20℃
冰箱中20min后取出，100 0r／mln离心15min，
将沉淀用70．0％乙醇洗涤2次，空气干燥。加入
200．0,uLTE缓冲液溶解，加RNase2．0“L(10．0
mg／mL)反应30rain(37℃)。取上述样品10．0
pL。在2．o％琼脂糖凝胶电泳，75V电泳1．5h，
摄像。
1．7统计学处理：采用线性相关分析，数据均以
；±s表示。
2结果
2．1对细胞增殖的影响：不同质量浓度小自菊内酯
作用细胞后，细胞增殖受到不同程度的抑制，这一抑
制作用随小白菊内酯质量浓度的升高而增强；组间
两德比较差异均非常显著(P
TaMe1 InhibitionofparthenolideOHBEL一7402
cellsproliferation(Ⅳ一6)
2．2形态学观察
2．2．1倒置显微镜观察：正常组可见细胞生长状态
良好，细胞呈多边形；加小白菊内酯(15．0pg／mL)
后，细胞形态发生变化：细胞体积减小，呈圆形，细胞
核浓缩，见图1。
田1小白菊内聋对BEL一7402细胞生长的影响
Fig．1Effectofparthenollde0nBEL·7402cellgrowth
2．2．2Giemsa染色结果：小白菊内酯(15．0pg／
ml。)作用于细胞后可见凋亡小体出现，呈蓝紫色，
散落在细胞内外；阳性表达细胞呈浅蓝色。
2．3 DNA琼脂糖凝胶电泳：
BEL一7402细胞经7．5、15．0
pg／mL小自菊内酯处理48h
后，出现典型的DNA梯形条
带，而环磷酰胺组细胞也出现
凋亡的梯形条带，见图2。
3讨论
本实验发现小白菊内酯
对BEL一7402细胞的抑制作
1_环磷酰胺(16-7“97用随质量浓度增大而增强，但
m。，L^)，0；篮!三：随药物质量浓度继续增太，其
对暇 抑制率开始下降；在药物的高
1Cytox一(167rag／mL)质量浓度范围内，抑制率基本
2·3-parthenolide(7·5·15保持恒定。可见小白菊内酯能
pg／mL)4。““⋯”。明显抑制体外培养的BEL一
圈2 88。_740：磐7402细胞的生长，在低质量
=瓢电泳浓度范围内其抑制作用具有
Fig．2DNAgelelectro-量效关系。
phorogram。f
本实验中经倒置显微镜
BEL一7402cells可见细胞体积缩小、核固缩；
经Giemsa染色观察到凋亡小
体的形成，典型的细胞凋亡形态学变化，此结果表明
小白菊内酯可诱导人肝癌细胞凋亡。DNA琼脂糖凝
胶电泳显示，小白菊内酯作用细胞，使细胞DNA损
伤，出现凋亡细胞的特征性D¨A梯状条带，进一步
证实了小白菊内酯诱导人肝癌BEL一7402细胞凋亡。
综上所述，小白菊内酯可抑制人肝癌细胞株
BEL一7402生长，并具有量效关系；亦能诱导人肝癌
细胞的凋亡。诱导细胞凋亡可能是其抑制细胞增殖
的机制，这可能是其防癌抗癌作用的主要机制之一。
但其诱导凋亡的机制值得深入研究。
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第11期2005年11月· 693·
致谢；天津中医学院中《实验室及范英昌等老
师的大力协助。
Rel锄％mf
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人参花蕾皂苷对脑缺血一再灌注损伤大鼠的抗氧化作用及其机制
张丽君1，吕文伟2，王志2，金采日3，孙连坤2。
(1．延边大学医学院附属医院心内科，吉林延吉133000；2．吉林大学基础医学院．
吉林长春130021‘3．吉林大学化学院，吉林长春130021)
有研究表明脑缺血一再灌注损伤的发病机制中
氧自由基起着重要的作用o】。人参花和花蕾平时被
人们作为有益健康的中药加入到茶、洗发露中使用，
而不作为药物来使用。Yahara等[21在干燥的高丽参
的花和花蕾混合物中分离出20(S)人参皂苷Rd、Re
和Rg。，但它们的药理作用还不清楚。本实验探讨本
校化学教研室提取的人参花营皂苷(flower—buds
ginsenoside，FBG)是否具有减轻大鼠脑淤血一再灌
注损伤的作用，并通过观察脑皮质中脂质过氧化物
丙=醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)量的变
化及超氧化物歧化酶(sOD)活性和mRNA基因
的表达探讨其作用机制。
1材料
1．1试剂和药品：谷胱甘肽和GSH购于Sigma公
司。TBA、TCA和DTND购于Wako公司。人参花
营皂苷[FBG，古有20(s)一人参皂苷Rd7．2％、20
(s)一人参皂苷Re39．1％、20(Js)一人参皂苷Rg-
3．3％]由吉林大学化学中心提供。GSH、MDA和
soD检测试荆盒均由南京建成生物工程研究所
提供。
1．2实验动物：健康Wistar大鼠，体重(25士10)
g，雌雄不拘，由吉林大学实验动物中心提供，合格证
号SCXK一(吉)2003—2004。
2方法
2．1分组、给药及造模：大鼠32只，随机分为对照
组，模型组，FBG低、高剂量组，每组8只。FBG组
于造模前分别按25、50mg／kgip给予生理盐水溶
解的FBG，每天1次，持续7d。模型组和对照组大
鼠ip等量生理盐水。模型组和FBG组大鼠通过改
良的四血管结扎法啪进行10rain短暂脑缺血处理。
太鼠用50mg／kg戊巴比妥钠ip麻醉，椎动脉用电
烙术进行永久性封闭，颈动脉用尼龙和聚乙烯管制
的扣子结扎，尼龙和聚乙烯管制的扣子可通过细小
的皮肤切口进行放松和收紧。此后用30％O：和
70％Nz混合的三氟漠氯乙烷进行吸人性麻醉。左、
右侧颈动脉被同时收紧10rain，即大鼠缺血10rain
后，再放松，使脑动脉血流进行4h再灌注，观察大
鼠死亡率。另取32只大鼠，分组，造模及给药方法
同上，脑动脉血流再灌注1h后，过量戊巴比妥钠麻
醉处死大鼠，断头取脑皮质，冻于液氟中备用。
2．2脑皮质中MDA和GsH水平的测定：脑皮质
组织冰浴匀浆，分别根据试剂盒方法测定脑皮质匀
浆中GSH和MDA的水平、SOD活性及匀浆液中
总蛋白水平。
紫謇昌荠潆等署乞臻3一)，女。吉韩省九台市A，主精匿师，研究方向为心血管疾病诊断厦治疗。Td：(。4∞)266。224
*通讯作者孙连坤Telt(0431)5619483
万方数据
小白菊内酯诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡的实验研究
作者： 宋晓凯， 张雯
作者单位： 天津理工大学生物与化学工程学院,天津,300191
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(11)
被引用次数： 1次
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大学学报2009,43(1)
引证文献(1条)
1.张雯.宋晓凯 小白菊内酯对人肝癌BEL-7402细胞p53蛋白和增殖细胞核抗原表达的影响[期刊论文]-中草药
2005(12)
本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200511038.aspx