全 文 ：HPLC法测定左金丸中小檗碱的含量
周　晖
(温州市药品检验所 ,浙江 温州　 325000)
　　左金丸由黄连与吴茱萸组成 ,用于泻火疏肝、和
胃止痛 ,是最常用的中成药之一 ,收载于《中华人民
共和国药典》 2000年版一部。原标准采用回流提取、
柱色谱、分光光度法测定总生物碱 (以盐酸小檗碱
计 ) ,十分繁琐。本实验建立 HPLC法测定盐酸小檗
碱含量 ,专属性好 ,方法简便、准确。
1　仪器和试药
LC— 6A高效液相色谱仪 , SPD— 6AV紫外检
测器。 盐酸小檗碱对照品 (中国药品生物制品检定
所 ) ,乙腈 (色谱纯 ) ,其他试剂均为分析纯。左金丸
(市售 )。
2　方法与结果
2. 1　 色 谱条 件: 色 谱 柱 为 CLC-ODS C18柱
( 150 mm× 4. 6 mm , 5μm) ( Shim-pack) ,流动相为
0. 05 mo l /L磷酸二氢钾溶液 -乙腈 ( 75∶ 25) ,检测
波长 350 nm ,灵敏度为 0. 1 AU FS,柱温为室温 ,进
样量为 20μL,流速为 1. 0 mL /min。理论板数按盐
酸小檗碱峰计算应不低于 3 000。 色谱图见图 1。
* -盐酸小檗碱
* -berberine hyd roch co rid e
图 1　盐酸小檗碱对照品 (A)与左金丸 ( B)
的 HPLC色谱图
Fig. 1　 HPLC chromatograms of berber ine　　
hydrochloride (A) and Zuojin Pill ( B)
2. 2　对照品溶液的制备:精密称取在 100℃干燥 5
h的盐酸小檗碱对照品约 30 mg ,置 100 mL量瓶
中 ,加水 -盐酸 ( 100∶ 1)适量 ,超声 10 min使溶解 ,
放冷 ,加水-盐酸 ( 100∶ 1)至刻度 ,摇匀。精密量取 2
m L,置 25 mL量瓶中 ,用水 -盐酸 ( 100∶ 1)稀释至刻
度 ,摇匀 ,即得。
2. 3　供试品溶液的制备: 取左金丸适量研细 (过 3
号筛 ) ,取 1 g ,精密称定 ,置 100 mL量瓶中 ,加水-
盐酸 ( 100∶ 1)适量 ,超声 20 min使溶解 ,放冷 ,加
水-盐酸 ( 100∶ 1)至刻度 ,摇匀 ,离心。精密量取上清
液 2 mL,置 25 mL量瓶中 ,用水 -盐酸 ( 100∶ 1)稀释
至刻度 ,摇匀 ,即得。
2. 4　线性关系考察:精密吸取稀释前的对照品溶液
( 0. 3 mg /mL) 0. 25, 0. 5, 1. 0, 2. 0, 3. 0, 4. 0 mL,置
25 mL量瓶中 ,用水-盐酸 ( 100∶ 1)稀释至刻度 ,摇
匀 ,按上述色谱条件测定盐酸小檗碱吸收峰面积。以
浓度 (C )对峰面积 ( A )进行线性回归 ,得方程: A=
39 923C- 9 651, r= 0. 999 9。结果表明:盐酸小檗
碱在 3～ 48μg /mL与峰面积呈良好线性关系。
2. 5　精密度试验:精密吸取同批供试品溶液注入高
效液相色谱仪 ,于同一日内重复进样 6次 ,测定盐酸
小檗碱峰面积 ,结果 RSD为 0. 61%。
2. 6　稳定性试验:取同批供试品溶液分别于 0, 5,
9, 24, 36, 48 h注入高效液相色谱仪 ,测定盐酸小檗
碱峰面积 ,结果 RSD为 0. 87%。
2. 7　重现性试验:精密称取同一批供试品 6份 ,按
供试品溶液制备法制备 ,并按 2. 1项色谱条件测试 ,
盐酸小檗碱含量 RSD为 1. 70%。
2. 8　回收率试验:采用加样回收率法。 取已知含量
的同批左金丸粉末 0. 5 g ,精密称定 ,精密加入盐酸
小檗碱对照品 ,按供试品溶液制备法制备 ,并按 2. 1
项色谱条件测试。 结果平均回收率为 99. 5% , RSD
为 1. 2% (n= 6)。
2. 9　样品测定:取 4个厂家样品 8批 ,按供试品溶
液制备法制备 ,并按 2. 1项色谱条件测定 ,结果见
表 1。
3　讨论
3. 1　参考文献 ,比较不同的紫外检测波长和流动相 ,
结果表明 350 nm为检测波长 , 0. 05 mol /L磷酸二氢
钾溶液 -乙腈 ( 75∶ 25)为流动相 ,分离效果较好。
3. 2　供试品的提取考察了不同的溶剂和超声处理
时间。结果表明以水为溶剂盐酸小檗碱的提取含量
·1008· 中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 11期 2003年 11月
收稿日期: 2003-01-08作者简介:周　晖 ( 1963— ) ,女 ,浙江省温州市人 ,副主任药师 , 1983年毕业于浙江医科大学药学专业 ,一直从事药品检验、分析工作。
Tel: ( 0577) 88539032
表 1　左金丸中小檗碱 HPLC与药典法测定结果 (n= 3)
Table 1　 Content berberine in Zuojin Pill
by HPLC and Ch P s method (n= 3)
厂家 (批号 ) 小檗碱含量 / (m g· g
- 1 )
药典法 (盐酸小檗碱计 ) HPLC法
A ( 021203) 77. 8 40. 8
A ( 030103) 77. 4 41. 4
A ( 030604) 78. 3 41. 7
B ( 021002) 72. 1 35. 9
B ( 030301) 70. 0 31. 2
C ( 020301) 81. 0 45. 8
C ( 030102) 84. 0 47. 2
D ( 030212) 64. 0 27. 9
较低 ,以甲醇-盐酸 ( 100∶ 1)为溶剂盐酸小檗碱色谱
峰与其他干扰组分色谱峰的分离效果不好 ,以水 -盐
酸 ( 100∶ 1)为溶剂效果最佳。而超声提取时间从 20
min到 120min差异无显著 ,故选择 20 min为供试
品提取时间。
3. 3　不同厂家的左金丸 ,采用 HPLC法测定盐酸
小檗碱的含量结果差异较大 , A、 C厂家在 40 mg /g
以上 , B厂家在 30～ 40 mg /g , D厂家低于 30 mg /g。
3. 4　本方法与药典法比较专属性好 ,简便、准确、重
复性好 ,确定合适的限度范围后 ,可作为左金丸的定
量方法。
HPLC法测定益尔力口服液中淫羊藿苷的含量
涂　禾 ,张世明 ,郑　桅 ,闵本初
(国家体育总局成都运动创伤研究所 ,四川 成都　 610041)
　　益尔力口服液为著名运动医学专家郑怀贤教授
经验方经过系统的药物研究后制成的运动补剂。具
有益气血 ,补肝肾 ,强筋骨 ,畅血脉等功效 ,可用于改
善人体机能 ,提高运动能力 ,消除运动性疲劳。 益尔
力口服液以人参、黄芪、淫羊藿、三七、丹参、宁夏枸
杞、红毛五加、佛手等 10味药材为原料提取制得。为
控制其质量 ,本实验采用 HPLC法测定其中淫羊藿
苷的含量。
1　仪器与试药
Waters HPLC仪 , 680自动控制器 , 484可见 -
紫外发光检测仪 , 745B数据处理机。
淫羊藿苷对照品由中国药品生物制品检定所提
供 ,水为高纯水 ,其他试剂均为分析纯。益尔力口服
液由国家体育总局成都运动创伤研究所提供。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件: 色谱柱: Symmetry C18 ( 3. 9 mm×
150 mm , 5 μm ); 预柱: MbondpakTM C18 Gurd-
pakTM ;流动相:乙腈 -甲醇 -0. 1 mol /L磷酸二氢钠溶
液 ( 6∶ 50∶ 50) ;流速: 0. 6 mL /min;柱温: 30℃ ;检
测波长: 270 nm。
2. 2　供试品溶液的制备: 精密量取益尔力口服液
50. 0 mL,水浴浓缩至 10 mL,加甲醇 50 mL沉淀杂
质。高速离心 ( 10 000 r /min) 5 min,用 0. 45μm微
孔滤膜滤过 ,滤液浓缩至 10 mL。 再加甲醇 50 mL
沉淀杂质 ,高速离心 ( 10 000 r /min) 5 min,用 0. 45
μm微孔滤膜滤过 ,用甲醇定容至 100. 0 mL,即得。
2. 3　空白溶液的制备: 按处方组成 ,除去淫羊藿后
的其余药味按处方比例和工艺制成口服液 ,按照供
试品溶液的制备方法制备缺淫羊藿的空白溶液。
2. 4　系统适应性考察: 在上述色谱条件下 ,淫羊藿
苷保留时间约 6. 8 min。 理论塔板数按淫羊藿苷计
不低于 1 200。 空白溶液对测定无干扰。
2. 5　线性关系考察: 精密量取淫羊藿对照品适量 ,
配制 5. 15, 10. 30, 20. 60, 41. 20, 82. 40μg /m L淫羊
藿苷对照品溶液 ,按上述方法测定峰面积。以淫羊藿
苷浓度为横坐标 ,以峰面积为纵坐标进行回归 ,得方
程: A= 5× 105+ 5× 106C , r= 0. 999 9。 结果表明:
淫羊藿苷在 0. 05～ 0. 82μg与峰面积成良好的线性
关系。
2. 6　重现性试验:按拟定的方法测定同一批供试品
(批号 990119) 6份 ,结果淫羊藿苷峰面积 RSD为
1. 02%。
2. 7　稳定性试验:取同批样品按供试品溶液的制备
方法操作 ,每间隔 6 h测定淫羊藿苷的峰面积 ,结果
其 RSD为 0. 98% (n= 3)。
2. 8　回收率试验:采用加样回收法。取已知含量 (含
淫羊藿苷 6. 75μg)的供试品 5份 ,分别准确加入不
同量的淫羊藿苷对照品溶液 ,按拟定方法测定 ,计算
·1009·中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 11期 2003年 11月
收稿日期: 2003-02-11