全 文 ：3　讨论
3. 1　本方法的主要优点是通过对前处理方法的改
进 ,克服了以前方法中化学试剂毒性大 ,方法检出限
较高等缺点。文献 [5 ]用乙腈 -磷酸缓冲液做流动相 ,
我们观察到磷酸盐在实验结束后需用大量水冲洗 ,
如果冲洗不干净 ,容易有晶体析出 ,对色谱系统产生
不利影响。 用甲醇 -水 -冰醋酸做流动相 ,组成简单 ,
容易调配 ,一般对色谱系统无明显不良影响。另外乙
腈的毒性较大 ,而甲醇-水 -冰醋酸毒性低 ,用甲醇 -
水 -冰醋酸做流动相可以在具体的操作过程中减轻
对实验者的身体危害。
3. 2　复方效应成分药动学假说 ( PK) [7～ 11 ]认为复方
进入体内成分能定性定量。 本室曾应用建立的血样
预处理方法—— 水浴法 [ 10]成功地测定了健康人口
服川芎汤后经时变化的血清中阿魏酸浓度 ,并直接
测定了健康人口服冠心Ⅱ号 (五味药分煎 )后经沸水
浴处理过的血清样品中的阿魏酸 [10 ]。本实验结果一
方面进一步证明了“复方进入体内成分能定性定量”
的科学性:其体内成分不但可以测 ,而且还可以根据
具体的实际情况 (经费、检测限要求等 )而采用不同
方法测定 ;另一方面由于本实验中测定健康人口服
冠心Ⅱ号 (五味药合煎 )后体内阿魏酸的浓度变化的
条件和实际的临床应用冠心Ⅱ号方时体内阿魏酸的
浓度变化条件几乎完全一致 ,所以此次成功地测定
人口服冠心Ⅱ号合煎液后体内阿魏酸的浓度更为直
接和有意义 ,为进一步研究冠心Ⅱ号方剂体内成分
谱及治疗中的药物监测 [11 ]提供了依据。
3. 3　作为新方法 ,本实验仅为初步实践。本法预处
理复方血清成分 ,广泛应用性如何?不同动物血清中
复方来源的阿魏酸 ,用本法提取的规律性如何?同水
浴法相比 ,对色谱柱的污染如何? 需要进一步研究。
参考文献:
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大孔树脂对栀子苷分离效果的研究
吕茂平 ,乔庆彬 ,庞春燕 ,王 琦
(北京中医药大学 ,北京　 100029)
摘　要: 目的　优选分离栀子苷的大孔树脂。方法　将栀子粗提液置大孔树脂中吸附 ,并以水、 70%乙醇分别洗脱 ,
以 HPLC法测定洗脱液中栀子苷含量。结果　 D301R、 D396、 D296和 AB-8四种型号大孔树脂效果差异较大。结论
　 D301R型大孔树脂用作栀子苷的分离效果较好。
关键词: 栀子苷 ;大孔树脂 ;分离 ;高效液相色谱
中图分类号: R284. 2; R286. 02　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 09 0794 03
Effect of macroporous resin in separation of gardenoside
LU
¨
Mao-ping , QIAO Qing-bin, PAN G Chun-yan, W ANG Yue-qi
( Beijing Univ er sity o f TCM , Beijing 100029, China)
·794· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 9期
收稿日期: 2001-12-28基金项目:国家中医药管理局中医药科学技术研究基金资助项目 (国中医药科 00-01KZ01号 )作者简介:吕茂平 ( 1976-) ,男 ,江西广丰人 , 1998年毕业于江西中医学院 ,现在北京中医药大学攻读硕士学位 ,研究方向为中药成分及制剂技术的研究。 Tel: ( 010) 64286851　 E-mail: Lv mp@ sina. com
Abstract: Object　 To optimize the macropo rous resin for sepa rating gardenoside. Methods　 Put ting
the ex t ract f luid of Gardenia jasmincides Ellis into pil la r w as adso rbed w ith macropo rous resin, then
w ashed by w ater, 70% alcoho l in succession to determine the content o f g ardenoside by HPLC. Results　
D301R, D396, D296, and AB-8, the four macropo rous resins effects w ere dif ferent a lo t. Conclusion　
D301R macropo rous resin is ef fectiv e to sepa ra te the gardenoside.
Key words: g ardenoside; macroporous resin; separation; HPLC
　　栀子为茜草科植物栀子 Gardenia jasmionides
Eills的干燥成熟果实 ,性味苦寒 ,入心、肝、肺、胃、
三焦 ,具有泻火除烦 ,清热利湿 ,凉血解毒 ,消肿止痛
之功效。栀子的化学成分复杂 ,其中含有 11种环烯
醚萜苷类化合物 ,包括栀子苷、羟异栀子苷、京尼平
龙胆双糖苷、栀子苷酸、京尼平等 [ 1]。栀子苷是主要
的环烯醚萜苷化合物 ,是栀子的重要有效成分。文献
报道 [2 ]用氧化铝柱层析和薄层色谱法能较理想地分
离栀子苷 ,但其在制剂生产应用上有局限性。用大孔
树脂分离纯化中药有效成分在中成药制剂研究中应
用日益广泛 ,但目前尚无大孔树脂用于分离栀子苷
的报道。本研究根据栀子苷的结构特点与理化性质 ,
选用 4种不同型号大孔树脂分离栀子苷 ,并用
HPLC法测定栀子苷含量。
1　仪器与试药
　　Waters高效液相色谱仪 (包括 600泵 , 2487双
波长紫外检测器 , Mi llinium 32色谱处理软件 ) , X Z-
6A旋转蒸发仪。
甲醇为分析纯 (北京化工厂 ) ,乙腈为色谱纯 (美
国 Fisher公司 ) ,水为双重蒸馏水 (自制 ) , D301R、
D296、 D396、 AB-8四种型号大孔树脂均购于南开大
学化工厂 ,栀子苷对照品购于中国药品生物制品检
定所 ,栀子药材购于浙江温州医药公司。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件: 色谱柱: RP C18柱 ( 3. 9 mm× 150
mm, 5μm);柱温:室温 ;流动相:乙腈 -水 ( 15∶ 85) ,
流速: 1. 0 mL /min;检测波长: 238 nm。
2. 2　线性关系的考察: 精密称取栀子苷对照品 7. 1
mg,置 50 mL容量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀。
准确吸取 2. 0, 4. 0, 6. 0, 8. 0, 10. 0μL注入高效液相
色谱仪 ,以栀子苷进样量为横坐标 ,峰面积积分值为
纵坐标 ,绘制标准曲线。 回归方程为 Y= 1 538 106
X+ 3 128, r= 0. 999 9。 表明测定成分在 0. 282～
1. 42μg呈良好线性关系。
2. 3　精密度试验: 准确吸取对照品溶液 10μL,重
复进样 5次 ,峰面积积分值 RSD为 1. 04%。
2. 4　稳定性试验: 取样品溶液 ,精密吸取 6μL进
样 ,每天测定 1次 ,结果发现样品溶液放置 7 d峰面
积积分值基本无变化 , RSD为 1. 31%。
2. 5　树脂柱层析及含量测定
2. 5. 1　栀子的粗提: 将栀子粉末 100 g置容器中 ,
按回流法以 70%乙醇 500 mL回流 1 h,过滤 ,滤渣
再分别加入 70%乙醇 250 mL回流两次 ,每次 1 h,
合并滤液 ,减压回收乙醇并浓缩至稠膏状 ,加 6倍量
95%乙醇 ,搅匀 ,静置 ,过滤 ,滤液减压回收乙醇并浓
缩成流浸膏 ,加 4倍量蒸馏水 ,并用稀盐酸调 pH值
至 3. 5左右 ,置水浴加热 1 h,冷置 ,过滤 ,滤液备用。
2. 5. 2　树脂预处理:市售树脂加 95%乙醇浸泡处
理后 ,湿法装柱 ,用 95%乙醇冲洗至洗脱液加等量
水不浑浊 ,用蒸馏水冲洗至无醇 ,备用。
2. 5. 3　树脂柱层析 [3 ]: 精密移取备用液 10 mL,加
入已经处理好的树脂柱 (内径 3 cm ,柱长 30 cm ,树
脂层高 20 cm )内吸附 ,先以蒸馏水洗至洗脱液无
色 ,再以 500 mL 70%乙醇洗脱 ,收集洗脱液并观察
其颜色。
2. 5. 4　粗提液含量测定:取 2. 5. 1项下备用液 10
mL,水浴蒸干 ,用甲醇稀释 500倍后 ,用滤膜过滤 ,
精密吸取滤液 10μL,注入高效液相色谱仪 ,测定峰
面积并计算含量 ,得栀子粗提液每毫升含栀子苷
11. 5 mg(即过柱前药液共含栀子苷 115 mg )。
2. 5. 5　样品含量测定:各份树脂洗脱液回收乙醇并
浓缩定容至 10 mL,吸取定容液 1 m L,水浴蒸干 ,用
甲醇稀释并定容至 100 mL,滤膜过滤 ,分别精密吸
取 10μL样液测定并计算栀子苷含量 ,结果见表 1。
表 1　各树脂柱洗脱液栀子苷含量测定结果
树脂
类型
水洗 液 醇洗液
栀子苷 ( mg) 得率 (% ) 栀子苷 ( mg) 得率 (% )
AB-8 49. 7 43. 2 29. 5 25. 6
D301R 0 0 74. 8 65. 0
D296 46. 2 40. 2 37. 0 32. 2
D396 42. 1 36. 6 30. 2 26. 3
3　讨论
3. 1　 D296、 D396和 AB-8 3种树脂柱的水洗液及
醇洗液中都含有栀子苷 ,且水溶液中含量稍高于醇
溶液 ,说明栀子苷在这 3种树脂中洗脱时未能与一
·795·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 9期
些水溶性杂质 (色素、糖等 )很好分开 ,而 D301R树
脂中栀子苷都集中在醇洗脱液中 ,水溶液中无栀子
苷 ,因此 D301R树脂可用来分离栀子苷。
3. 2　从洗脱液的颜色来看 , D301R柱的醇洗液呈
浅黄白色 ,其他三者则为黄色甚至深黄色 , D301R
柱明显比其他三柱浅 ,这一点对制剂生产的色泽控
制也是非常有利的。
3. 3　虽然有文献报道氧化铝柱层析法对栀子苷的
分离有较好的效果 ,但氧化铝价格较高 ,在生产上的
应用有一定的局限性 ,而大孔树脂的应用在中成药
制剂研究中日趋成熟 ,应用前景广泛。
参考文献:
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毛细管电泳法测定灯盏花及提取物中灯盏花乙素含量
饶　毅1 ,魏惠珍2 ,王义明 1 ,罗国安 1
( 1. 清华大学 分析中心 ,北京　 100084; 2. 南方电动工具厂医院 ,江西 南昌　 330029)
摘　要: 目的　建立灯盏花药材和灯盏花提取物 (灯盏花素 )中灯盏花乙素的含量测定方法。 方法　采用高效毛细
管电泳法 ,缓冲液为 40 mmol /L硼砂 ( p H 8. 50,磷酸调节 ) ,未涂层石英毛细管 ( 57 cm× 50μm) ,分离电压 20 kV ,
检测波长 280 nm。结果　灯盏花乙素线性范围 0. 1～ 4. 0 mg /m L( r= 0. 998 5) ,回收率大于 98. 0%。结论　方法简
便、快速 ,准确 ,可用于灯盏花药材和灯盏花素的质量控制。
关键词: 毛细管电泳 ;灯盏花 ;灯盏花素 ;灯盏花乙素
中图分类号: R286. 02　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 09 0796 03
Determination of scutellarin inErigeron breviscapus
and its extract by capillary electrophoresis
RAO Yi
1 , WEI Hui-zhen
2 , WANG Yi-ming
1 , LUO Guo-an
1
( 1. Analy sis Center , T singhua Unive rsity , Beijing , 100084, China; 2. Hospital o f Nanfang
Elec tric-too ls Facto ry , Nanchang 330029, China )
Abstract: Object　 To develop a method for the determination o f scutellarin in Erigeron brev iscapus
(Vant. ) Hand. -M azz. and i ts ex t ract ( deng zhanhuasu) by capi llary elect rophoresis. Methods　 Separa-
tion w as ca rried out in an uncoa ted fused si lica capi llary 57 cm× 50μm ( ID) . Meanwhi le, a running vo lt-
age 20 kV , 40 mmo l /L bo rax ( pH 8. 50 wi th H3 PO4 ) buf fer and a UV detector at 280 nm were adopted.
Results　 The calibra tion curve show ed good linea ri ty ov er the range o f 0. 1-4. 0 mg /mL (r= 0. 998 5) . The
average recovery w as higher than 98. 0% . Conclusion　 The method is proved to be simple, rapid and ac-
cura te, and can be used fo r quality cont rol of E. brev iscapus and its ex t ract ( deng zhanhuasu) .
Key words: capilla ry elect ropho resis; Erigeron breviscapus ( Vant. ) Hand. -Mazz. ; deng zhanhuasu;
scutel la rin
　　灯盏花是菊科植物短葶飞蓬 Erigeron brev isca-
pus Hand. -M azz.的全草 ,主要成分为黄酮类化合
物 ,其中以灯盏花乙素含量最高 [1, 2 ] ,具有降低脑血
管阻力 ,增加脑血流量、溶解血栓、改善脑血液流变
学及抗血小板凝集、抑制 PKC过度激活、抑制 EAA
氨基酸胞外堆积和细胞内钙超载、防止氧自由基生
成增加等作用。临床上用于治疗高血压、脑血栓等心
脑血管疾病 [3～ 5 ]。
对灯盏花的提取物的定量现行标准为紫外分光
光度法 [6 ]。 随着高效毛血管电泳法在药物分析中的
应用越来越广泛 ,《中华人民共和国药典》 2000年版
已正式收载此方法。 本实验首次采用毛细管电泳法
·796· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 9期
收稿日期: 2002-01-17基金项目:国家重点基础研究发展规划项目 ( 973项目 ) ( G1999054404)作者简介:饶　毅 ( 1964-) ,男 ,江西南昌人 ,副教授 ,生命分析化学专业博士研究生 ,研究方向为药物质量控制与新药开发。
Tel: ( 010) 62772265
* 通讯作者: Tel: 010-62781688　 E-mai l: GALUO@ ch em. tsinghua. edu. cn