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Micro scopic characteristics of Liuwei Dihuang ultra micro pulverization

六味地黄超微细粉体显微特征观察



全 文 :3 讨论
  调查发现黄连群体中存在广泛的性状变异,划
分了 6种变异类型,应用方差分析的方法, 将环境变
异与遗传变异区分开, 从整体上判断各变异类型间
是否有显著差异,并估算出各性状下的遗传变异方
差 R2g 及遗传变异系数GCV%。从单株叶数、叶长、叶
芽数及中裂叶大小上研究了类型间变异, 表明变异
类型间有较大的遗传变异度, 上述性状主要为可遗
传变异,从整体上说明在变异类型间进行选择是有
效的,可行的。黄连群体的性状变异的研究不多,特
别是针对性状遗传方式的研究, 更是少见, 黄连群体
性状变异的深入研究, 应将各变异类型自交、杂交后
代的性状分析方法与 DNA 分子标记方法结合运
用[ 6] , 以探明各性状的遗传方式及遗传物质的真实
差异;同时结合变异类型与黄连产量、药效成分含量
等性状的相关分析, 以找出产量高、药用品质好的类
型,淘汰产量低、品质低的类型,以达到改良群体, 提
高利用价值的目的。
参考文献:
[ 1] 曾庆楣 . 黄连人工栽培[ M ] . 武汉: 湖北科学技术出版社,
1993.
[2] 濮社班,许翔鸿,张宇和,等 . 黄连生长状况及生物碱含量的个
体差异[ J ] . 中草药, 1999, 30( 5) : 375-377.
[3] 张丽萍,杨世林,杨春清,等 . 我国药材种子种苗产业存在的问
题及其对策[ J] . 中国中药杂志, 1999, ( 10) : 579-581.
[4] 高之仁 . 数量遗传学[ M ] . 成都:四川大学出版社, 1996.
[5] 马育华 . 植物育种的数量遗传学基础[ M ] . 南京:江苏科学技
术出版社, 1982.
[ 6] 郭宝林, 李家实,阎玉凝 . 中药材 DNA 分子标记研究的技术
问题[ J] . 中草药, 2000, 31( 12) : 951-954.
六味地黄超微细粉体显微特征观察
宋丽丽, 李 勉,范丙义,蒋士忠X
(河南大学药学院,河南 开封 475001)
摘 要: 目的 对中药复方六味地黄超微细粉体组织特征进行观察研究。方法 用对撞式气流粉碎机对六味地黄
方剂药材进行细胞级超微粉碎; 对照常规粉碎细粉,用显微观察法对其组织特征进行观察。结果 六味地黄方剂经
超微粉碎后, 显微镜下观察基本无完整细胞存在。结论 中药复方经超微粉碎可使细胞破壁,使其细胞内的各类有
效成分充分暴露, 迅速释放。
关键词: 六味地黄;超微粉碎; 细胞破壁;显微特征
中图分类号: R282. 710. 3   文献标识码: A   文章编号: 0253 2670( 2002) 06 0560 02
Micro scopic characteristics of Liuwei Dihuang ultra micro pulverization
Song Li-li, L i M ian, Fan Bing-yi, Jiang Shi-zhong
   ( Pharmaceutical College o f Henan Univ ersit y, Kaifeng Henan 475001, China )
Key words : L iuw ei Dihuang ; ult ra micr o-pulvex ization; br oken wall of cell; microscopic characteris-
tics
  超微粉碎是近年来迅速发展起来的一项高新技
术,是以植物类药材细胞破壁为目的的粉碎作业。细
胞经破壁后, 胞内有效成分可充分暴露出来,从而提
高药物的释放速度和释放量。该技术在中药生产中
已显露出特有的优势[ 1, 2]。
六味地黄方剂出自宋代钱乙《小儿证药直诀》,
是临床应用广泛的滋阴补肾的代表方剂,由熟地黄、
山茱萸、山药、丹皮、茯苓、泽泻六味药材组成。本文
对该方剂六味药材进行了混合超微粉碎,并对照常
规粉碎细粉,进行了粉体的显微特征观察[ 3]。
1 仪器与材料
JGM-T 50 型对撞式气流粉碎机 (华东理工大
学气流粉碎分级技术装备中心)。XSZ-CT V 型彩色
电视生物显微镜 (北京泰克仪器有限公司)。XS-200
·560· 中草药 Chinese T radit ion al and Herbal Dr ugs 2002年第 33卷第 6期
X 收稿日期: 2001-12-03
作者简介:宋丽丽 ( 1953-) , 女,河南鲁山县人,在职硕士研究生, 高级工程师, 研究方向为中药研究与开发。T el : ( 0378) 5660610
13903789260; E-mail: song 0378@fm365. com
* 华东理工大学气流粉碎分级技术装备中心
双目摄影生物显微镜 〔江南光电 (集团) 股份有限
公司〕。S-250 扫描电子显微镜 (英国剑桥)。
水合氯醛透化液、稀甘油固定液按《中华人民共
和国药典》规定配制。药材分别从亳州、禹州药材市
场购得, 经本院生药研究室鉴定为玄参科熟地黄
Rehmannia glutinosa ( Gaerth. ) L ibosch ex Fisch.
et M ey.、山茱萸科山茱萸 Cornus of f icinali s Sieb.
et Zucc、薯蓣科山药 Dioscorea opp osita T hunb.、毛
茛科牡丹皮 Paeonia suf f ruticosa Andr. 、多孔菌科
茯苓 Poria cocos ( Schw . ) Wolf 和泽泻科泽泻 Al-
ism orientaie ( Sam. ) Luzep.。
2 实验方法
2. 1 粉体制备
2. 1. 1 混合细粉制备:按处方规定比例,取熟地黄、
山药、山茱萸、泽泻、茯苓、牡丹皮净药材共 5 kg ,常
规粉碎,过 100 目筛,得混合细粉 (以下简称细粉)。
2. 1. 2 超微细粉体制备:取上述细粉 3 kg, 置对撞
式气流粉碎器中粉碎, 得六味地黄超微细粉 (以下
简称超微粉)。选择工艺条件为: 耗气量 0. 9 m 3/
min,压力 0. 7 MPa;粒径 D 50 10 Lm 30 Dmxa 30 Lm
无规则超细颗粒。
2. 2 粉末形貌观察:分别取细粉和超微粉适量,置
于扫描电镜载物板上, 电镜观察。
2. 3 粉体的显微特征观察:分别挑取细粉和超微粉
少许, 置载玻片上, 蒸馏水湿润, 水合氯醛液透化装
片,稀甘油固定后置显微镜下,显微观察、摄影、测
量、描绘。细粉观察目镜 ×10,物镜 ×10, 超微粉观
察目镜 ×10,物镜 ×40。
3 实验结果
3. 1 扫描电镜观察显示, 超微粉颗粒均匀, 无原药
材形貌特征 (图 1)。
1 六味地黄超微粉体的扫描电子显微照片
3. 2 显微观察[ 4]发现,两种粉体的显微特征有很大
区别: 细粉可见淀粉粒三角状卵形或矩圆形, 直径
24~40 Lm,脐点短缝状或人字状, 草酸钙针晶束存
在于薄壁细胞内或散在 (山药) ; 不规则分枝状团块
无色, 遇水合氯醛溶化, 菌丝无色, 直径 4~6 Lm
(茯苓) ;薄壁组织灰棕色至黑棕色, 细胞多皱缩, 内
含棕色核状物 (熟地) ;草酸钙簇晶存在于薄壁细胞
中, 有时数个排列成行 (丹皮) ; 果皮表皮细胞橙黄
色, 表面观类多角形, 垂周壁略连珠状增厚 (山茱
萸) ; 薄壁细胞类圆形, 有椭圆形纹孔集成纹孔群
(泽泻)。(取上述细粉研磨,过 200 目筛,得极细粉。
取极细粉显微观察, 结果相同) (图 2)。
超微粉已无完整组织细胞,淡黄色、棕黄色、棕
色小颗粒不规则, 充满视野, 直径 7~15 Lm; 浅灰
色, 无色小颗粒不规则, 直径 7~15 Lm; 偶见石细
胞, 纤维和导管碎片,直径最大为 50 Lm;可见草酸
钙结晶体 (图 3)。
1-薄壁组织碎片 (地黄) 2-石细胞 (山茱萸) 3-草酸钙
簇晶 (山茱萸、牡丹皮) 4-网纹、具缘纹、螺纹导管 (地
黄、泽泻、山茱萸) 5-菌丝团块 (茯苓) 6-草酸钙针晶束
(山药) 7-淀粉粒 (山药) 8-草酸钙方晶 (地黄) 9-表皮
细胞 (山茱萸表面观) 10-淀粉粒 (牡丹皮、泽泻) 11-中
柱薄壁组织碎片 (泽泻)
图 2 六味地黄细粉显微观察图
1-淀粉粒 (偶见) 2-草酸钙针晶碎片 (偶见) 3-导管碎片 (偶见)
4-石细胞 (偶见) 5-纤维碎片 (偶见) 6-小颗粒 (充满视野)
图 3 超微粉显微观察图
3. 3 细粉与超微粉显微特征主要区别:见表 1。
4 讨论
本文依据中药方剂合煎的原理, 对六味地黄复
方进行混合粉碎加工。由观察结果可知,超微细粉体
中基本无细胞形式存在, 说明其组织中各类细胞均
被破壁,此时细胞内的各类成分应呈释放状态,其中
(下转第 568页)
·561·中草药 Chinese T radit ion al and Herbal Dr ugs 2002年第 33卷第 6期
轴浆流的阻滞, 又可造成视网膜等处的缺血, 灯盏细辛可以
使高眼压状态下的 RGCs 形态及密度均得到较好地保
存[ 19]。上述实验性高眼压模型, 经用灯盏细辛注射液治疗 20
d,轴浆运输可以部分恢复, 40 d 后恢复明显, 表现为被标记
的 RGCs 数明显增多, 灯盏细辛可能使某些濒临死亡的
RGCs 轴索恢复轴浆运输,从脑内靶细胞传出的神经营养信
号或靶组织分泌的神经营养因子能顺利到达 RGCs 胞体, 从
而避免了部分 RGCs 的死亡。灯盏细辛对 RGCs 或视神经的
保护作用是通过多种途径实现的[ 20]。
3. 6 对肝脏的作用: 灯盏花注射液不但能减轻四氯化碳对
大鼠肝脏的炎症反应、减轻转氨酶代谢异常及蛋白代谢的异
常程度, 还减轻了四氯化碳所致大鼠肝脏纤维化的进展程
度, 明显地抑制了大鼠血清和肝组织匀浆中透明质酸和层粘
蛋白的含量[ 21]。
4 小结
目前,对于灯盏花的化学组成已经有了比较全面的研
究, 但其药理作用的研究还不够完善,特别是在细胞水平和
分子水平上对其作用机制的研究尚待进一步深入,灯盏花在
动物及人体的药代动力学研究几乎为空白,灯盏花新剂型的
研究也有待加强。
参考文献:
[ 1] 张德成,金吉琴, 刘星楷,等 . 灯盏花化学成分的研究Ⅰ. 一
个新黄酮葡萄糖醛甲酸酯苷的分离和鉴定 [ J ] . 中草药,
1985, 16( 9) : 24.
[ 2] 胡昌奇,张德成,华 云,等 . 灯盏花化学成分的研究Ⅱ[ J] .
中草药, 1985, 16( 10) : 12.
[ 3] 岳建民,赵勤实, 林中文,等 . 灯盏细辛中酚类化合物的研究
[ J ] . 植物学报, 2000, 42( 3) : 311-315.
[ 4] 张卫东,陈万生, 王永红,等 . 灯盏花黄酮苷化学成分的研究
[ J ] . 中草药, 2000, 31( 8) : 565-566.
[ 5] 张卫东,陈万生,孔德云,等 . 灯盏细辛化学成分的研究[ J] .
中国药学杂志, 2000, 35( 8) : 514-516.
[ 6] 林泳月,李文光 . 灯盏花素及其制剂中的含量测定 [ J ] .中成
药研究, 1985, 5: 10
[ 7]  李守拙,李沈明,范书铎,等 . 黄芩茎中野黄芩苷含量测定
[ J] .中草药, 2000, 31( 12) : 910.
[ 8] 曲 峻,王义明,罗国安,等 . LC/ M S/ MS 的多反应监测方法
定量测定灯盏乙素[ J ] . 药学学报, 2000, 35( 2) : 139-141.
[ 9] 帅 杰,董为伟 . PKC抑制剂灯盏花素对缺血/再灌流脑损害
的作用研究[ J] . 中国药理学通报, 1998, 14( 1) : 75-77.
[ 10] 陈小夏,何 冰,杜淇璋,等 . 灯盏花素对缺血再灌注大鼠脑
组织 AT Pase 活性的保护作用 [ J] . 中药新药与临床药理,
1998, 9( 4) : 214-216.
[ 11] 李 浩,陈宇春 . 云南灯盏花注射液治疗脑梗塞的临床研究
[ J] . 中药新药与临床药理, 1998, 9( 3) : 141-143.
[ 12] 盛 净,徐济民,杨菊贤,等 . 灯盏细辛对犬急性心肌缺血时
血小板聚集功能、T xB2和 6-酮-PGF1A的影响[ J] . 中华心血
管杂志, 1995, 23( 1) : 53-55.
[13] 盛 净,赵佩琪,许左隽,等 . 灯盏细辛干预血小板、凝血功能
对急性冠状动脉血栓形成后溶栓的影响 [ J] . 中华心血管杂
志, 1999, 27( 2) : 115-117.
[ 14] 黄震华,徐济了,乐忠庆,等 . 灯盏花注射液对家兔血液粘度
的影响[ J] . 中成药研究, 1987, 11: 25.
[ 15]  马春蓉 . 灯盏花注射液治疗高粘滞综合征 51例疗效观察
[ J] .川北医学院学报, 1999, 14( 1) : 70.
[ 16] 陈一岳,王胜涛,曾文珊,等 . 灯盏花素对大鼠主动脉肌环的
松弛作用[ J ] . 中药新药与临床药理, 1994, 5( 2) : 15-19.
[17] 王丽娜,程嘉伦 . 灯盏花素注射液治疗冠心病 30例疗效观察
[ J ] . 现代中西医结合杂志, 1999, 8( 7) : 1072.
[ 18] 贾莉君,刘忠浩,罗学港,等 . 青光康注射液对急性实验性高
眼压大鼠视网膜节细胞代谢的作用 [ J ] . 中华眼科杂志,
1995, 13( 2) : 129-132.
[ 19] 朱益华,蒋幼芹,刘忠浩,等 . 灯盏细辛对高眼压鼠视网膜神
经节细胞超微结构的影响[ J] . 湖南中医杂志, 2000, 16( 3) :
71-72.
[ 20] 朱益华,蒋幼芹,刘忠浩,等 . 灯盏细辛注射液对鼠实验性高
眼压视神经轴浆运输的影响 [ J ] . 中华眼科杂志, 2000, 36
( 4) : 289-291.
[ 21] 李文凡,白 娟,王立荣,等 . 灯盏花对实验性肝纤维化大鼠
血清和肝匀浆中透明质酸和层粘蛋白含量的影响 [ J] . 兰州
医学院学报, 1999, 25( 6) : 28-30.
  (上接第 561页)
表 1 细粉与超微粉显微特征比较表
显微特征 细 粉 超微细粉体
薄壁组织碎片 (地黄) 数十个排列 未见
果皮表皮细胞 (山茱萸) 多见 未见
薄壁细胞及草酸钙结晶 (山茱萸) 多见 未见
石细胞群 (山茱萸) 多见 偶见单细胞
网纹具缘纹导管 (山药) 多见,直径 30~90 Lm 偶见碎片
草酸钙针晶束 (山药) 多见,成束长 80~240 Lm 偶见碎片
草酸钙簇晶 (牡丹皮) 多见,排列成行 未见
薄壁细胞 (泽泻) 类圆形,有椭圆形纹孔集成纹孔群 未见
菌丝、团块 (茯苓) 多见 未见
的水不溶性大分子有效成分, 极有可能在混合粉碎
的过程中通过药材中某些物质的作用,增加同水的
亲和力,从而简化提取或机体吸收过程。粉体物理特
性的改变对有效成分溶出特性的影响及对其药动学
和药效学的影响, 我们将进行深入地研究和探讨。
参考文献:
[ 1] 王爱武,吕文海,耿 晖 . 超微粉碎在中药生产中应用概况及
展望[ J] . 时珍国医国药, 2000, 11 ( 7) : 669.
[ 2] 何 煜,郭 琪,杜晓敏 . 中药细胞级微粉碎对体内吸收的影
响[ J] . 中成药, 1999, 21 ( 11) : 601-602.
[ 3]  宋丽丽,郭淑丽,李 勉 . 蒲公英超微细粉体显微特征观察
[ J] .河南大学学报 (医学科学版) , 2001 ( 1) : 31-33.
[4] 中国药典[ S ] . 2000年版 . 一部 .
·568· 中草药 Chinese T radit ion al and Herbal Dr ugs 2002年第 33卷第 6期