全 文 ：2. 4　精密度试验:取供试品溶液按上述条件连续进
样 5次 ,橙皮苷峰面积 RSD为 1. 2% 。
2. 5　稳定性试验:取供试品溶液按上述条件分别在
0, 1, 2, 3, 4, 5 h进样 ,橙皮苷峰面积 RSD为 1. 4% ,
结果表明供试品溶液在 5 h内稳定。
2. 6　空白干扰试验:取供试品溶液、对照品溶液、阴
性对照液 (按处方工艺制成的不含陈皮的样品供试
液 )按上述条件测定 ,结果表明供试品溶液与对照品
溶液具有相同保留时间的色谱峰 ,阴性对照液在此
位置处无色谱峰。见图 1。
* -橙皮苷
* -h esperidin
图 1　橙皮苷对照品 ( A)、金宝片供试品 (B)和阴性对照 (C)的 HPLC色谱图
Fig. 1　 HPLC chromatograms of hesperidin ( A) , Jinbao Tablet sample (B) and negative sample (C)
2. 7　重现性试验:取同一批号样品 ,测定 5次 ,橙皮
苷含量为 0. 278 mg /g , RSD为 1. 3% ,结果表明本
方法重现性良好。
2. 8　回收率试验:精密称取含量为 0. 278 mg /g的
样品约 1. 5 g,精密加入 0. 100 3 mg /mL的橙皮苷
对照品溶液 5 mL,蒸干 ,加水 10 mL,按“样品测定”
项下方法操作 ,结果平均回收率为 96. 71% , RSD为
0. 66% (n= 5)。
2. 9　样品测定:共测定了 3批样品 ,每批取样 2份 ,
测定结果见表 1。
表 1　金宝片中橙皮苷的含量测定结果
Table 1　 Content of hesperidin in Jinbao Tablet (n= 2)
批　号 橙皮苷含量 / ( mg· 片 - 1)
990301 0. 089
990302 0. 090
990303 0. 088
3　讨论
　　本制剂由 10味中药组成 ,干扰成分较多 ,为了
使橙皮苷与其他成分达到有效分离 ,提取时采用乙
醚前处理 ,除去一部分脂溶性杂质 ,然后根据橙皮苷
的性质 ,采用中等极性溶剂醋酸乙酯提取。
朝鲜淫羊藿多糖的含量测定
陈鸿英 1 ,朱永智 1 ,吴乃居 1 ,孙　燕 2⒇
( 1. 天津市医药科学研究所 ,天津　 300070; 2. 中国医学科学院 中国协和医科大学肿瘤研究所肿瘤医院 ,北京　 100021)
　　淫羊藿为小檗科植物朝鲜淫羊藿 Epimedium
koreanum Nakai的干燥地上部分。 可补肾壮阳 ,祛
风湿 ,并有镇咳、祛痰、平喘、抑菌等作用 [1 ]。 药理实
验显示淫羊藿多糖具有明显的促免疫作用 ,是一种
很有发展前途的生物调节剂。本实验采用苯酚 -硫酸
法、蒽酮 -硫酸法对淫羊藿多糖进行含量测定。
1　试剂与仪器
淫羊藿药材由本所植物室张永升研究员鉴定为
朝鲜淫羊藿 E. koreanum Nakai的干燥地上部分 ;
透析袋 (华美生物工程公司 ) ,其余试剂均为分析纯。
岛津 UV— 260型紫外分光光度计。
2　实验部分
2. 1　多糖的分离与纯化: 取淫羊藿药材 1 kg ,加
水 ,加热提取 3次 ,滤过 ,合并提取液 ,浓缩成浸膏。
加入 95%乙醇 ,使含醇量达 70% ,搅匀 ,放置 12 h
滤过得沉淀。将沉淀溶于蒸馏水中 ,搅匀 ,放置 4 h,
滤过 ,滤液浓缩 ,加入 95%乙醇 ,再重复一次 ,得沉
淀 ,将其溶于蒸馏水中 ,搅匀 ,放置 4 h,滤过 ,滤液
减压浓缩 ,再向滤液中加入 95%乙醇 ,使含醇量达
85% ,搅匀 ,放置 12 h。抽滤得沉淀 ,即得总多糖。取
·810· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 9期 2003年 9月
⒇ 收稿日期: 2002-12-24
总多糖经 Sevag法除蛋白多次。 然后水层逆向流水
透析 24 h,透析袋内液体浓缩 ,加入 95%乙醇使之
沉淀 ,取沉淀溶于蒸馏水中 ,转入透析袋 ,再将透析
袋浸入蒸馏水中透析 36 h,透析袋内液体浓缩 ,冷
冻干燥 ,得浅棕色淫羊藿多糖粉末。
2. 2　苯酚-硫酸法 [2 ]
2. 2. 1　苯酚试剂的制备:取苯酚 200 g ,加铝片 0. 2
g和碳酸氢钠 0. 1 g,蒸馏 ,收集 182℃馏份。称取 10
g ,加水 150 g混匀 ,使溶解 ,即得。置棕色瓶中 ,放冰
箱中备用。
2. 2. 2　标准曲线的制备:精密称取 105℃干燥至恒
重的葡萄糖对照品 100. 12 mg ,置 100 mL量瓶中 ,
加水适量使溶解 ,稀释至刻度 ,摇匀。精密吸取 0. 5,
1. 0, 1. 5, 2. 0, 2. 5, 3. 0, 3. 5 m L对照品溶液 ,分别置
50 m L量瓶中 ,加水至刻度 ,摇匀。 精密量取上述各
浓度溶液 2 mL,各加入苯酚试液 1. 0 mL,摇匀 ,迅
速加入浓硫酸 5. 0 mL,迅速摇匀 ,放置 5 min,置沸
水浴中加热 15 min,取出 ,冷水迅速冷却至室温 ;精
密量取蒸馏水 1 mL,同样操作 ,作空白对照 ,按分光
光度法在 490 nm波长处测定吸光度。经计算得出
回归方程 A= 0. 007 4X+ 0. 003 4, r= 0. 999 8,线性
范围: 0. 01～ 0. 07 mg /mL。
2. 2. 3　精密度试验:同一样品溶液 ,重复测定吸光
度 5次 , RSD为 0. 81% 。
2. 2. 4　稳定性试验:取同一样品溶液 ,按样品测定
方法操作 ,每隔 0. 5 h测定 1次吸光度。结果 4 h内
测定值不变。
2. 2. 5　加样回收率试验: 精密吸取样品液 0. 5 mL
( 5份 ) ,分别精密加入浓度不同的葡萄糖对照品溶
液 0. 5 mL,按样品测定方法测定吸光度 ,回收率平
均值为 97. 89% , RSD为 1. 64% (n= 3)。
2. 2. 6　样品的测定: 精密称取样品 100 mg ,加水溶
解 ,定容至 100 mL量瓶中 ,摇匀。精密量取 1 mL,
置 50 mL量瓶中 ,加水至刻度 ,摇匀。精密量取上述
溶液 2 mL,按标准曲线项下操作 ,以蒸馏水为空白
对照 ,测定吸光度。经计算淫羊藿多糖的平均含量为
31. 11% , RSD为 1. 21% (n= 3)。
2. 3　蒽酮-硫酸法 [2 ]
2. 3. 1　蒽酮试剂的配制:称取 0. 2 g蒽酮溶解于
100 mL硫酸中 ,新鲜配置使用。
2. 3. 2　标准曲线制备: 精密称取 105℃干燥至恒重
的葡萄糖对照品 50. 01 mg ,置 100 mL量瓶中 ,加水
适量使溶解 ,稀释至刻度 ,摇匀。精密吸取 0. 5, 1. 0,
2. 0, 3. 0, 4. 0 mL,分别置 50 mL量瓶中 ,加水至刻
度 ,摇匀。精密量取上述溶液 1 mL,再加入 4 mL蒽
酮试剂 ,迅速置于冰水浴中冷却 ,各管加完后一起浸
于沸水浴中 ,自水浴重新煮沸起 10 min后取出 ,自
来水冷却 ,室温放 10 min,以同样处理的蒸馏水为
空白 ,于 620 nm处比色 ,计算回归方程为 Y =
14. 206 1X- 0. 511 1, r= 0. 999 9。
2. 3. 3　精密度试验: 同一样品液 ,重复测定吸光度
5次 , RSD为 0. 77%。
2. 3. 4　稳定性试验: 取同一样品溶液 ,按样品测定
方法操作 ,每隔 0. 5 h测定 1次吸光度。结果表明 4
h内测定值不变。
2. 3. 5　加样回收率试验: 精密吸取样品液 0. 5 mL
( 5份 ) ,分别精密加入浓度不同的葡萄糖对照品溶
液 0. 5 mL,按样品测定方法测定吸光度 ,计算得回
收率为 96. 30% , RSD为 1. 37% (n= 3)。
2. 3. 6　样品的测定: 取 100 mg样品置 100 mL量
瓶中 ,加水定容。精密吸取 1 mL,置 50 mL量瓶中 ,
加水定容。精密量取上述溶液 1 mL,其余操作同上 ,
测定吸光度。 经计算淫羊霍多糖的平均含量为
25. 06% , RSD为 1. 48% (n= 3)。
3　讨论
　　本实验结果表明苯酚-硫酸法、蒽酮 -硫酸法测
定淫羊藿多糖的含量分别为 31. 11%和 25. 06% ,两
种测定方法结果相差较大 ,可能是因为淫羊藿多糖
为杂多糖 ,而本实验均以葡萄糖为对照测定 ,测定值
与真值有一定差距。 有实验表明 [3 ] ,对杂多糖而言 ,
应按其单糖比配制成对照品溶液来进行测定 ,得到
的结果较稳定。 故本实验含量测定方法有待进一步
研究。
References:
[1 ]　 Jiangsu New Medical College. Dictionary of Chinese Materia
Medica (中药大辞典 ) [M ] . Sh angh ai: Shanghai People s
Publi shing House, 1977.
[2 ]　 Zhang W J. B iochem ical S tud y Technology of Complex
Polysaccharides (复合多糖生化研究技术 ) [M ] . Shanghai:
Sh angh ai Science and Techn ology Pub li sh ers , 1987.
[3 ]　 Lin Y, Wu M, Wu W, et al . Study on th e correctnes s of the
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·811·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 9期 2003年 9月