全 文 ：HPLC法测定肤阴净洗液中蛇床子素的含量
朱山寅 1 ,徐木根 2 ,姜宁华 3
( 1. 嘉兴市药品检验所 ,浙江 嘉兴　 314001; 2. 桐乡市第二人民医院 ,浙江 桐乡　 314511;
3. 嘉兴市中医医院 ,浙江 嘉兴　 314001)
　　肤阴净洗液为桐乡市第二人民医院研制的妇科
制剂 ,由蛇床子、黄柏、苦参、石菖蒲等中药组成 ,具
有清热解毒、燥湿止痒、杀虫的功能。 主治各种类型
的阴道炎症 ,外阴瘙痒 ,赤白带下 ,皮肤、肛门瘙痒及
湿疹。 方中君药蛇床子中香豆素类成分具有抑菌和
杀灭阴道滴虫的作用 ,故实验中选定其有效成分蛇
床子素作为指标。在文献方法 [ 1]基础上 ,结合本品药
味的性质 ,确定了提取条件和测定方法 ,结果表明该
方法操作简便、分离良好 ,结果准确。
1　仪器与试药
高效液相色谱仪: Wa ters 510 /484 /745B色谱
系统。肤阴净洗液 (桐乡市第二人民医院制剂室 ) ;蛇
床子素对照品 (中国药品生物制品检定所 ,供含量测
定用 ,批号: 822-200212) ;甲醇为色谱纯 ,其余试剂
均为分析纯 ,水为重蒸馏水。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件: Hypersil C18分析柱 ( 150 mm× 4. 6
mm, 5μm);流动相: 乙腈-水 ( 54∶ 46) ;流速: 0. 8
m L /min;测定波长: 321 nm;柱温:室温。
2. 2　对照品溶液的制备:精密称取在五氧化二磷干
燥器中减压干燥至恒重的蛇床子素对照品适量 ,加
乙醇制成 0. 033 5 mg /m L的溶液 ,即得。
2. 3　供试品溶液的制备:精密吸取本品 5 mL,置分
液漏斗中 ,用乙醚振摇提取 3次 ,每次 20 mL,合并
乙醚提取液 ,用 5%氨溶液 10 mL洗涤 ,静置分层 ,
弃去氨溶液 ,倾取乙醚上清液。剩余少量乳化层用乙
醚洗涤 2次 ,每次 5 m L。 合并乙醚液 ,挥干 ,残渣加
乙醇溶解并转移至 25 mL量瓶中 ,加乙醇稀释至刻
度 ,摇匀 ,滤过。取滤液用 0. 45μm微孔滤膜滤过 ,
即得。
2. 4　阴性对照溶液的制备:按处方量制备不含蛇床
子药材的阴性样品 ,按供试品溶液制备方法制备阴
性对照溶液。
2. 5　干扰试验:照上述色谱条件 ,取对照品溶液、供
试品溶液、阴性对照溶液各 20μL,分别注入色谱
仪。供试品色谱图中 ,在与对照品色谱图相应的位置
上 ,有一相同的色谱峰 ,而阴性对照溶液在此保留时
间无干扰。见图 1。
图 1　蛇床子素对照品 ( A)、肤阴净洗液 (B)
和阴性对照 ( C)的 HPLC图谱
Fig. 1　 HPLC chromatograms of cnidiadin ref erence
substance (A) , Fuyingjing Lot ion ( B)
and negative sample (C)
2. 6　线性关系考察:精密吸取蛇床子素对照品溶液
( 0. 033 5 mg /mL) 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16μL进样 ,以
峰面积积分值 Y 为纵坐标 ,蛇床子素进样量 ( X )
(μg )为横坐标 ,绘制标准曲线 ,得回归方程: Y =
2. 165× 107 X+ 4. 034× 105 , r= 0. 999 1。 表明蛇床
子素在 0. 13～ 0. 54μg与峰面积呈良好的线性
关系。
2. 7　精密度试验: 准确吸取蛇床子素对照品溶液
20μL,重复进样 5次 ,测定蛇床子素峰面积 ,计算得
其 RSD为 1. 70% 。
2. 8　稳定性试验:取同一供试品溶液 ,分别在制备
后 0, 2, 4, 6, 8, 10 h进样 ,测定蛇床子素峰面积 ,计
算得其 RSD为 1. 39% (n= 6)。表明供试品溶液在
10 h内稳定。
2. 9　重现性试验:取同一批号样品 5份 ,按供试品
溶液制备方法制备及测试条件测定 ,计算蛇床子素
含量 ,得其 RSD为 1. 73% (n= 6)。
2. 10　加样回收率试验: 精密吸取已知蛇床子素含
量 ( 0. 068 8 mg /mL)的供试品溶液 5 mL置分液漏
·526· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 35卷第 5期 2004年 5月
收稿日期: 2003-08-03作者简介:朱山寅 ( 1958— ) ,男 ,浙江省嘉兴市人 ,副主任中药师 ,中药室主任 ,曾从事过药学教学工作 ,主要从事中药的分析检验及药品质量控制的研究工作 ,在专业杂志上发表科研论文 38篇 ,其中多篇论文获奖。 Tel: ( 0573) 2073235
斗中。另取蛇床子素对照品 6. 51 mg ,置 25 mL量瓶
中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度。 精密吸取上述溶液
1. 0, 1. 2, 1. 4, 1. 6, 1. 8, 2. 0 mL,分别加入到供试品
溶液中 ,按 2. 3项下方法制备并按上述色谱条件进
行测定 ,结果平均回收率为 98. 76% , RSD为
1. 67% (n= 6)。
2. 11　样品测定:精密吸取供试品溶液 20μL,按上
述色谱条件测定 ,测定结果见表 1。
3　讨论
3. 1　蛇床子素极性较小 ,易溶于乙醚 ,故用乙醚萃
取。选择 5%氨水洗涤能除去部分脂溶性杂质。
表 1　肤阴净洗液中蛇床子素的含量 (n= 5)
Table 1　 Cnidiadin in Fuyinj ing Lot ion ( n= 5)
批　号 蛇床子素含量 / [mg· ( 100 m L)- 1 ] RSD /%
1 6. 87 1. 34
2 6. 95 1. 51
3 6. 74 1. 22
3. 2　曾试验了几种不同的流动相系统 ,在本实验所
确定的色谱条件下 ,蛇床子素与其他组份能达到基
线分离 ,理论板数按蛇床子素计大于 3 000。
Reference:
[1 ]　 Chen D D, Zhao J. The analysi s of coumarins in Sh ech uang zi
[ J ]. Ch in J Pharm Anal (药物分析杂志 ) , 1987, 7( 2): 112-
113.
复方利咽宁口服液中绿原酸含量的 HPLC测定及稳定性研究
孙晓菊 1 ,刘学兰 2
( 1. 华中科技大学同济医学院附属梨园医院 药剂科 ,湖北 武汉　 430071;
2. 武汉市红十字协会医院 药剂科 ,湖北 武汉　 430012)
　　复方利咽宁口服液是本院协定处方 ,由金银花、
贯众、枇杷叶、板蓝根、桔梗等 12味中药组成 ,具有
清热解毒、凉血利咽、止咳化痰之功效 ,临床上主要
用于上呼吸道病毒性感染、风热咳嗽等症 ,经过临床
长期使用 ,疗效显著。方中金银花为主药 ,具有解毒、
杀菌、抗炎的功效 ,其中绿原酸为有效成分。本实验
采用 HPLC法测定绿原酸的含量 ,操作简便 ,测定
灵敏度、准确度均较好。
1　材料
美国 Water HPLC系统 ( 484紫外检测器 , 510
泵 , U6K进样器 , 680梯度控制器 , 745数据处理
机 ) ,瑞士 AE— 240电子分析天平 ,瑞士 654 pH计 ,
Millipo— Q超净水制备器 , CQ50超声波清洗器 ,
YWH振荡器。
　　复方利咽宁口服液 (本院中药制剂室 ) ,绿原酸
对照品 (中国药品生物制品检定所 ) ,乙腈为优级纯 ,
甲醇、冰醋酸为分析纯。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件: Nova-Pak C18 ( 100 mm× 3. 9 mm ,
4μm);流动相: 乙腈 -1%醋酸 ( 9∶ 91) ;检测波长:
326 nm;流速: 0. 8 m L /min;灵敏度: 0. 04 AU FS;柱
温:室温。 在上述色谱条件下绿原酸保留时间约为
8. 15 min,与其他杂质峰得到分离。
2. 2　供试品溶液的制备:取复方利咽宁口服液 0. 1
mL,注入用 10%甲醇溶液活化的 Sep-Pak C18小柱 ,
用 50%甲醇以 1滴 /s的速度推出 ,定容于 2 mL量
瓶中 ,即得。
2. 3　标准曲线的制备: 精密称定绿原酸对照品
8. 29 mg ,置于 5 mL量瓶中 ,加 20%甲醇至刻度 ,得
对照品储备溶液。 精密吸取对照品储备溶液 0. 1
mL,置于 25 mL量瓶中 ,加 20%甲醇至刻度 ,吸取
不同量对照品溶液进样 ,按前述 HPLC条件进行测
定 ,以绿原酸的量对峰面积作回归计算 ,得回归方
程: Y= 2. 063 5+ 0. 000 9 X , r= 0. 999 7;线性范围
为 13. 325～ 93. 154 ng。
2. 4　精密度试验:同一供试品溶液 ,重复进样 3次 ,
每次 5μL,测定吸收峰面积。 结果绿原酸峰面积
RDS为 1. 15% (n= 3)。
2. 5　稳定性试验: 同一供试品溶液 ,每隔 1 h进样 5
μL,依法测定绿原酸吸收峰面积值 ,结果其 RDS为
1. 47% (n= 18)。 结果供试品溶液在 17 h内稳定。
2. 6　重现性试验:精密量取批号为 20010312的复
方利咽宁口服液 5份 ,照供试品溶液制备方法操作 ,
进样 ,测定绿原酸吸收峰面积值。结果绿原酸峰面积
RDS为 1. 64% (n= 5)。
2. 7　加样回收试验: 取含绿原酸 22. 97 ng的供试
·527·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 35卷第 5期 2004年 5月
收稿日期: 2003-09-17