全 文 ：蟾酥中３种蟾毒配基组合物的表观溶解度和
表观油水分配系数的测定
刘 丹，奉建芳
（上海医药工业研究院 制剂部，上海 ２００４３７）
［摘要］ 目的：测定蟾酥中３种蟾毒配基组合物的表观溶解度和表观油水分配系数。方法：采用高效液相色
谱法测定了蟾酥中３种蟾毒配基组合物中ＲＢＧ，ＣＢＧ，ＢＬ的表观溶解度，采用摇瓶法测定了 ＲＢＧ，ＣＢＧ，ＢＬ的表观
油水分配系数。结果：３７℃，ｐＨ７０时，蟾酥中３种蟾毒配基组合物中ＲＢＧ，ＣＢＧ，ＢＬ的表观溶解度均为最大值，分
别是７６２９，５１８５，３２７６μｇ·ｍＬ－１，总溶解度为１６０９μｇ·ｍＬ－１。在偏酸和偏碱性条件下，三者均有不同程度的
降解。ＲＢＧ，ＣＢＧ，ＢＬ在不同ｐＨ条件下各自ｌｏｇＰ值差别不大，ｐＨ对ＲＢＧ，ＣＢＧ，ＢＬ的油水分配系数影响不显著，
三者的油水分配系数均较大，为典型的疏水性产物，三者的疏水性大小顺序为ＲＢＧ＞ＢＬ＞ＣＢＧ。结论：蟾酥中３种
蟾毒配基组合物中ＲＢＧ，ＣＢＧ，ＢＬ的水溶性差，疏水性极强，应考虑加入表面活性剂增溶，以利于注射制剂的成型。
［关键词］ 蟾酥；蟾毒配基；脂蟾毒配基（ＲＢＧ）；华蟾毒精（ＣＢＧ）；蟾毒灵（ＢＬ）；表观溶解度；表观油水分配系
数；高效液相色谱法
［中图分类号］Ｒ２８４．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）１１１２５６０４
［收稿日期］ ２００７１１２１
［通讯作者］ 刘丹，Ｔｅｌ：（０２１）５５５１４６００１１１，Ｅｍａｉｌ：ｌｄｌｓｊｄ＠
１２６．ｃｏｍ
蟾酥（Ｃｈａｎｓｕ）为中华大蟾蜍 Ｂｕｆｏｂｕｆｏｇａｒｇａｒｉ
ｚａｎｓＣａｎｔｏｒ或黑眶蟾蜍 Ｂｕｆｏｍｅｌａｎｏｓｔｉｃｔｕｓ的耳后腺
及皮肤腺分泌的白色浆液，经加工干燥制成［１］。古
今验方广泛应用蟾蜍、蟾酥拔毒消肿、定痛杀虫、强
心利尿。经现代科学研究发现，蟾酥中的脂蟾毒配
基、华蟾毒精、蟾毒灵３种脂溶性成分，具有广泛的
药理作用，对心血管系统，肿瘤细胞均有显著的药理
活性，通过多种抗肿瘤途径与机制，具有明显的抗肿
瘤疗效［２］。通过分离纯化工艺，对蟾酥药材进行分
离纯化，得到含脂蟾毒配基（ｒｅｓｉｂｕｆｏｇｅｎｉｎ，ＲＢＧ）、华
蟾毒精（ｃｉｎｏｂｕｆａｇｉｎ，ＣＢＧ）、蟾毒灵（ｂｕｆａｌｉｎ，ＢＬ）３种
蟾毒配基的组合物产物。作者测定了这种新型组合
产物中ＲＢＧ，ＣＢＧ，ＢＬ的表观溶解度和表观油水分
配系数，为开发研制该新型组合物的注射剂及其体
内外研究打下基础。
１ 仪器与试药
ＦＡ１００４电子天平（上海电子天平仪器厂）；ＡＥ
－２４０电子天平（上海电子天平仪器厂）；Ａｇｉｌｅｎｔ
１１００高效液相色谱系统；色谱柱 ＫｒｏｍａｓｉｌＣ１８（４６
ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）；ＨＴＹ－Ｘ型恒温台式摇瓶机
（浙江宁海西店生化工程设备厂）；飞鸽牌系列离心
机（上海安亭科学仪器厂）；Ｓ－２５型 ｐＨ计（上海安
亭科学仪器厂）。
蟾酥３种蟾毒配基中间体组合物纯化产物
（ＲＣＢ，自制）；正辛醇（分析醇，国药集团化学试剂
有限公司）；脂蟾毒配基（ＲＢＧ）对照品（批号
１１０７１８２００５０７）、华蟾酥毒基（ＣＢＧ）对照品（批号
８０３９２０２）；蟾毒灵（ＢＬ）对照品（和光纯药工业株式
会社）；甲醇（色谱纯，上海振兴化工一厂）；乙腈（色
谱纯，ＴＥＤＩＡＣｏｍｐａｎｙ．Ｉｎｃ）；所用水为去离子水。
２ 方法与结果
２．１ 色谱条件 ＫｒｏｍａｓｉｌＣ１８（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５
μｍ）色谱柱；流动相乙腈水（６０∶４０）；检测波长２９６
ｎｍ；流速１ｍＬ·ｍｉｎ－１；柱温４０℃；进样量２０μＬ。
２．２ ＲＢＧ，ＣＢＧ，ＢＬ对照品溶液制备 精密称取
ＲＢＧ，ＣＢＧ，ＢＬ对照品各１０ｍｇ，置１００ｍＬ量瓶中，
加甲醇溶解并稀释置刻度，摇匀；分别精密量取 ５
ｍＬ，各置１０ｍＬ量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
２．３ 供试品溶液蟾酥药材粗提液制备 取蟾酥药
材细粉约２５ｍｇ，精密称定，置５０ｍＬ茄形瓶中，精
密加甲醇２０ｍＬ，称定质量，加热回流１ｈ，放冷，再
称定，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤
液，即得。
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第３３卷第１１期
２００８年６月
中 国 中 药 杂 志
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Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ １１
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２．４ 空白溶液制备 精密量取甲醇１０ｍＬ，置于１０
ｍＬ量瓶中，即得。
各种样品溶液和对照品溶液的色谱图见图１。
图１ 各种样品溶液和对照品溶液的ＨＰＬＣ图
Ａ．空白溶液；Ｂ．ＢＬ对照品；Ｃ．ＣＢＧ对照品；Ｄ．ＲＢＧ对照品；
Ｅ．蟾酥乙醇粗物；Ｆ．蟾酥纯化产物
２．５ ＲＢＧ，ＣＢＧ，ＢＬ标准曲线的建立 精密称取
ＲＢＧ，ＣＢＧ，ＢＬ对照品各２５ｍｇ，分别置１００ｍＬ量
瓶中，加甲醇溶解，稀释置刻度，摇匀。对于每个对
照品，各精密量取 ０１，０２，０５，１０，２０，５０ｍＬ，
置于１０ｍＬ量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
分别精密吸取各标准系列溶液２０μＬ注入高效液相
色谱仪，记录峰面积。以对照品质量浓度为横坐标，
峰面积为纵坐标进行线性回归，得３条线性回归方
程。结果表明，ＲＢＧ在０２５３～２５３μｇ·ｍＬ－１线
性关系良好，线性方程 Ｙ＝２７２３６Ｘ＋０９７８２，ｒ＝
０９９９９。ＣＢＧ在０２６８～２６８μｇ·ｍＬ－１线性关系
良好，线性方程Ｙ＝２６２２７Ｘ－０４７５４，ｒ＝０９９９９。
ＢＬ在０２７８～２７８μｇ·ｍＬ－１线性关系良好，线性
方程Ｙ＝２９３１６Ｘ－０１５２９，ｒ＝１。
２．６ 日内精密度考察 选取ＲＢＧ，ＣＢＧ，ＢＬ对照品
高、中、低３个浓度，每一浓度连续进样６次，以峰面
积考察其日内精密度。结果见表１。
２．７ 日间精密度以及稳定性实验 选取 ＲＢＧ，
ＣＢＧ，ＢＬ对照品高、中、低３个浓度，每日进样测定１
次，记录峰面积。连续测定７ｄ，考察日间精密度及
稳定性。结果见表２。
结果表明，ＲＢＧ，ＣＢＧ，ＢＬ在高、中、低３个浓度
日间精密度良好，在７ｄ内浓度变化不大，较稳定。
２．８ 回收率试验 取已知含量的蟾酥药材，加入
表１ 蟾酥组合物中３种蟾毒配基的日内精密度
对照品 质量浓度／μｇ·ｍＬ－１ ＲＳＤ／％
ＲＢＧ ０５０６ １０３
５０６ ０３６
２５３ １６６
ＣＢＧ ０５３６ ０８１
５３６ ０３２
２６８ ０６１
ＢＬ ０５５６ １０７
５５６ ０３４
２７８ ０５２
表２ 蟾酥组合物中３种蟾毒配基的日间精密度
对照品 质量浓度／μｇ·ｍＬ－１ ＲＳＤ／％
ＲＢＧ ０５０６ ４８０
５０６ １６２
２５３ ２２５
ＣＢＧ ０５３６ １２７
５３６ １１５
２６８ ３１７
ＢＬ ０５５６ ２６５
５５６ ２９０
２７８ １８１
８０％，１００％，１２０％的对照品溶液适量，按２．１．２项下
方法制备供试品溶液。进样测定，计算得药材中
ＲＢＧ，ＣＢＧ，ＢＬ的平均回收率分别为９８１％，９７６％，
９９７％，ＲＳＤ分别为１８６％，２０３％，１９７％。
２．９ 蟾酥中３种蟾毒配基组合物表观溶解度的测
定［３］ 按《中国药典》２００５年版二部附录ＸＶＤ缓冲
液的配制方法，配制 ｐＨ分别为２０，２５，５０，５８，
７０，７８～８０的磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）。分别精密称
取适量自制蟾酥３种蟾毒配基中间体组合物，置于
１０ｍＬ具塞玻璃试管中，加入不同 ｐＨ的 ＰＢＳ，制成
不同ｐＨ的蟾酥３种蟾毒配基中间体组合物纯化产
物（ＲＣＢ）的过饱和溶液。于３７℃恒温台式摇瓶机
中放置４８ｈ，待溶解平衡且为饱和状态时取出，以
６０００ｒ·ｍｉｎ－１离心１０ｍｉｎ。取上清液（必要时进行
定量稀释）进行ＨＰＬＣ测定，代入标准曲线计算不同
ｐＨ下ＲＣＢ中ＲＢＧ，ＣＢＧ，ＢＬ的浓度，亦即三者的表
观溶解度。测得的数据见表３。
由表３可知，３７℃，ｐＨ７０时，蟾酥中３种蟾毒
配基组合物中 ＲＢＧ，ＣＢＧ，ＢＬ的表观溶解度均为最
大值。
２．１０ 蟾酥中３种蟾毒配基组合物油水分配系数的
测定［３］ 取适量３种蟾毒配基组合物产物溶解于被
水饱和的正辛醇中，制成该组合物产物的正辛醇溶
液，精密量取该溶液０５ｍＬ置于１０ｍＬ具塞塑料管
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表３ 蟾酥中３种蟾毒配基组合物在不同ＰＢＳ中的
表观溶解度（３７℃） μｇ·ｍＬ－１
ＰＢＳ ＢＬ ＣＢＧ ＲＢＧ
ｐＨ５０ ２７６４ ４３４４ ６０８５
ｐＨ５８ ３０５７ ４８９４ ７１２１
ｐＨ７０ ３２７６ ５１８５ ７６２９
ｐＨ７８～８０ ２９８６ ４１７４ ７０８４
中，再分别加入 ｐＨ分别为５０，５８，７０，７８～８０
的磷酸盐缓冲液４ｍＬ，放入３７℃恒温台式摇瓶机
中，振摇７ｈ直至平衡，以 ６０００ｒ·ｍｉｎ－１离心 １０
ｍｉｎ，取下层水溶液，注入高效液相色谱仪，记录峰面
积，代入标准曲线计算水相中的浓度。表观分配系
数计算公式如下：
Ｐ＝（ＣＶ－ＣｗＶｗ）／ＣｗＶｗ
上式中Ｐ为ＲＢＧ，ＣＢＧ，ＢＬ的表观油水分配系
数；Ｃ为ＲＢＧ，ＣＢＧ，ＢＬ在正辛醇中的初始浓度（μｇ
·ｍＬ－１）；Ｖ为被水饱和的正辛醇体积（即 ０５
ｍＬ）；Ｃｗ为药物分配平衡时在水相中测得的 ＲＢＧ，
ＣＢＧ，ＢＬ的浓度（μｇ·ｍＬ－１），Ｖｗ为水相体积（即
４０ｍＬ）。结果见表４。
可见，ＲＢＧ，ＣＢＧ，ＢＬ均为脂溶性物质，三者的
ｌｏｇＰ顺序为 ＲＢＧ＞ＢＬ＞ＣＢＧ。此外，不难发现，
ＲＢＧ，ＣＢＧ，ＢＬ在不同ｐＨ条件下各自 ｌｏｇＰ值差别
不大，所以 ｐＨ对 ＲＢＧ，ＣＢＧ，ＢＬ的油水分配系数影
响不显著，三者的油水分配系数均较大，为典型的疏
水性产物。
表４ 蟾酥中３种蟾毒配基组合物在不同ｐＨ条件下
的表观分配系数（３７℃）
ｐＨ
ＬｏｇＰ
ＢＬ ＣＢＧ ＲＢＧ
５ ３４１ ３３６ ３８６
５８ ３３６ ３２４ ３７２
７ ３３４ ３２７ ３７８
７８～８０ ３３６ ３２５ ３６６
３ 讨论
ＲＢＧ，ＣＢＧ，ＢＬ为脂溶性产物，在水中溶解度极
低，疏水性强。可以考虑加入表明活性剂作为增溶
剂以利于注射剂的成型。
弱酸或弱碱环境，ＲＢＧ，ＣＢＧ，ＢＬ的溶解度均有
不同程度的下降。由于 ＲＢＧ，ＣＢＧ，ＢＬ均含有蟾甾
双烯内酯型强心苷元结构，内酯环在酸性或碱性条
件下均易发生水解，且在较强酸性条件下（ｐＨ２０，
２５时）分解现象十分严重，已无法准确辨认出峰，
测出三者的浓度。在弱酸和弱碱条件时，３种物质
表现为所测浓度下降，均比中性条件下（ｐＨ７０时）
的溶解度低。
［参考文献］
［１］ 中国药典［Ｓ］．一部．２００５：２６５．
［２］ 赵 强，孟凡静，刘安西．蟾酥的研究进展［Ｊ］．中草药，２００４，
３５（１０）：附４．
［３］ 苏德森，王思玲．物理药剂学［Ｍ］．北京：化学工业出版社，
２００４：５１．
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆａｐｐａｒｅｎｔａｑｕｅｏｕｓｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙａｎｄａｐｐａｒｅｎｔｏｉｌｗａｔｅｒ
ｐａｒｔｉｔｉｏｎｃｏｅｆｉｃｉｅｎｔｓｏｆｔｈｒｅｅｂｕｆａｄｉｅｎｏｌｉｄｅｓｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ
ＬＩＵＤａｎ，ＦＥＮＧＪｉａｎｆａｎｇ
（ＳｈａｎｇｈａｉＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＩｎｄｕｓｔｒｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２００４３７，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅａｐｐａｒｅｎｔａｑｕｅｏｕｓｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙａｎｄａｐｐａｒｅｎｔｏｉｌｗａｔｅｒｐａｒｔｉｔｉｏｎｃｏｅｆｉｃｉｅｎｔｓｏｆｔｈｒｅｅｂｕｆａｄｉｅｎｏｌ
ｉｄｅｓｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ａｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｍｅｔｈｏｄｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅａｐｐａｒｅｎｔａｑｕｅｏｕｓｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙｏｆ
ｔｈｒｅｅｂｕｆａｄｉｅｎｏｌｉｄｅｓｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ；ａｐｐａｒｅｎｔｏｉｌｗａｔｅｒｐａｒｔｉｔｉｏｎｃｏｅｆｉｃｉｅｎｔｓｏｆｔｈｒｅｅｂｕｆａｄｉｅｎｏｌｉｄｅｓｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｓｈａｋｉｎｇ
ｆｌａｓｋｍｅｔｈｏｄ．Ｒｅｓｕｌｔ：ｔｈｅｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙｏｆｔｈｒｅｅｂｕｆａｄｉｅｎｏｌｉｄｅｓｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｒｅａｃｈｅｄｔｈｅｔｏｐｖａｌｕｅ，７６２９μｇ·ｍＬ－１（ＲＢＧ），５１８５μｇ·
ｍＬ－１（ＣＢＧ），３２７６μｇ·ｍＬ－１（ＢＬ）ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙａｎｄａｔｏｔａｌｏｆ１６０９μｇ·ｍＬ－１ｉｎｔｈｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｏｆ３７℃ ａｎｄｐＨ７０，ｔｈｅｒｅｆｏｒｅｔｈｒｅｅ
ｂｕｆａｄｉｅｎｏｌｉｄｅｓｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｃａｎｂｅｄｅｆｉｎｅｄａｓｉｎｓｏｌｕｂｌｅｐｒｏｄｕｃｔｓ．Ｔｈｅｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙｏｆｔｈｅｔｈｒｅｅｄｅｃｒｅａｓｅｄｉｎｗｅａｋａｃｉｄｏｒｂａｓｅｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｔｏ
ｓｏｍｅｅｘｔｅｎｔ．ＲＢＧ，ＣＢＧ，ＢＬａｒｅｌｉｐｏｓｏｌｕｂｌｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓａｎｄｔｈｅｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆｌｏｇＰｉｓＲＢＧ＞ＢＬ＞ＣＢＧ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＲＢＧ，ＣＢＧ，ＢＬ
ｉｓｗａｔｅｒｉｎｓｏｌｕｂｌｅａｎｄｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃ．Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔｓｃａｎｂｅａｐｐｌｉｅｄｔｏｉｎｃｒｅａｓｅｔｈｅｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙｏｆｔｈｒｅｅｂｕｆａｄｉｅｎｏｌｉｄｅｓｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｃｈａｎｓｕ；ｂｕｆａｄｉｅｎｏｌｉｄｅｓ；ｒｅｓｉｂｕｆｏｇｅｎｉｎ（ＲＢＧ）；ｃｉｎｏｂｕｆａｇｉｎ（ＣＢＧ）；ｂｕｆａｌｉｎ（ＢＬ）；ａｐｐａｒｅｎｔａｑｕｅｏｕｓｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ；
ａｐｐａｒｅｎｔｏｉｌｗａｔｅｒｐａｒｔｉｔｉｏｎｃｏｅｆｉｃｉｅｎｔｓ；ｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ［责任编辑 鲍 雷］
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