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酸枣仁与缅枣仁的蛋白质分析
李续娥 1 ,李维凤 2 ,裴渭静 2
( 1. 华南师范大学生物技术研究所 ,广东 广州　 510631; 2. 西安交通大学 ,陕西 西安　 710061)
摘　要: 目的　初步探讨酸枣仁与缅枣仁的蛋白质差异。方法　用凯氏定氮法测定蛋白质的含量 ;用酸水解法测定
蛋白质的氨基酸组成 ;用十二烷基硫酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳 ( SDS-PAGE)和毛细管区带电泳 ( CZE)分析蛋白质
的组分。结果　酸枣仁与缅枣仁的蛋白质含量分别为 36. 13%和 41. 58% ;除缅枣仁蛋白质的缬氨酸和蛋氨酸明显
高于酸枣仁外 ,蛋白质的其他氨基酸的组成差别不明显 ; SDS-PAGE图谱明显不同的是 ,酸枣仁有相对分子质量为
39 800的蛋白质 ,缅枣仁为 50 100的蛋白质 ; CZE图谱的区别是 ,酸枣仁为 3. 1 min的峰 ,缅枣仁含有一个迁移时间
为 4. 8 min的峰。结论　缅枣仁的蛋白质含量较酸枣仁略高 ,且缬氨酸和蛋氨酸的含量明显高于酸枣仁。两种枣仁
的 SDS-PAGE和 CZE图谱均有明显的差异存在。
关键词: 酸枣仁 ;缅枣仁 ;蛋白质 ;毛细管区带电泳
中图分类号: R286. 02　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 01 0026 03
Analysis of proteins in seed of spine date and seed of Indian jujube
LI Xu-e1 , L I W ei-feng2 , PEI Wei-jing2
( 1. Institute o f Biological Tech no lo gy , South China No rmal Univ ersity, Guang zhou Guangdong 510631, China;
2. Xi an Jiao tong Univ ersity , Xi an Shanx i 710061, China )
Abstract: Object　 To preliminari ly study the di fference of pro teins in the seed of spine da te and the
seed of Indian jujube. Methods　 Protein contents w ere measured w ith Kieldahl method. Amino acids con-
sti tuting the protein w ere determined by means o f acidoly sis. The pro teins w ere analy zed using sodium do-
decyl sulfate-polyacrylamide gel elect ropho resis ( SDS-PAGE) and capilla ry zone elect ropho resis ( CZE) .
Results　 Contents of proteins in the seed o f spine date and the seed of Indian jujube w ere 36. 13% and
41. 58% , respectiv ely. The content of v aline and methionine in the seed o f Indian jujube w ere significantly
more than tha t in the seed of spine da te remarkably , and the contents o f o ther amino acids f rom the seed of
spine da te and seed of Indian jujube w ere simi lar. Thei r SDS-PAGE spect ra show ed that th e seed of spine
date contained a protein wi th molecular w eight 39 800 and the seed of Indian jujube contained a pro tein
w ith molecular weight 50 100. In CZE spect ra fo r the seed of spine date, there w as a peak at the mobi le
time o f 3. 1 min and in CZE spect ra f rom the seed of Indian jujube, there was a peak at the mobi le time of
4. 8 min. Conclusion　 Pro tein content in the seed of Indian jujube is mo re than that in the seed of spine
date; The content of v aline and methionine in the seed o f Indian jujube is more than tha t in the seed of
spine date remarkably. The spect ra of SDS-PAGE and CZE for the seed o f spine date are dif ferent f rom
that for the seed of Indian jujube clearly.
Key words: the seed of spine date; the seed o f Indian jujube; pro tein; capilla ry zone electrophoresis
( CZE)
·26· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 1期
收稿日期: 2001-01-02作者简介:李续娥 ( 1964-　 ) ,女 ,陕西人 ,副教授 ,博士 ,先后就读于西安医科大学、西安交通大学 ,曾工作于天津药物研究院、陕西兴平药检所、西安交通大学化工学院 ,现在华南师范大学生物技术研究所做博士后研究 ,研究方向为中药有效成分的研究。
Tel: 020-85126353
　　酸枣仁为鼠李科植物酸枣 Ziziphus jujuba
Mill. v ar. spiosa ( Bunge) Hu ex H. F. Chou的干
燥成熟种子。性平 ,味甘、酸。能补肝、宁心、敛汗、生
津 [1 ]。 药理实验表明有镇静、催眠、强心、抗心律失
常、降血压、降血脂、改善心血管微循环及抗衰老等
作用 [ 2 ]。缅枣仁主要为鼠李科植物滇刺枣 Z. mauri-
t iana Lam.作砧木与同属植物滇枣 In curva Roxb.
作接穗嫁接后之果实的种子 [3 ]。多年来 ,由于酸枣仁
供应不足 ,有用缅枣仁代替酸枣仁使用 [2 ]。因为种子
蛋白质是稳定的遗传表达产物 [4 ] ,故本文将分析比
较两种枣仁蛋白质的含量、氨基酸组成、十二烷基硫
酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳 ( SDS-PAGE)图谱和毛
细管区带电泳 ( CZE)图谱 ,为考察缅枣仁的药用质
量、扩大药源提供参考。
1　仪器和药材
日本 V S-KT P自动定氮仪 , 121MB氨基酸自
动分析仪 ( Beckman) , 1229型高效毛细管电泳仪
(北京新技术应用研究所 )。酸枣仁 (产地陕西 )为鼠
李科植物酸枣 Ziziphus jujuba Mill. v ar. spiosa
( Bunge) Hu ex H. F. Chou的干燥成熟种子。缅枣
仁 (产地缅甸 )为鼠李科植物滇刺枣 Z . maurtit iana
Lam.作砧木与同属植物滇枣 In curva Roxb.作接
穗嫁接后之果实的种子。皆由陕西省药材公司提供 ,
西安医科大学药学院李映莉教授鉴定。
2　方法及结果
2. 1　蛋白质含量:采用凯氏定氮法测定两种药材的
蛋白质含量 [5 ]。 结果: 酸枣仁的蛋白质含量为
36. 13% ,缅枣仁为 41. 58%。缅枣仁的蛋白质含量是
酸枣仁的 1. 15倍。
2. 2　蛋白质的氨基酸组成: 用酸水解法 ( 6 mol /L
的 HCl, 110℃水解 22 h)分析两种枣仁的蛋白质氨
基酸组成 [5 ]。结果见表 1。
表 1　酸枣仁与缅枣仁蛋白质的氨基酸组成 ( g /100g)
氨基酸 天冬氨酸 苏氨酸 丝氨酸 谷氨酸 脯氨酸 甘氨酸 丙氨酸 胱氨酸 缬氨酸
酸枣仁 3. 843 1. 065 1. 395 9. 071 3. 145 1. 769 1. 366 0. 870 1. 814
缅枣仁 3. 686 1. 012 1. 429 10. 491 3. 536 1. 857 1. 450 0. 973 2. 688
缅枣仁 /酸枣仁 0. 959 0. 950 1. 024 1. 157 1. 124 1. 050 1. 061 1. 118 1. 482
氨基酸 蛋氨酸 异亮氨酸 亮氨酸 酷氨酸 苯丙氨酸 赖氨酸 组氨酸 精氨酸
酸枣仁 0. 149 1. 072 2. 298 0. 772 1. 127 1. 121 0. 765 3. 336
缅枣仁 0. 217 1. 137 2. 598 0. 780 1. 137 1. 013 0. 870 3. 844
缅枣仁 /酸枣仁 1. 456 1. 061 1. 131 1. 010 1. 009 0. 904 1. 137 1. 152
A-标准蛋白 (从上到
下 ): 牛血清白蛋白
( 66. 2 k u)、牛碳酸酐
酶 ( 31. 0 ku )、鸡蛋清
溶菌酶 ( 14. 4 k u)
B-酸枣仁　 C-缅枣仁
图 1　两种枣仁的
SDS-PAGE图谱
2. 3　 SDS-PAGE: 称量已脱脂
的粉末状药材适量 ,按 50 mg样
品加 1 mL缓冲溶液的比例 ,加样
品缓冲液 ( 10%甘油 , 0. 2% SDS,
pH6. 8、 0. 1 mo l /L的 Tris-HCl)
搅动 ,水浴加热 5 min,离心 ,取
上清液 ,进行 SDS-PAGE[6 ]。其
结果见图 1。
2. 4　 CZE
2. 4. 1　蛋白质的提取: 取药材
粉末 ,用正己烷脱脂 2次 ,风干。
按 1 g∶ 50 mL的 比 例 加 入
50 mmol /L ( pH7. 8)的 KH2 PO4-
NaOH缓冲液 ,搅拌提取 10 h
( 4℃ ～ 7℃ ) , 离 心 20 min
( 7℃ , 10 000 r /min) ,得上清液
(保留 )及残渣。残渣中再加入上
述缓冲液适量 ,搅拌提取 3 h
( 4℃～ 7℃ ) ,离心 (条件同前 ) ,得残渣 (弃去 )及上
清液 ,合并上清液 ,在不断搅拌下缓慢加入粉末状硫
酸铵至 100%饱和度 ,离心 (条件同前 ) ,得蛋白质沉
淀。 将蛋白质转移至透析袋中 ,用纯水透析 48 h
( 4℃ ) ,其中每隔 4～ 8 h换水 1次。最后进行真空冰
冻干燥 ,即得。
2. 4. 2　 CZE条件:毛细管: 50μm× 60 cm熔融石英
管 ;缓冲液: 50 mmol /L , pH 8. 3的 KH2 PO4 -NaOH
溶液 ;进样: 采用重力法 ,高差 10 cm ,时间 15 s;电
压: 18 kV;温度: 19℃ ;检测波长: 280 nm;灵敏度:
0. 05 A。其结果如图 2。
3　小结与讨论
缅枣仁的蛋白质含量比酸枣仁略高。除缅枣仁
的缬氨酸和蛋氨酸含量明显高出酸枣仁外 ,其他氨
基酸的含量相差不明显。由图 1可知:两种枣仁明显
不同的是 ,酸枣仁有相对分子质量为 39 800的蛋白
质 ,缅枣仁为 50 100的蛋白质。图 2显示:两种枣仁
的 CZE图谱均含有迁移时间为 2. 8, 3. 5, 6. 1和 9. 1
min的峰 ;不同的是缅枣仁的 CZE图谱中含有一个
迁移时间为 4. 8 min的峰 ,酸枣仁为 3. 1 min的峰。
方子年等 [3 ]曾对缅枣仁和酸枣仁的原植物、组
织、薄层层析及药理作用进行了比较研究。结果表明
·27·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 1期
图 2　酸枣仁 ( 1)和缅枣仁 ( 2)的 CZE图谱
两者的显微特征基本相同 ,仅子叶表皮细胞中草酸
钙方晶的含量及细胞的大小、多寡有别 ;薄层层析的
斑点
基本一致 ,只是个别斑点的大小和荧光强度不同 ;在
镇静、催眠方面也有相近的作用。 因此 ,认为缅枣仁
可以代替酸枣仁使用。本研究结果表明 ,缅枣仁与酸
枣仁蛋白质的含量、氨基酸组成、 SDS-PAGE及
CZE图谱 ,在基本相似的基础上 ,尚有个别的差异
存在。可以预见 ,两者在药理毒理作用方面 ,可能存
在较多的相似之处和个别的差异 ,其具体的异同有
待进一步研究。
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悬浮培养过程中碳、氮、磷的补加对南方红豆杉细胞生长影响的研究
胡　萍 ,元英进 ,苗志奇
(天津大学化工学院 天然产物生化工程所 ,天津　 300072)
摘　要: 目的　解决南方红豆杉生长缓慢的问题。 方法　考察红豆杉细胞悬浮培养过程中磷的消耗 ,并研究了碳、
氮、磷对细胞生长及细胞活性的影响。结果　碳源在悬浮培养中期已经消耗殆尽 ,后期碳源的缺乏限制了细胞的生
长。 结论　补加碳源组与对照组相比 ,细胞生长率和细胞密度明显提高 ,其中细胞生长率约提高了 83%。
关键词: 南方红豆杉细胞 ;悬浮培养 ;生长 ;碳源
中图分类号: R284. 2　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 01 0028 04
Effects of fed-batch carbohydrate, nitrogen, phosphorus on
growth of Taxus chinensis var. mairei cell during suspens ion culture
HU Ping , YUAN Ying-jin, M IAO Zhi-qi
( Depa rtment o f Pharmaceutical Engineering , Schoo l of Chemical Engineering and Tech nelog y ,
Tianjin Univ ersity, Tianjin 300072, China )
Abstract: Object　 To so lv e the problem tha t Taxus chinensis var. mairei ( Lemee et Lé v l. ) Cheng et
L. K. Fu grows slow ly. Methods　 The consumption of phospho rus during the cell suspension culture and
the effect o f fed-batch carbohydra te, ni trog en and pho spho rus on cell g row th and living-cel l activi ty w ere
assayed. Results　 The carbohydra te w as exhausted in the middle phase of suspension cul ture, dificiency of
carboh ydra te led to inhibi tion of cell g row th in the late cul ture. Conclusion　 Compared wi th the control
g roup, the cell g row th ra te and the cell densi ty in the fed-batch carbohydrate g roup w ere increased signifi-
cant ly , and the cell g row th rate was up to 83% .
Key words: Taxus chinensis var. mairei ( Lemee et Lé vl. ) Cheng et L. K. Fu; suspension culture;
g row th; carbohydra te
·28· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 1期
收稿日期: 2001-04-14基金项目:天津市重点攻关项目 ( 963107211)和国家教委跨世纪优秀人才培养计划基金资助