全 文 ：图 6　细胞活性随时间变化曲线
表 4　细胞生长统计数据表
组别 生长速率
( g /L· d)
比生长速率
( d- 1)
倍增时间
( d)
干基密度
( g /L)
有机氮 0. 89 0. 064 14 29
无机氮 0. 79 0. 058 16 28
碳源+ 有机氮 1. 58 0. 117 11 45
空白 0. 74 0. 056 18 26
　　从图 6中可以看出 ,在培养的前 10 d各组实验
中细胞活力基本相同 ,约等于接种时的细胞活力。而
在培养的后 10 d,对照组细胞活力迅速下降到一个
较低的水平 ;补加有机氮与补加无机氮实验组中细
胞变化情况相似 ,活力下降的现象均出现在第 12
天 ,表明单独补加氮源对延缓细胞活力下降的作用
有限。 而同时补加碳氮的实验组中细胞活力则继续
保持在高水平上 ,没有出现下降。补充碳源物质才是
抑制对照组中第 10天出现的细胞活力下降的有效
手段。
　　总结以上实验现象 ,可以推测: 培养 10 d后 , B5
培养基中碳源消耗完毕 ,成为抑制细胞生长与细胞
活力下降的主要原因。而此时培养基中氮源还比较
充分 ,补充有机氮和无机氮对细胞生物量的增加和
维持较高的细胞活性没有显著影响。
5　讨论
在南方红豆杉细胞悬浮培养过程中 , B5培养基
中的各元素基本满足细胞生长需要 ,培养中后期氮
源和磷源仍能满足细胞生长代谢的需要 ,因此补充
氮、磷对细胞生长和细胞活力没有显著影响 ;但碳源
物质却消耗完毕 ,成为制约细胞生长的主要因素 ,所
以补充碳源则可以克服在培养后期培养基中出现的
碳源缺乏现象 ,使细胞维持较高的生长速率和细胞
活性 ,为采用流加的方式进行大规模红豆杉细胞悬
浮培养做了初步的尝试。
参考文献:
[ 1 ]　元英进 ,刘家新 ,卢伟伸 . 大规模细胞培养生产紫杉醇的潜
力 .第九届全国化学工程科技报告会论文集 [C ] . 1998.
[2 ]　 Fet t-Neto A G, Melanson S J, Sakata K, et al . Imp roved
g row th and taxol yield in dev eloping cal li of Ta xus cuspid ata
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[ 3 ]　 Fett-Neto A G, Zhang W Y, Dicosmo F. Kin etics of tax ol
production , grow th and nut rien t uptak e in cell s uspensions of
Taxus cuspidata [ J ] . Biotechnolog y and Bioengin eering,
1994, 44( 2) : 205-210.
[ 4 ]　孙敬三 ,桂耀林 .植物细胞工程实验技术 [M ] . 北京: 科学技
术出版社 , 1995.
[ 5 ]　刘家新 . 红豆杉细胞培养 pH值调控与生化反应器操作策略
研究 [D] . 天津大学硕士论文 .
水飞蓟素固体分散体中总黄酮的测定
李凤前 ,胡晋红 ,朱全刚
(第二军医大学长海医院 药学部 ,上海　 200433)
摘　要 :目的　测定水飞蓟素固体分散体制剂中总黄酮。 方法　采用一阶导数紫外分光光度法。 结果　以 1∶ 3,
1∶ 6和 1∶ 9药物 /载体比例处方制成的固体分散体中总黄酮的量分别为 27. 72% 、 15. 59%和 10. 98%。结论　该法
可避开空白 PEG-6000载体对固体分散体中总黄酮测定的干扰 ,操作简便 ,结果准确可靠。
关键词: 水飞蓟素 ;固体分散体 ;黄酮 ;一阶导数紫外分光光度法
中图分类号: R286. 02　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 01 0031 03
Quantitation of flavonoids in s ilymarin loaded solid dispersion system
LI Feng-qian, HU Jin-hong , ZHU Quan-gang
( Depa r tment o f Pha rmaceutical Sciences, Changhai Hospital, Second Milita ry Medica l Univ ersity, Shanghai 200433, China)
·31·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 1期
收稿日期: 2001-03-13作者简介:李凤前 ( 1970～ ) ,男 ,理学博士 ,现于第二军医大学长海医院进行博士后研究 ,研究方向:药物新型给药系统。
Key words: silymarin; so lid dispersion system; f lav onoids; fi rst deriv ativ e ult ravio let spect ro- pho-
tometry
　　水飞蓟素 ( silymarin, 简称 Sily )是从菊科水飞
蓟属植物水飞蓟 Silybum marianum L. Gaer tn.种
子中提取的黄酮木脂体类化合物 ,具有抗肝胆中毒、
保护肝细胞膜和改善肝功能等作用 [1 ] ,对肝纤维化
的防治也有较好疗效。 Si ly难溶于水 ,不利于胃肠道
吸收 ,因此 ,我们采用固体分散技术 ,以水溶性载体
材料聚乙二醇 ( PEG-6000) ,将其制成了固体分散
体 ,以增加 Si ly的溶出 ,提高其口服生物利用度。为
了对 Sily固体分散体进行定量控制 ,选择总黄酮 [ 2]
作为其质控指标之一。 本文建立并采用一阶导数紫
外分光光度法测定固体分散体中总黄酮的含量 ,该
法操作简便 ,结果准确可靠。
1　仪器与试剂
UV-2100紫外分光光度计 (日本岛津 ) ;水飞蓟
素及其对照品由辽宁盘锦华成制药厂提供 ;聚乙二
醇 ( PEG-6000,上海化学试剂公司进品分装 ) ;实验
用水为去离子蒸馏水。
2　实验方法与结果
2. 1　载体材料干扰的排除与测定波长的选择: 以
0. 01 mol /L NaOH溶液为介质 ,配制成一定浓度的
Sily及空白 PEG-6000载体溶液 ,进行紫外扫描 ,结
果见图 1-A。可见 ,空白 PEG-6000载体对 Sily的测
定存在一定干扰 ,故对其进行一阶导数扫描 ,其结果
见图 1-B。 采用一阶导数光谱法 ,可消除空白 PEG-
6000载体对 Sily测定的干扰。通过测定 338 nm处一
阶导数的振辐值 ( H ) ,可对 Si ly固体分散体中的总
黄酮进行含量测定。
a-Sily; b-空白 PEG-6000载体
图 1　紫外光谱图 ( A)与一阶导数紫外光谱图 (B)
2. 2　标准曲线的制备: 精密称取 Si ly对照品
16. 9 mg于 25 mL量瓶中 ,以 0. 01 mol /L NaOH溶
液溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,即得标准溶液贮备液。
分别吸取上述标准贮备液 0. 3, 0. 45, 0. 6, 0. 9和
1. 5 mL移入 50 mL量瓶中 ,以 0. 01 mol /L NaOH溶
液稀释至刻度 ,配制一系列浓度的标准溶液。 在
338 nm波长处 ,分别测定 H ,以|H|对浓度 C进行
线性回归 ,得标准曲线的回归方程: C= 124. 848|H
|- 0. 072 6, r= 0. 999 9,在 4～ 20μg /mL浓度范围
内线性良好。
2. 3　回收率试验:取适量空白 PEG-6000载体 ,分
别置于 50 mL的量瓶中 ,加入标准贮备液 ,以
0. 01 mol /L NaOH溶液配成高、中、低 3种不同浓
度 (模拟处方比例 ) ,充分振摇混匀 ,超声波处理
3 min,过滤 ,弃去初滤液 ,取续滤液照“标准曲线”项
下操作 ,测定总黄酮的浓度 ,与加入浓度进行比较 ,
可得高、中、低浓度的平均回收率分别为: 101. 21% 、
98. 93%和 100. 24% (n= 3) ,说明该法具有较好的准
确性。
2. 4　固体分散体中总黄酮的测定:取 1∶ 3, 1∶ 6,
1∶ 9三种不同药物 /载体比例处方制成的固体分散
体各适量 ,分别精密称取约 30, 50和 60 mg样品 ,置
于 50 mL量瓶中 ,加 0. 01 mol /L NaOH溶液至刻
度 ,充分振摇混匀 ,超声 3 min,过滤 ,弃其初滤液 ,取
续滤液 1. 0 m L移入 10 mL量瓶中 ,以 0. 01 mol /L
NaOH溶液稀释至刻度 ,摇匀 ,按“标准曲线”项下的
方法测定 H ,根据标准曲线回归方程计算固体分散
体中总黄酮所占百分含量 ,结果见表 1。
表 1　固体分散体中所含总黄酮 ( n= 3)
药物 /载体
( w /w )
　总黄酮含量 (% ) R SD (% )
1∶ 3 27. 72 2. 45
1∶ 6 15. 59 2. 56
1∶ 9 10. 98 5. 10
3　讨论
水飞蓟素为混合黄酮类化合物 ,其检测大多采
用薄层扫描法 [3 ] ,该法操作不便 ,条件要求较苛刻 ,
不易控制。HPLC法测定兼具分离功能 ,可检测各单
一组分的含量 ,但水飞蓟素保肝作用的主要组分为
黄酮类化合物 ,因此 ,对总黄酮的测定作为 Sily制
剂的质控指标具有较好的代表性。
直接采用水溶液难于配制 Si ly的标准浓度 ,我
们曾采用吐温 -80、脱氧胆酸钠盐等表面活性剂作为
增溶剂 ,结合超声波分散处理 ,以增加药物的溶解
度 ,但效果不佳。考虑到 Si ly可溶于稀碱液 ,因此采
用 0. 01 mo l /L NaOH溶液作为测定介质。紫外分光
·32· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 1期
光度法操作简便易行 [4 ] ,特别是在处方样品筛选时 ,
操作非常方便 ,大大提高工作效率。一阶导数紫外光
谱法可排除 PEG等载体材料对目标药物测定的干
扰 ,对于 Sily固体分散体质量标准的建立以及随后
的相关基础研究工作具有重要意义。
参考文献:
[ 1 ]　孙铁民 ,李　铣 .水飞蓟素药理研究进展 [ J ] .中草药 , 2000,
31( 3): 229-231.
[2 ]　刘本亮 ,杨　锡 . 薄层扫描法测定益肝灵胶囊中水飞蓟素的含
量 [ J] . 中成药 , 1999, 21( 4): 180-181.
[3 ]　定天明 ,施蕴华 ,田颂九 ,等 . 水飞蓟主要有效成分分离与分析
方法概述 [ J] .中草药 , 1999, 30( 8): 637-638.
[ 4]　胡晋红 ,朱　宇 ,薛佩华 .二阶导数光谱法测定酮洛芬体外经
皮渗透量 [ J ]. 药学学报 , 1997, 32( 7): 542.
瓜蒌中有机氯农药残留量测定研究
薛　健 ,俞敏倩 ,刘惠灵 ,张国良 ,张曙明 ,陈建民
(中国医学科学院 中国协和医科大学药用植物研究所 ,北京　 100094)
摘　要: 目的　测定瓜蒌中有机氯农药残留。方法　利用气相色谱法同时测定瓜蒌中 9种有机氯农药的残留量。结
果　方法回收率为 78. 0% ～ 102. 0% , RSD < 10. 0% ,所测 10个样品中总 BHC及总 DDT含量 < 0. 05μg /g。结论
测定结果可见本法符合农药残留分析要求 ,但应制定相应限量标准。
关键词: 瓜蒌 ;有机氯农药 ;残留量 ;气相色谱法
中国分类号: R286. 02　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 1 0033 02
Determination of residue of organic chlorine pesticides inFructus Tr ichosanthis
XU E Jian, YU Min-qian, LIU Hui-ling , ZHANG Guo-liang , ZHANG Shu-ming, CHEN Jian-min
( Institute o f Medicinal Plant Development, Chinese Academy of Medical Science and
Peking Union Medical Co lleg e, Beijing 100094, China)
Key words: Fructus Trichosanthis; o rganic chlorine pesticides; residure; GC
　　瓜蒌为常用药材 ,有关瓜蒌的农残测定方法尚
未见报道。
1　实验部分
1. 1　仪器及试剂: Varian 6000气相色谱仪 ,配备
63Ni电子捕获检测器 , 4270记录仪 ; SE-54石英毛细
管柱 ( 30 m× 0. 32 mm× 0. 25μm,迪马公司 ) ;
T-310型超声波清洗器 (德国 )。
农药标准品混合样 (α-BHC、β -BHC、γ-BHC、
PCNB、 δ-BHC、 PP’ -DDE、 PP’ -DDD、 O P’ -DDT、
PP’ -DDT含量均为 100μg /m L,国家标准物质研究
中心提供 )。 试剂均为分析纯 ,水为重蒸水 ,正己烷
50 m L浓缩为 5 mL经气相色谱仪检查无干扰峰。
瓜蒌样品共 10个 ,由北京中医研究院中药研究
所曹志茂教授提供。
1. 2　提取、净化: 样品阴干后粉碎 ,过 20目筛 ,精密
称取混匀的样品 2 g于 100 mL具塞三角瓶中 ,加入
20 m L水浸泡过夜 ,加 40 mL丙酮并称重 ,超声波提
取 20 min,补足重量 ,再加入 6 g NaCl、 30 mL二氯
甲烷并称重 ,超声 15 min,补足重量 ,静置 (过夜 )使
两相完全分层 ,取有机相于 100 mL具塞三角瓶杯
中 ,加入适量无水硫酸钠脱水 ,精确取脱水后的有机
相 35 mL于 100 m L蒸馏瓶中 , 40℃水浴浓缩 ,用正
己烷替换数次 ,浓缩近干。将浓缩后的残渣用正己烷
定量转移至 10 m L具塞刻度试管中定容至 5 mL,小
心加入 1 mL浓硫酸 ,振摇 1 min,静置过夜 ,精密吸
取上清液 4 mL于 5 m L刻度离心管中 ,水浴 (低温 )
或自然挥发至 1 mL备用。
1. 3　色谱条件:载气:高纯氮 ,柱前压: 59 k Pa;进样
口温度: 210℃ ,检测器温度: 300℃ ;柱升温程序:
140℃→ 210℃ ( 10℃ /min)→ 250℃ ( 8℃ /min) ;
进样量: 1μL,外标法定量。
1. 4　标准曲线:用标准贮备液分别配制出 0. 5, 0. 1,
0. 05, 0. 01μg /m L的标准溶液 ,进样后绘制标准曲
线 ,以试样浓度 ( Y , μg /mL)为纵坐标 ,以峰面积为
横坐标 ,进行回归 ,结果见表 1。
2　实验结果
·33·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 1期
收稿日期:　 2001-02-26基金项目:国家“九· 五”攻关项目 (96-903-02-02)作者简介:薛　健 ( 1964-) ,女 ,副研究员 ,主要从事药物成分分析及质量标准研究工作。