全 文 ：4. 3　检测波长选定 UV 360 nm为大多数黄酮苷类
化合物的特征波长 ,也是芦丁的长波最大吸收波长。
参考文献:
[1 ]　游　松 ,姚新生 ,崔承彬 ,等 .银杏叶中银杏内酯的分离与结构
测定 [ J] .中国药物化学杂志 , 1995, 5( 4): 258-265.
[2 ]　游　松 ,姚新生 ,崔承彬 ,等 . 银杏叶中金松双黄酮的核磁共振
谱分析 [ J] .沈阳药学院学报 , 1991, 8( 2): 124-128.
[3 ]　 Sticher O. Quali ty of Gin kgo p reparations [ J] . Plan ta Medica,
1993, 59: 2.
黄芩苷稳定性研究
于波涛 ,张志荣* ,刘文胜 ,王　平* * ,杨　婷* * *
(四川大学华西药学院 ,四川 成都　 610041)
摘　要: 目的　研究黄芩苷在不同条件下的稳定性。方法　采用经典恒温法考察黄芩苷在不同 p H值水溶液、甲醇、
乙醇和氯仿以及小鼠肺匀浆、小鼠肝匀浆、小鼠血浆和小牛血清中的稳定性。 结果　黄芩苷在酸性环境中稳定 ,在
碱性环境中不稳定 ,在上述有机溶剂中稳定 ,而在上述生物样品中不稳定。 结论　黄芩苷在不同条件下稳定性不
同 ,在实际应用中应加以考虑。
关键词: 黄芩苷 ;稳定性 ;反相高效液相色谱法 ;经典恒温法
中图分类号: R286. 01　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 03 0218 03
Studies on stability of Baicalin
YU Bo-tao, ZHANG Zhi-rong, LIU Wen-sheng , W ANG Ping , Y ANG Ting
( Huaxi School of Pha rmacy , Sichuan Univ e rsity , Chengdu Sichuan 610041, China)
Abstract: Object　 To investiga te the stability of baicalin in dif ferent condi tions. Methods　 The sta-
bi li ty of baicalin in w ater wi th di fferent pH values, methanol , ethanol, chlo rofo rm and in the mouse lung
homogenate, mouse liv er homogenate, mouse plasma and bovine serum was investig ated by the classical
isothermal method. Results　 The experiments show ed the baicalin w as stable in acidic w ater and these o r-
ganic solutions, but unstable in ba sic w ater and these bio logical media. Conclusion　 The stabi li ty of
baicalin in dif ferent media w as dif ferent , w hich should be considered in practice.
Key words: baicalin; stability; RP-HPLC; classical isoth erma l method
　　黄芩苷 ( baicalin)为黄酮类化合物 ,主要来源于
唇形科植物黄芩 Scutel laria baicalensis Georgi ,具
有抗菌、抗病毒、抗炎和抗过敏的药理作用。根据黄
芩苷的性质 [1 ] ,本研究设计并考察其在水溶液、有机
溶剂和生物样品中的稳定性 ,希望能为原料药的提
取、制剂的生产和体内外实验条件的筛选提供科学
依据。 目前尚未见这方面的报道。
1　实验材料与色谱条件
1. 1　仪器: Shimadzu 10ATVP型高效液相色谱仪 ,
CLASS-V P 5. 0色谱数据处理工作站 ,日本岛津 ;
Sar to rius BP211D型电子分析天平 ,德国赛多利斯 ;
T GL-16G型台式高速离心机 ,上海医用分析仪器
厂 ; QL-901型旋涡混合器 ,江苏海门麒麟医用仪器
厂 ; p HS-25型 pH计 ,上海精科雷磁。
1. 2　样品:黄芩苷原料 (成都华福来制药厂提供 ) ;
黄芩苷对照品 (中国药品生物制品检定所 ,批号为
0175-9909)。
1. 3　试剂:甲醇、乙醇、氯仿均为色谱纯 ;磷酸盐缓
冲液 ( A液:取磷酸 8. 3 mL加水至 500 mL; B液: 取
Na2HPO4 71. 63 g ,加水使溶解成 1 000 m L;取 A、 B
不同体积精确配制成 pH值分别为 2. 0, 3. 0, 4. 0,
5. 0, 6. 0, 7. 0, 7. 4, 8. 0的溶液 ) ;磷酸二氢钠缓冲液
( PBS) (用磷酸调 pH值为 4. 0)。
1. 4　材料:昆明种小鼠 (华西医科大学动物实验中心
提供 )肺、肝匀浆 (取健康小鼠肺、肝组织 ,置匀浆器
中 ,加 2倍重量的 pH= 4. 0的 PBS匀浆即得 ) ;昆明
种小鼠血浆 (取健康小鼠血液于肝素管中 ,振荡 ,
10 000 r /min离心 10 min,取上清液即得 ) ;新生小
·218· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 3期
收稿日期: 2001-08-20基金项目:国家杰出青年科学基金资助项目 ( 39925039)作者简介:于波涛 ( 1965-) ,男 ,江苏涟水人 ,博士 ,主要从事靶向制剂的研究 ,近年来在核心期刊上发表论文 10余篇。
Tel: ( 028) 5503808　 E-mai l: yub t@ 263. net
* 联系人　　* * 成都中医药大学药学院 2001届毕业生　　* * * 本校 2001届毕业生
牛血清 (成都哈里生物工程有限公司 ,批号: 010210)。
1. 5　色谱条件: 参照文献 [2 ]确定色谱条件如下: 分析
柱: Shim-pack CLC-ODS C18 ( 5μm, 150 mm× 6. 0
mm );预柱: YWG-C18色谱柱 ( 10μm, 10 mm× 6. 0
mm)流动相: 磷酸盐缓冲液 ( p H= 3. 0)∶甲醇 ( 50∶
50) ;流速: 1 mL /min;柱温: 30℃ ,检测波长: 278 nm。
2　实验方法
2. 1　黄芩苷标准曲线的制备:精密称量黄芩苷对照
品 2. 5 mg ,适量甲醇溶解 ,并定容至 25 mL容量瓶
中 ,制得 100μg /mL的黄芩苷贮备溶液。精密吸取
黄芩苷贮备溶液 0. 05, 0. 10, 0. 20, 0. 40, 0. 80,
1. 60, 3. 20, 6. 40 mL分别置于 10 mL容量瓶中 ,加
甲醇至刻度 ,配成一系列对照品溶液。取上述黄芩苷
对照品溶液各 10μL,按上述色谱条件进样分析 ,测
定峰面积。以峰面积 ( A )与黄芩苷浓度 (C )进行回归
处理 ,得直线方程: A= 10 740+ 32 303 C (r =
0. 999 4) ,线性范围为 0. 5～ 100μg /mL。
2. 2　精密度考察:取不同浓度黄芩苷对照品溶液
32. 0, 8. 0, 2. 0μg /mL于日内及日间重复进样分
析 ,结果见表 1。
2. 3　黄芩苷水溶液在不同 pH值、不同温度下稳定
性实验: 称取黄芩苷样品 8 mg 8份 ,分别加入不同
pH值的磷酸盐缓冲液 100 mL,溶解后 ,用微孔滤膜
过滤 ,取续滤液灌装于 2 mL安瓿中 ,熔封。 取不同
pH值安瓿一支按标准曲线项下测定方法测定峰面
积 ,即得初始浓度 ,同时将各个 pH值安瓿分别置于
( 80± 1)℃ , ( 70± 1) ℃ , ( 60± 1)℃ , ( 50± 1)℃恒
温水浴中 ,于不同时间点取样 , HPLC法测定 ,得色
谱峰峰面积 ,以内标法计算药物含量。以药物残留百
分比自然对数值对时间作图 ,见图 1。按一级动力学
方程求得同一温度、同一 pH值的反应常数 k ,结果
见表 2。
表 1　黄芩苷精密度测定结果 ( n= 5)
浓　度
(μg /mL)
日　内
测定值 (μg /mL) RSD (% )
日　间
测定值 (μg /mL) RSD (% )
　　2. 0 　　　 1. 97 5. 17 　　　 1. 94 5. 34
8. 0 8. 01 2. 30 8. 06 3. 26
32. 0 31. 02 2. 46 30. 34 2. 27
A-pH 2. 0　 B-pH 3. 0　 C-pH 4. 0　 D-pH 5. 0
E-pH 6. 0　 F-pH 7. 0　 G-pH 7. 4　 H-pH 8. 0
图 1　黄芩苷在 50℃下不同 pH值
水溶液中的降解曲线
表 2　黄芩苷水溶液水解一级动力学方程的反应常数 k
温　度 (℃ ) pH
2. 0 3. 0 4. 0 5. 0 6. 0 7. 0 7. 4 8. 0
50 0. 006 2 0. 002 1 0. 002 2 0. 005 7 0. 022 7 0. 031 1 0. 511 7 0. 743 0
60 0. 015 7 0. 003 9 0. 005 6 0. 018 7 0. 073 3 0. 170 2 1. 405 3 0. 885 9
70 0. 037 5 0. 006 9 0. 013 6 0. 057 5 0. 220 9 0. 842 1 3. 638 5 1. 045 4
80 0. 085 3 0. 011 8 0. 031 6 0. 165 6 0. 625 8 3. 806 3 8. 926 1 1. 222 1
　　根据 Arrhenius公式 ,求得同一 pH值下直线
方程及 t0. 9 ,结果见表 3。
表 3　黄芩苷水溶液水解 Arrhenius方程及 t0.9
pH Arrh enius方程 r k× 10
4
( T= 298 K)
t0. 9( h)
2. 0 lnk= 25. 73- 9 941. 4 /T 0. 993 5 4. 84　 1 122. 5
3. 0 lnk= 13. 93- 6 473. 8 /T 0. 999 8 4. 13　 1 316. 2
4. 0 lnk= 25. 48- 10 213. 9 /T 0. 996 8 1. 52　 3 576. 7
5. 0 lnk= 34. 51- 12 816. 5 /T 0. 994 1 2. 03　 2 680. 6
6. 0 lnk= 35. 24- 12 605. 2 /T 0. 992 9 7. 40　 734. 3
7. 0 lnk= 53. 80- 18 265. 4 /T 0. 994 6 5. 58　 973. 1
7. 4 lnk= 32. 97- 10 865. 7 /T 0. 998 2 304. 46　 17. 8
8. 0 lnk= 5. 55- 1 891. 2 /T 0. 995 0 4 546. 50　 1. 2
2. 4　黄芩苷在甲醇、乙醇及氯仿中的稳定性:取适
量黄芩苷样品分别溶于甲醇、乙醇及氯仿 ,封装于西
林瓶中 ,置 ( 70± 1) ℃恒温水浴中 ,分别于 0, 1, 3, 5
h取样 ,按标准曲线项下测定 ,各时间点残存黄芩苷
百分比见表 4。
表 4　 70℃下甲醇、乙醇及氯仿中
黄芩苷降解残存百分比 (% )
溶　剂 取样时间 ( h)
0 1 3 5
甲　醇 100 99. 8 98. 5 97. 6
乙　醇 100 99. 3 98. 7 95. 8
氯　仿 100 100. 1 99. 1 99. 1
2. 5　黄芩苷在小鼠肺、肝匀浆、血浆及小牛血清中
稳定性实验。
2. 5. 1　空白实验:取小鼠肺、肝匀浆、血浆及小牛血
清各 1 mL加甲醇 5 m L,混匀振荡 15 min, 10 000
·219·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 3期
r /min离心 10 min。取上清液 10μL进样 , HPLC图
谱见图 2。结果表明:空白小鼠肺匀浆、肝匀浆、血浆
及小牛血清均无干扰。 采用本法可将黄芩苷与组织
杂质完全分离。
A-小鼠肝匀浆　 B-小鼠肺匀浆　 C-小鼠血浆
D-小牛血清　* -黄芩苷
图 2　黄芩苷在不同生物样品中的 HPLC图
2. 5. 2　稳定性实验:称取黄芩苷约 1 mg 5份 ,分别
加入小鼠肺、肝匀浆、血浆及小牛血清 2 mL,振荡 2
min,封装于西林瓶中 ,置 ( 37± 1)℃恒温水浴中。于
各时间点精密吸取 0. 2 mL,加甲醇 1. 0 mL,振荡
10 min, 10 000 r /min离心 15 min。取上清液 10μL
进样 , HPLC测定峰面积。以残留药物百分比自然对
数值对时间做图 ,结果见图 3。
A-小鼠血浆　 B-小牛血清　 C-小鼠肺匀浆　 D-小鼠肝匀浆
图 3　 37℃下黄芩苷在不同生物样品中的稳定性
3　讨论
黄芩苷为一弱酸性化合物 ,与酸碱作用具有多
位反应点。由图 4可知在 pH值为 2. 0～ 3. 0,速度常
数 k值趋小 ,可推断其反应机制为酸催化的水解反
应 ,如图 5所示:
在 pH值为 3. 0～ 7. 4,速度常数 k值显著趋大 ,
可能为葡萄糖醛酸的羧基与碱的反应 ,其机制可能
A-50℃　 B-60℃　 C-70℃　 D-80℃
图 4　黄芩苷水溶液 pH-速率图
图 5　黄芩苷 pH值为 2～ 3时的反应机制
如图 6所示:
图 6　黄芩苷 pH值为
3. 0～ 7. 4时的
反应机制
在 pH值为 7. 4～
8. 0,速度常数 k值趋小 ,
并且在 pH值为 8. 0时各
温度下速度常数趋于同
一数值 ,提示其原因可能
为黄芩苷苷元母核在强
碱性溶液中迅速开环形
成查儿酮 ,机制如图 7所示:
图 7　黄芩苷 pH值为 7. 4～ 8. 0时的反应机制
因此 ,黄芩苷在趋碱性溶液中极不稳定 ,在 pH
值大于 3时稳定性也有所下降 ,故在不考虑其他因
素作用下在提取和制剂的生产中其 pH值应控制在
3～ 4之间。黄芩苷在有机溶剂中的稳定性较好 ,提
示体内分析中 ,萃取溶剂选择余地较大 ;黄芩苷在生
物样品中稳定性较差 ,尤其在肝匀浆中为最 ,似乎与
肝组织中含有多种且数量巨大的肝药酶有关 ,故在
体内分析时应注意酶的影响。
参考文献:
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·220· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 3期