全 文 ：3 讨论
31 火麻仁油中化学成分复杂,主要含有几种高级
脂肪酸及其甲酯,大麻二酚与其性质相近,其他方法
不易分离提取。本实验所用方法简便快速, 提取效
率高,同时比较了提取时间、提取次数及所用溶剂量
对提取的影响。结果表明:采用 5 mL 甲醇,提取 15
min,提取两次的效果最好。
32 紫外扫描结果显示,大麻二酚在 258 nm 有一
最大吸收峰, 但在 220 nm 处仍有较强吸收, 因此,
本实验根据参考文献[ 4, 5]选择 220 nm 作为检测波
长,灵敏度高,干扰小。
33 目前国内外对火麻仁油中大麻酚类化合物的
分析多采用气相色谱法, 但操作烦琐,因此本实验采
用HPLC 法对其主要活性成分大麻二酚进行分析。
结果证明本方法简便易行, 结果准确可靠,适宜测定
火麻仁油中大麻二酚的含量。
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生物化学发光法测定酸枣仁的抗氧化活性
王少敏, 李 萍* ,赵明强
(中国药科大学 生药教研室, 江苏 南京 210038)
酸枣仁能养肝宁心、敛汗生津,具有养心安神、催
眠的功能。主要含有脂肪油、黄酮和皂苷等物质[ 1]。
现代药理研究表明酸枣仁对内毒素诱发发热小鼠超
氧化物歧化酶(SOD)的降低具有保护作用[ 2] ,提示酸
枣仁可能具有抗氧化活性。为进一步确证酸枣仁的
抗氧化活性及其有效部位, 本实验采用化学发光方
法,应用邻苯三酚鲁米诺( Luminol)碳酸盐缓冲液,
邻菲罗啉Cu2+ 抗坏血酸H2O2,H2O2鲁米诺碳酸盐
缓冲液 3个产生自由基的体系和中国科学院生物物
理研究所改进的 BPCL4微弱发光测定仪,检测了酸
枣仁的乙醇提取物、总黄酮和总皂苷部位清除 O2 ,
OH,H2O2自由基的能力,为从酸枣仁类中药中寻找
和筛选自由基清除剂提供参考依据。
1 材料与仪器
酸枣仁采自河北邢台, 经中国药科大学生药教
研室李会军博士鉴定为酸枣 Ziz iphus j uj uba var.
sp inosa ( Bge) Hu ex H . F . Chou的干燥种子。
BPCL4 微弱发光测定仪及 BPCLAPP26 数
据处理工作站(中国科学院北京生物物理研究所) ;
焦性没食子酸(邻苯三酚, 遵义第二化学厂, 分析
纯) , 3氨基邻苯二甲酰肼(鲁米诺, Lum inol, Sigma
公司) , 邻菲罗啉(上海试剂三厂,分析纯) ,其他试剂
均为国产分析纯。
2 实验方法
21 样品制备: 实验所用药材粉碎后, 精密称取约
50 g,石油醚索氏提取法除脂后,用 70%乙醇热回流
( 1 h 2次) ,提取液浓缩得到半液体状稠膏,用适当
体积蒸馏水溶解稠膏得相当于 06 g 生药/ mL 的原
液,作为酸枣仁醇提物的样品,使用时用蒸馏水稀释。
另取粉碎药材 200 g, 按上述方法进行操作, 所
得稠膏用适当体积蒸馏水溶解后,用正丁醇萃取;用
5%氢氧化钾溶液洗涤正丁醇层,正丁醇层蒸干得总
皂苷部位;碱液层用稀盐酸中和至中性后用乙酸乙
酯萃取, 乙酸乙酯层蒸干得总黄酮部位。用蒸馏水
稀释得总黄酮部位原液( 1 g 生药/ mL)和总皂苷部
位原液( 1 g 生药/ mL) , 使用时用蒸馏水稀释。
22 O2 清除能力检测[ 3] :取待测样品各 10 L 于
测量管中 (以蒸馏水做空白对照 ) , 加入 20 L 1
417中草药 Chinese T raditional and Herbal Drugs 第 34 卷第 5 期 2003年 5月
收稿日期: 20020802作者简介:王少敏( 1978 ) ,女,安徽滁州人,中国药科大学 2000级生药学在读硕士, 2000年毕业于沈阳药科大学药学系,获理学学士学位。研究方向为天然药物活性成分的研究。
* 通讯作者 T el: ( 025)5322256 Fax: ( 025) 5322448 Email: lipingli@ publicl. pt t. js. cn
mmol/ L 邻苯三酚溶液,原位注入 970 L 鲁米诺( 1
mmol/ L)碳酸盐缓冲液( pH 102) ,反应总体积为 1
mL, 启动发光,记录 240 s内发光强度。
23 OH 清除能力检测[ 4] : 取待测样品各 50 L
于测量管(以蒸馏水做空白对照) , 依次加入 50 L
CuSO45H2O 1 mmol/ L 溶液, 20 L 1 mmol/ L 抗坏
血酸溶液, 50 L 1 mmol/ L 邻菲罗啉溶液, 50 L
015 mol/ L H2O2溶液, 原位注入 780 L 005 mol/
L 硼砂溶液( pH 924) ,反应总体积为 1 mL,启动发
光,记录 180 s内发光强度。
24 H 2O2 清除能力检测[ 3] : 取待测样品各 50 L
于测量杯中(以蒸馏水作空白对照)加入 50 L 015
mol/ L H 2O2 ( 0 ) , 原位注入 900 L 鲁米诺碳酸
盐缓冲液( pH 95) ,反应总体积为 1 mL,启动发光,
记录 240 s内发光强度。
25 发光抑制率的计算
计算公式如下:
发光抑制率= (空白发光曲线面积- 样品发光曲线面
积) /空白发光曲线面积 100%
以发光抑制率为纵坐标, 样品浓度为横坐标, 绘
出发光抑制曲线并算出发光抑制率为 50% 时的浓
度 IC50, 用来衡量样品对自由基的清除能力。IC50
值越小,表明样品清除自由基能力越强。
3 结果与讨论
以发光强度为纵坐标, 时间为横坐标记录发光
动力学曲线, 见图 1。可以看出酸枣仁醇提物部位
的加入使发光曲线发生明显变化,表现为发光峰值
和曲线积分面积的降低, 提示醇提物部位对 3 种自
由基均有清除作用, 而且都呈明显的量效关系;其对
3种自由基的清除能力大小为: H 2O2> OH> O2 ,
IC50值见表 1。
进一步对酸枣仁的抗氧化活性部位进行确认,
分别检测了醇提物的两个部位: 总黄酮部位和总皂
苷部位。结果在醇提物有效抑制率为 98% 的相同
生药浓度( 1 g 生药/ mL)下,总皂苷部位无明显的清
除自由基的作用 (抑制率为 2%) ,总黄酮部位的抑
制率大于 99%;而且总黄酮部位能显著地清除 3种
体系产生的 O2 , OH, H2O2 自由基,且呈明显量效
关系(图 2) , 其对 3 种自由基的清除能力大小为:
H2O2> OH> O2 , IC50值见表 1。
本实验结果表明,酸枣仁的醇提物具有很强的清除
自由基的作用。总黄酮部位是酸枣仁清除自由基的
有效部位,对 3种自由基的清除能力依次为 H2O2>
OH> O2 。IC50分别为 34, 041, 0013 mg/ mL,
1空白( blank) 1空白( blank) 1空白( blank)
2 14 mg/ mL 2075 mg/mL 20025 mg/ mL
3 28 mg/ mL 3150 mg/mL 30075 mg/ mL
4 75 mg/ mL 4225 mg/mL 40150 mg/ mL
5225 mg/ mL 5450 mg/mL 50900 mg/ mL
6900 mg/mL
图 1 酸枣仁醇提取物抑制 O2 (A) ,
OH ( B)和 H2O2 (C)发光曲线
Fig. 1 Luminous curves of O2 ( A) , OH (B)
and H2O2 ( C) inhibited by ethanol extract
from Z. juj uba var. spinosa
1空白( blank) 1空白( blank) 1空白( blank)
2 075 mg/ mL 20375 mg/mL 20001 2 mg/ mL
3 150 mg/ mL 30429 mg/mL 30006 0mg/ mL
4 600 mg/ mL 40750 mg/mL 40750 0mg/ mL
51200 mg/ mL 51500 mg/mL 51500 0mg/ mL
图 2 酸枣仁总黄酮抑制 O2 ( A) ,OH ( B)
和 H2O2( C)发光曲线
Fig. 2 Luminous curves of O2 ( A) , OH (B)
and H2O2 ( C) inhibited by f lavone part
from Z. juj uba var. spinosa
表 1 酸枣仁各部位的抗氧化活性( n= 3)
Table 1 Antioxidation of various parts
of Z. juj uba var. spinosa ( n= 3)
样 品 IC50/ ( mgmL
- 1)
O 2
OH H2O 2
醇提物 7. 43 3. 49 0. 15
总黄酮 3. 40 0. 41 0. 013
总皂苷 - - -
显示了很强的抗氧化活性。酸枣仁资源丰富,总黄
酮含量较高且易分离, 有可能开发成为具有抗氧化
作用的药物或保健品。
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喜树果实油脂的超临界CO2 萃取
殷丽君1,李再贵1,李 宽2
( 1 中国农业大学食品科学与营养工程学院, 北京 100086; 2 北京百事(中国)有限公司北京分厂, 北京 102600)
喜树 Camp totheca acuminata Decaisne 为蓝果树
科喜树属( Camp totheca Decne. )多年生亚热带落叶阔
叶树,此属仅喜树一种植物,是我国特有种,现广泛分
布于长江流域及其以南诸省区。喜树可全株用药,用
于治疗恶性疔毒、肿瘤[ 1]。喜树资源相对短缺,单纯
从喜树中提取喜树碱使得珍贵的喜树资源无法有效
利用。研究表明:喜树是富含有人体必需脂肪酸 亚
麻酸的植物新资源。亚麻酸及其代谢产物能够多
选择性地参与动物的某些器官如大脑皮质、视网膜、
睾丸和精子的乙醇胺磷脂和神经磷脂中,在人体内对
于稳定细胞膜功能、调节基因表达、维持细胞因子和
脂蛋白平衡、抗心血管疾病、抗炎症、抑制肿瘤并保持
癌症患者正常代谢和体能、增强自身免疫能力、促进
生长发育等方面具有重要的作用[ 2]。
传统的植物油脂溶剂提取工艺流程长, 设备复
杂,操作麻烦, 油脂的品质在加工中受到一定的影
响。超临界 CO2 萃取技术的发展为油脂加工提供
了一个全新的工艺。近 30 年来, 国内外在超临界
CO2 萃取植物油脂方面的基础理论研究和应用开发
上都取得了一定的进展, 并在油脂工业化生产上得
到应用[ 3, 4]。到目前为止, 尚未见到有关喜树果实
油脂的萃取方法、工艺条件方面的报道。
1 材料与设备
喜树种采自四川都江堰, 经东北林业大学森林
植物生态学开放研究实验室聂绍权教授鉴定。自然
干燥粉碎后于 60 的恒温干燥箱中干燥24 h,贮于
塑料袋中。
HA1210150超临界 CO2 萃取仪(南通华安超
临界萃取设备有限公司) , P latform 气相色谱质谱
仪(英国 VG公司)。
2 超临界 CO2 萃取喜树果实油脂
在半连续超临界 CO2 萃取设备上进行喜树果
实油脂萃取的实验研究。实验参数: 粉碎粒度: 40~
60目;萃取压力/温度: 275 MPa/ 40 ; 分离压力/
温度: 55 MPa/ 45 ; CO2 流量: 10 kg/ h; 萃取时
间: 120 min。在本研究中除为了考察参数对超临界
CO2萃取喜树果实油脂萃取效果的影响而特殊说明
需要变更参数外, 其余的参数均与上述参数相同。
出油率的计算公式为:
出油率= 出油量( g) /原料质量( g ) 100%
3 结果与讨论
31 温度和压力对萃取结果的影响:见图 1。
图 1 压力和温度对喜树果实油脂出油率的影响
Fig. 1 Effects of pressure and temperature on ratio
of extracted oil of C. acuminata fruit
从图 1可见, 在相同的温度下随着压力的提高
喜树果实油脂的萃取得率明显提高; 但是温度对超
临界 CO2 溶剂性质的影响是两个竞争因素的综合
结果,在压力为 25 MPa 以下时, 随着温度的提高,
喜树种子出油率降低; 而当压力高于 30 MPa后,喜
树种子出油率随着温度的上升而提高, 说明超临界
CO2萃取喜树果实油脂系统的出油率在 275 MPa
的压力附近具有一个转折点。尽管实验结果表明高
温高压有利于喜树果实油脂的萃取, 但是高压操作
419中草药 Chinese T raditional and Herbal Drugs 第 34 卷第 5 期 2003年 5月
收稿日期: 20020910基金项目:国家林业局引进国际先进林业技术项目资助( 96410/ 11)