全 文 ：RP-HPLC法测定梅花点舌丸中脂蟾毒配基、华蟾毒配基的含量
李亚芳 1 ,胡晓炜 2⒇
( 1. 杭州市第一人民医院 ,浙江 杭州　 310006; 2. 杭州市药品检验所 ,浙江 杭州　 310014)
摘　要: 目的　建立梅花点舌丸中脂蟾毒配基、华蟾毒配基的含量测定方法。 方法　采用反相高效液相色谱法 ,使
用 C18柱 ,乙腈 -0. 5% KH2PO4溶液 ( 50∶ 50)为流动相 ,检测波长: 296 nm。结果　此方法线性关系良好 ,脂蟾毒配
基的平均加样回收率为 97. 40% , RSD为 2. 22%。华蟾毒配基的平均加样回收率为 97. 78% , RSD为 2. 63%。结论
方法简便、可靠 ,分离度较好 ,结果稳定 ,可用于梅花点舌丸的质量控制。
关键词: 梅花点舌丸 ;脂蟾毒配基 ;华蟾毒配基 ; RP-HPLC
中图分类号: R286. 02　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 02 0125 02
Determination of resibufogenin and cinobufagin in
MEIHUA DIANSHE PILL
*
by RP-HPLC
LI Ya-fang1 , HU Xiao-w ei2
( 1. Fir st People s Hospital o f Hang zhou, Hang zhou Zh ejiang 310006, China;
2. Hang zhou Institute fo r Drug Contro l, Hang zhou Zhejiang 310014, China )
Key words: M EIHUA DIAN SHE PILL; resibufog enin; cinobufagin; RP-HPLC
* MEIHUA DIAN SHE PILL is a Chinese herbal preparation wi th 14 kinds of Chinese ma teria
medica, such a s Calculus Bov is , Margarita, Moschus , a nd Venenum Bufonis etc. . It has the function of
clea ring aw ay heat and toxi t ma terial, and relieving sw elling and allevia ting pain.
　　梅花点舌丸是由牛黄、珍珠、麝香、蟾酥等 14味
药材加工制成的复方制剂 ,具有清热解毒 ,消肿止痛
的功效 ,用于疔疮痈肿初起 ,咽喉、牙龈肿痛 ,口舌生
疮。该方收载于《中国药典》 2000年版一部 ,但药典
中对其含量测定未作规定。蟾酥为方中重要药味 ,其
中脂蟾毒配基、华蟾毒配基为重要组成成分。本文以
脂蟾毒配基、华蟾毒配基为指标 ,建立了梅花点舌丸
中脂蟾毒配基、华蟾毒配基的 HPLC测定法 ,为该
中成药的质量控制提供客观的定量评价方法。
1　仪器与材料
Agi lent 1100高效液相色谱仪 , UPPER色谱工
作站 ; Met tler-Toledo AG-204电子天平。脂蟾毒配
基、华蟾毒配基对照品 (中国药品生物制品检定所 )。
乙腈为色谱纯 ,水为重蒸水 ,其它试验均为分析纯。
梅花点舌丸由杭州胡庆余堂药业有限公司提供 ,批
号为 010406, 010409, 010410。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件: 色谱柱: Kromasi l C18 ( 4. 6 mm×
250 mm , 5μm) ,柱温: 室温 25℃ ;流动相: 乙腈 -
0. 5% KH2 PO4溶液 ( 50∶ 50) ,流速: 1. 0 mL /min,
检测波长: 296 nm。进样量均为 20μL。色谱图见图 1。
1-华蟾毒配基　　 2-脂蟾毒配基
A-样品　 B-对照品　 C-空白对照
图 1　梅花点舌丸 HPLC图谱
2. 2　标准曲线的制备: 精密称取脂蟾毒配基
10. 7 mg,加甲醇定容至 10 m L,得对照品贮备液
( 1. 07 mg /mL)。精密吸取此溶液 50, 100, 200, 300,
400μL置于 5 m L量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀
即得。以对照品浓度对峰面积值作图 ,脂蟾毒配基线
性回归方程为 A= 16 156+ 9 488. 5C , r= 0. 999 9;
结果表明脂蟾毒配基呈良好线性 ,线性范围为
10. 7～ 85. 6μg /mL。
精密称取华蟾毒配基 10. 7 mg ,加甲醇定容至
10 mL,得对照品贮备液 ( 1. 07 mg /mL)。 精密吸取
·125·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 2期
⒇ 收稿日期: 2001-07-10作者简介:李亚芳 ( 1975-) ,女 ,浙江杭州人 ,药师 ,毕业于浙江医科大学 ,主要从事药事管理及药品质量管理工作。
Tel: 0571-87065701-3301
此溶液 100, 200, 300, 400, 500μL置于 5 mL量瓶
中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀即得。以对照品浓度对
峰面积平均值作图 ,华蟾毒配基线性回归方程为
A= - 10 273. 9+ 9 658. 6C , r= 0. 999 8;结果表明
华蟾毒配基呈良好线性 ,线性范围为 21. 4～ 107. 0
μg /mL。
2. 3　空白试验:按《中国药典》 2000年版一部梅花
点舌丸下方法制备缺蟾酥对照样品并依拟定色谱条
件测定 ,结果在 HPLC图谱上脂蟾毒配基、华蟾毒
配基相应位置无峰 ,表明其它组分对测定无干扰
(图 1)。
2. 4　样品测定: 取梅花点舌丸 10丸 ,研细 ,取约
0. 15 g ,精密称定 ,加氯仿 100 mL,索氏提取 6 h,氯
仿液蒸干 ,残渣加甲醇溶解并移入 10 mL量瓶中 ,加
甲醇至刻度 ,摇匀即得。 过 0. 45μm微孔滤膜后 ,进
样。测定结果见表 1。
表 1　脂蟾毒配基、华蟾毒配基的测定结果 (n= 5)
批号 脂蟾毒配基 华蟾毒配基含量 ( mg /g) RSD(% ) 含量 ( mg /g ) R SD (% )
010406 3. 666 4 1. 52 3. 531 7 1. 50
010409 3. 721 9 0. 56 3. 539 0 0. 81
010410 3. 895 0 0. 92 3. 674 6 0. 44
2. 5　精密度考察:取同一浓度对照品连续 8次进
样 ,以峰面积计算 ,脂蟾毒配基 RSD为 0. 44% ;华
蟾毒配基 RSD为 0. 11% 。
2. 6　稳定性试验:取同一样品 ,每隔 1 h进样 1次 ,
结果样品中脂蟾毒配基 RSD为 0. 74% ;华蟾毒配
基 RSD为 0. 72% (n= 5)。取同一样品 ,每隔一天进
样 1次 ,结果样品中脂蟾毒配基 RSD为 0. 97% ;华
蟾毒配基 RSD为 0. 69% (n= 3)。
2. 7　重复性试验:取同一批号梅花点舌丸各 5份 ,
按样品测定项下测定 ,结果样品中脂蟾毒配基 RSD
为 1. 52% ;华蟾毒配基 RSD为 1. 50% (n= 5)。
2. 8　加样回收率试验:精密称取已知含量的梅花点
舌丸 (批号 010406)内容物粉末 5份 ,加入脂蟾毒配
基、华蟾毒配基各适量 ,按样品测定项下测定。测得
脂蟾毒配基的平均加样回收率为 97. 40% , RSD为
2. 22% ;华蟾毒配基的平均加样回收率为 97. 78% ,
RSD为 2. 63% 。
3　讨论
3. 1　反相高效液相色谱法测定脂蟾毒配基、华蟾毒
配基 ,脂蟾毒配基保留时间为 11 min,塔板数大于
8 000;华蟾蟾毒配基保留时间为 10 min,塔板数大
于 7 000。经空白实验 (处方中无蟾酥 )证明 ,在脂蟾
毒配基、华蟾毒配基相应位置上无峰出现 ,表明空白
样品无干扰。
3. 2　样品用氯仿分别进行 4, 6, 7, 8 h的回流提取 ,
得到的样品溶液经测定 ,提取 6 h后结果基本稳定。
表明 6 h已提取完全。
3. 3　根据参考文献 [1, 2 ] ,试验了不同的流动相 ,结果
以乙腈-0. 5% KH2 PO4溶液 ( 50∶ 50)分离度较好、
保留时间适宜。
参考文献:
[1 ]　陈发奎 . 常用中草药有效成分含量测定 [M ]. 北京:人民卫生
出版社 , 1997.
[2 ]　中国药典 [ S] . 2000年版 .一部 .
不同产地的地黄中梓醇含量比较
李更生 ,刘长河 ,王慧森 ,张留记⒇
(河南省中医药研究院 ,河南 郑州　 450004)
摘　要: 目的　采用薄层扫描法测定了不同产地的地黄中梓醇的含量。 方法　以氯仿 -甲醇 -水 ( 7∶ 4∶ 0. 5)为展开
剂 , 10%硫酸-乙醇为显示剂 , 413 nm为扫描波长 ,反射法扫描。 结果　河南温县产地黄中梓醇含量较高 ,山东嘉祥
产地黄中梓醇含量较低。 结论　怀地黄作为道地药材有其物质基础。
关键词: 地黄 ;梓醇 ;薄层扫描法
中图分类号: R286. 02　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 02 0126 03
·126· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 2期
⒇ 收稿日期: 2001-07-10基金项目: “九五”国家攻关课题 (No. 969030204)作者简介:李更生 ( 1962-) ,男 ,河南信阳人 ,硕士 ,副研究员 , 1994年获北京医科大学硕士学位 ,主要从事天然药物化学、中药分析的研究 ,主持和参加多项国家局、省自然基金项目 ,获国家中医药局科技进步二等奖 1项、省科技进步二等奖 2项、省中医药科技进步一等奖 1项 ,发表学术论文 20余篇。 Tel: 0371-6336574　 E-mail: Lgsh n@ sohu. com