全 文 ：SPE-HPLC法测定首乌补肾酒中二苯乙烯苷的含量
叶曼红 1 ,温梅云 2
( 1. 广东省化工制药职业技术学院 ,广东 广州　 510520; 2. 广东省结核病防治研究所 ,广东 广州　 510630)
　　首乌补肾酒是以纯正德庆出产的何首乌为主要
原料 ,并配以多种国产珍贵滋补药材 ,采用新法提制
而成 ,具有滋养补血、乌发驻颜、健脾和胃、强肾壮身
的功能。2, 3, 5, 4′-四羟基二苯乙烯 -2-O-β -D葡萄糖
苷 (简称二苯乙烯苷 )是何首乌的主要成分。本实验
采用固相萃取 ( SPE)前处理并进行测定 ,结果表明
该方法简便、高效、准确、专属性强、重复性好、结果
可靠 ,并且能够净化中药样品、避免待测成分损失和
保护色谱柱 [1, 2 ]。
1　仪器与试剂
Waters 2695高效液相色谱仪 , Waters 2996二
极管阵列检测器 ; AC— 120C、 BP2110D电子天平 ;
Wa ters公司 Sep-Pak C18微柱。
甲醇为色谱纯 ,其他试剂均为分析纯 ;二苯乙烯
苷对照品 (中国药品生物制品检定所 ,批号: 0844-
200003) ;首乌补肾酒 (广东省德庆县首乌酒厂 ,批
号: 20011001, 20011101, 20011201)。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件与系统适应性: 色谱柱: Hypersi l
O DS ( 2)柱 ( 250 mm× 4. 6 mm , 5μm);流动相: 甲
醇 -水 ( 32∶ 68) ;流速: 1. 0 mL /min;检测波长: 320
nm
[3 ] ;柱温: 35℃ ;进样量: 10μL。在上述色谱条件
下 ,二苯乙烯苷理论塔板数为 8 200,保留时间为
9. 0 min,色谱图见图 1。
2. 2　对照品溶液的制备: 取二苯乙烯苷对照品约
20 mg ,精密称定 ,置 100 mL量瓶中 ,加入甲醇溶
解 ,并稀释至刻度 ,摇匀 ,作为对照品储备液 ( 0. 2
mg /mL)。精密移取储备液 5 mL,置 25 mL量瓶中 ,
用 50%甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,即得。
2. 3　供试品溶液的制备: 精密吸取首乌补肾酒 3
m L,置 20 mL量瓶中 ,用 50%甲醇稀释至刻度 ,摇
匀 ,离心。溶液流过 Sep-Pak C18微柱 ,收集流出液 ,
每 2 m L收集 1份 ,共收集 9份 ,将每份溶液各进样
10μL,记录色谱图 ,结果发现前 7份含量依次递增 ,
第 7份流出液开始趋于平衡 ,即溶液中二苯乙烯苷
的浓度达到饱和 ,为了确保含量测定的准确性 ,取第
* -二苯乙烯苷
* -s ti lbene glycoside
图 1　二苯乙烯苷对照品 (A)和首乌补肾酒 ( B)HPLC图
Fig. 1　 HPLC chromatograms of stilbene
glucoside reference substance (A)
and Shouwu Bushen Tinctura ( B)
8份溶液进行测定 ,即第 15～ 16 mL溶液作为供试
品溶液。
2. 4　标准曲线的制备:精密吸取对照品储备液 ( 0. 2
mg /mL) 1, 5, 4, 5, 10, 15 mL,分别置 25, 50, 25, 25,
25, 25 mL量瓶中 ,用 50%甲醇稀释至刻度 ,各进样
10μL,按上述色谱条件测定峰面积。以二苯乙烯苷
浓度作为横坐标 ,峰面积作为纵坐标 ,得线性回归方
程: Y= - 3. 628× 104+ 3. 218× 107 X , r= 0. 999 9。
表明二苯乙烯苷在 0. 008 16～ 0. 122 40 mg /mL具
有良好的线性关系。
2. 5　精密度试验:取二苯乙烯苷对照品溶液 ( 40. 80
μg /mL) ,重复进样 6次 ,测定二苯乙烯苷峰面积值 ,
结果其 RSD为 0. 2% (n= 6)。
2. 6　稳定性试验: 取同一份供试品溶液 (批号:
020710)分别于 0, 1, 24, 25, 28, 48 h各进样 10μL,
记录色谱图 ,测定二苯乙烯苷峰面积值 ,结果其
RSD为 0. 5% (n= 6)。供试品溶液在 48 h内稳定。
2. 7　 重现性试验: 取 同一批供试 品 (批号:
20011101) ,分别平行称取 6份 ,照 2. 3项下方法测定
二苯乙烯苷峰面积 ,结果其 RSD为 0. 8% (n= 6)。
2. 8　回收率试验:采用加样回收法。精密吸取同一
批已知二苯乙烯苷含量 ( 0. 282 mg /mL)的首乌补
肾酒 (批号: 20011101) 3 mL,分别加 0. 204 mg /mL
二苯乙烯苷对照品溶液 3, 4, 5 mL,按上述色谱条件
·408· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 35卷第 4期 2004年 4月
收稿日期: 2003-06-18
测定 ,计算回收率 ,结果平均回收率为 99. 81% ,
RSD为 1. 3 (n= 6)。
2. 9　样品测定:分别精密吸取对照品溶液与供试品
溶液各 10μL,按上述色谱条件进样测定 ,计算二苯
乙烯苷含量 ,结果见表 1。
表 1　首乌补肾酒中二苯乙烯苷的含量 (n= 3)
Table 1　 Stilbene glycoside in Shouwu
Bushen Tinctura (n= 3)
批号 二苯乙烯苷 /( mg· mL- 1 ) RSD /%
020701 0. 282 0. 7
020702 0. 269 1. 2
020703 0. 290 0. 4
3　讨论
3. 1　提取溶剂选择:试验用流动相、甲醇、 50%甲醇
分别稀释至刻度 ,离心 ,取上清液 ,过滤膜 ( 0. 45
μm) ,取续滤液 ,进样 10μL,记录色谱图 ,结果含量
基本一致。根据取溶剂与流动相接近为佳 ,并且考虑
到流出曲线的饱和时间 ,因此选择 50%甲醇为提取
溶剂。
3. 2　提取条件选择 [3 ]: 试验用 50%甲醇直接稀释
至刻度 ,超声提取 10, 20, 30, 45 min,结果发现测得
含量基本一致。考虑到试验操作越简单越好 ,因此选
择直接稀释提取。
3. 3　试验采用 DAD检测器进行峰纯度检测 ,纯度
达到 99. 7% ,所以未做阴性对照试验。
References:
[1 ]　 Zhu B H, Liang Y Y. Determination of icarri in in Haima Baji
Pill by HPLC com bined wi th solid-ph ase ex tract ion of Sep-Pak
C18 cart ridg es [ J ]. Chin Trad it Pat Med (中成药 ) 1999, 21
( 10): 500.
[2 ]　 Li J F, Zh u B H, Fang J H, et al . Ef fect of Shenkang Injec-
tion on p roli f eration and fibronectin s ecretio of glomerular en-
dothelial cel ls [ J] . Trad it Chin Drug Res Cl in Pharmacol (中
药新药与临床药理 ) , 2001, 12( 4): 287.
[3 ]　Ch P (中国药典 ) [S ]. 2000 ed. VolⅠ .
HPLC法测定川芎及天芎注射液中阿魏酸的含量
黄东萍 1 ,文东旭 2 ,林文翰 3
( 1. 广西大学化学化工学院 ,广西 南宁　 530004; 2. 广西药品检验所 ,广西 南宁　 530021;
3. 北京大学 天然药物及仿生药物国家重点实验室 ,北京　 100083)
　　天芎注射液由川芎、天麻两味中药组成 ,用于偏
头疼、老年痴呆、头风眩晕、目系眩急、身体拘倦等
症。方中川芎的主要成分为阿魏酸。 现代药理研究
表明 ,阿魏酸有抑制血小板聚集、降低血小板活性和
改善微循环的作用 ,是天芎注射液中的有效成分之
一。 因此 ,本实验选择阿魏酸作为定量指标 ,采用
RP-HPLC法测定川芎及天芎注射液中阿魏酸的含
量 ,方法快速、方便、专属。
1　仪器与试药
Waters 600E泵 , Wa ters PDA996检测器 , Wa-
ters 717自动进样器 , Waters Miliennum32色谱工作
站。川芎 ,四川产 ,鉴定为川芎 Ligust icum chuanx -
iong Hort.的根茎 ;天芎注射液由广东彼迪药业有
限责任公司提供 ,阿魏酸对照品由中国药品生物制
品检定所提供 ,甲醇为色谱纯 ,其他试剂均为分析
纯。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件: 色谱柱: Inertsi l ODS-3 ( 250 mm×
4. 6 mm , 5μm) (日本 GL Sciences Inc. ) ;流动相: 甲
醇-1%醋酸溶液 ( 35∶ 65) ;流速: 1. 0 mL /min;检测
波长: 320 nm。
2. 2　川芎药材供试品溶液的制备:取本品粉末约
0. 2 g (同时另取本品粉末按《中华人民共和国药典》
2000年版一部附录Ⅸ H第一法测定水分 ) ,精密称
定 ,置量瓶中 ,精密加 30%乙醇 10 mL,称定质量 ,
静置 24 h ,振摇后再超声处理 20 min,再称定质量 ,
用 30%乙醇补足减失的质量 ,摇匀 ,静置。取上清液
离心 ,即得。
2. 3　天芎注射液供试品溶液的制备:精密量取天芎
注射液 30 mL,加水饱和正丁醇提取 6次 ,每次 20
mL,合并正丁醇液 ,减压蒸干 ,残渣加温热的甲醇-
5%醋酸溶液 ( 1∶ 4)溶解 ,转移至 10 mL量瓶中 ,放
冷 ,加甲醇 -5%醋酸溶液 ( 1∶ 4)至刻度 ,摇匀 ,即得。
2. 4　阴性对照溶液的制备:取天麻干粉 0. 3 g (相当
于不含川芎的天芎注射液 100 mL) ,按天芎注射液
制备方法制成阴性样品 ,再按上述方法制备阴性对
·409·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 35卷第 4期 2004年 4月
收稿日期: 2003-06-14