全 文 ：HPLC法测定罗汉果多糖的相对分子质量
陈全斌 ,陈海燕 ,李　俊 ,义祥辉* ,苏小建
(广西师范大学 资源与环境学系 ,广西 桂林　 541004)
　　广西著名特产罗汉果是葫芦科罗汉果属罗汉果
Siraitia grosvenorii ( Sw ing le) C. Jef f rey植物的成
熟果实 ,主产于广西永福、临桂和龙胜等县 ,资源丰
富 ,是我国传统出口商品之一 ,在港澳地区、东南亚
和欧美国家久负盛名 ,颇受欢迎。其性凉味甘 ,无毒 ,
有润肺止咳、清热解暑、凉血健胃、润肠通便的功效。
在治疗咽喉炎、百日咳、急慢性气管炎、胃肠疾病方
面疗效显著 ,被收载于 1977, 1985, 1990, 1995年《中
华人民共和国药典》 ,作为常用中药使用 [ 1, 2] ,国家卫
生部、中医药管理局将其列入第一批“既是食品又是
药品的品种名单” [3 ]。
目前对罗汉果的研究局限于占罗汉果重量约
2%的甜苷 [4, 5 ] ,迄今为止尚未见有关罗汉果多糖成
分的报道。而许多植物的多糖具有抗肿瘤、抗病毒、
抗衰老等独特功效以及不良反应低的特点 [ 6] ,使之
成为新药开发和研究的热点之一。多糖是大分子化
合物 ,它的纯度标准不能用通常小分子化合物的纯
度标准来衡量 ,因为即使是多糖纯品其微观也是不
均匀的。它的纯度只代表某一多糖的相似链长的平
均分布 ,通常所说的多糖纯品实质上是一定相对分
子质量范围的均一组份。目前最常用的且较为正确
的方法为 HPLC法 [7, 8 ]。 本文对罗汉果多糖进行分
离并进行了相对分子质量的测定 ,为进一步开发和
利用罗汉果这一宝贵资源提供了应用基础 ,对提高
罗汉果的经济价值和使用价值具有重要意义。
1　材料、试剂与仪器
罗汉果鲜果 (采于桂林永福县 ) ; 95%乙醇 (食
用 ) ,苯酚 ( AR) ,浓硫酸 ( AR) ,氯化钠 ( AR) ,
DEAE-纤维 (柱色谱用 ,上海试剂二厂 ) , Sephadex
G- 200、 T-系列葡聚糖 (北京经科宏达生物技术有
限公司 ) ; FD- 1型冷冻干燥机 (北京博医康技术公
司 ) , P200II高压恒流泵 (大连依利特分析仪器有限
公司 ) , Shim- pack DIO L- 150柱 (日本岛津 ) , RID
- 6A示差折射仪 (日本岛津 ) , Ech rom 98色谱数据
处理工作站 (大连依利特分析仪器有限公司 )。
2　实验方法
2. 1　罗汉果多糖样品的制备:将罗汉果鲜果捣碎 ,
用蒸馏水回流提取 5次 ,每次 1. 5 h。提取液浓缩后
用 95%乙醇沉淀 ,并静置 24 h,离心 ,用 95%乙醇反
复洗涤沉淀至乙醇溶液颜色较浅。将沉淀溶于水 ,用
Sevag法 [7 ]脱蛋白反复几次直至水相部分与茚三酮
反应为阴性 ,将水相部分浓缩后冷冻干燥 ,得脱蛋白
粗多糖。取一定量的脱蛋白粗多糖溶于水 ( 0. 45μm
微滤 )上样进行第一次 DEAE-纤维素柱色谱 ( H2O、
0. 1, 0. 5 mol /L NaCl洗脱 )分级 ,苯酚 -硫酸法 [8 ]测
定洗脱曲线 ,将高峰部分合并、浓缩后冷冻干燥得到
PS1, PS2, PS3。PS1, PS2分别再过一次 DEAE-纤维
素柱色谱 ( H2O、 0. 1 mo l /L NaCl洗脱 ) ,苯酚 -硫酸
法测定洗脱曲线 ,将高峰部分合并、浓缩后冷冻干燥
得到 2个多糖 SGPS1, SGPS2。
2. 2　 HPLC法 [9, 10 ]测定罗汉果多糖相对分子质量
2. 2. 1　柱的标定:标准品:葡聚糖 ( Dex t ran)相对分
子质量为 10 500( T-10) , 42 000( T-40) , 70 000( T-
70) , 482 000( T-500) , 2 000 000 ( T-2000) ,葡萄糖
( AR) ;各标准品配制成 0. 5%的溶液 (用超声波助
溶 ) ;流动相: 二次蒸馏水 ;流速: 1. 0 min;柱压: 1. 0
M Pa;柱温:环境温度 ;进样体积: 20μL。标准品由小
分子到大分子依次进样 ,每个样品平等进样 3次 ,正
确记录各样品相应的保留时间 tR和色谱图。
2. 2. 2　罗汉果多糖相对分子质量的测定:将罗汉果
多糖 SGPS1, SGPS2配制成浓度为 0. 1%的溶液 ;
各样品的 HPLC操作条件同 2. 2. 1项 ,正确记录样
品相应保留时间 tR和色谱图。
3　结果与讨论
3. 1　将各标样的相对分子质量与 HPLC测得的保
留时间综合见表 1。
　　以 tR为横坐标 ,标样相对分子质量的常用对数
log Mw为纵坐标 ,作图得一直线 ,经过统计直线回
·1075·中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 12期 2003年 12月
收稿日期: 2003-02-20基金项目:美国西太平洋癌症基金资助项目 ;广西区教育厅自然基金资助项目 ;广西师范大学科研基金资助项目作者简介:陈全斌 ( 1957- ) ,男 ,广西桂林人 ,高级工程师 ,多年从事植物有效成分提取与分离工作。
* 通讯作者　 Tel: ( 0773) 5812637　 Fax: ( 0773) 5817286　 E-mail: xh yi@ mai lbox, gxn u. edu. cn
归处理 ,得回归方程: log Mw = - 0. 881 3tR+
10. 378 1(r= 0. 868 1)。
表 1　各标样的保留时间 ( n= 3)
Table 1　 Retention time of standard samples (n= 3)
样品名称 样品相对分子质量 保留时间 tR /min
葡萄糖 180 9. 50
T-10 10 500 7. 26
T-40 44 000 5. 83
T-70 78 000 5. 70
T-500 482 000 5. 53
T-2000 2 000 000 5. 05
　　样品 SGPS1, SGPS2的 HPLC色谱图 ,由
Ech rom 98色谱数据处理工作站的峰面积百分比计
算 , SGPS1的面积百分比为 100% ,即 SGPS1的纯
度为 100% ,其保留时间 tR为 5. 38 min; SGPS2的
面积百分比为 100% ,即 SGPS2的纯度为 100% ,其
保留时间 tR为 5. 18 min。
由样品的保留时间 ,用校正曲线计算得各多糖
的相对分子质量 ,见表 2。
表 2　 HPLC法测定罗汉果多糖的相对分子质量 (n= 3)
Table 2　 Relative polysaccharides of S. grosvenorii
by molecular weight in HPLC (n= 3)
多糖名称 保留时间 tR /min 得相对分子质量
SGPS1 5. 38 430 000
SGPS2 5. 18 650 000
3. 2　本研究首次从罗汉果中分离得到 2个多糖 ,建
立了 HPLC法测定其相对分子质量的便捷方法。测
定得到多糖 SGPS1, SGPS2的相对分子质量分别为
430 000, 650 000。有关 2个多糖 SGPS1, SGPS2的
结构测定和生物活性的测定有待进一步研究。
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延边川芎的化学成分研究
陈　赤 ,王大志* ,柏　川 ,杜蕾蕾
(四川大学华西药学院 ,四川 成都　 610041)
　　延边川芎 Cnidium of f icinale Makino,又名东川
芎、洋川芎 ,为地方药材品种 ,其干燥根茎入药 ,功效
与川芎相同。 延边川芎源于日本川芎 ,是本世纪初经
朝鲜传入我国东北地区的 ,此后主要在吉林省延边朝
鲜族自治州栽培 ,并在局部地区作为川芎使用 [1 ]。日
本川芎根茎的化学成分已见于文献报道 ,主要为苯酞
类、酚类和糖类化合物 ,而延边川芎的化学成分研究
尚属空白。为了进一步了解引种至四川栽培的延边川
芎的化学成分 ,为生药的品质评价奠定基础 ,本课题
采用不同极性溶剂提取、低压柱色谱等方法对其化学
成分进行了分离和纯化 ,共获得 11个单体化合物。通
过熔点测定 , IR, M S, 1 H-NMR和 13 C-NM R鉴定出 9
个成分 (化合物Ⅰ ～ Ⅸ ) ,其中化合物Ⅰ ,Ⅴ ,Ⅶ ,Ⅷ ,
Ⅸ 为首次从该种植物中分离获得。
1　实验部分
1. 1　仪器、试剂和材料: Buchi旋转蒸发仪 (瑞士 ) ;
ZF- 1型三用紫外分析仪 (上海顾村电光仪器厂 ) ;
PERKIN - ELM ER 983型 红外光 谱仪 ; 美 国
·1076· 中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 12期 2003年 12月
收稿日期: 2003-05-16
* 通讯作者