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白藜芦醇和抗坏血酸对预防非典型肺炎方剂Ⅰ 和Ⅵ 所致
小鼠外周血液淋巴细胞 DNA损伤的保护作用
金顺姬 1 ,段　链 1 ,黄　梅 1 ,杨静玉 1 ,于　海 1 ,赵余庆 2 ,吴春福 1
( 1. 沈阳药科大学 药理教研室 ,辽宁 沈阳　 110016; 2. 辽宁中医学院新药研究中心 ,辽宁 沈阳　 110000)
摘　要: 目的　研究白藜芦醇和抗坏血酸对预防非典型肺炎方剂Ⅰ 和Ⅵ 致小鼠外周血液淋巴细胞 DN A损伤的保
护作用。方法　采用单细胞凝胶电泳方法研究白藜芦醇和抗坏血酸对预防非典型肺炎方剂Ⅰ 和Ⅵ 致小鼠外周血液
淋巴细胞 DNA损伤的保护作用。 结果　白藜芦醇 ( 50, 100, 200 mg /kg× 3 d) 和抗坏血酸 ( 50, 100, 200 mg /kg×
3 d) 对方剂Ⅰ 和Ⅵ (临床等效量× 3 d) 所致的小鼠外周血液淋巴细胞 DNA损伤呈剂量依赖性的保护作用 (P <
0. 05)。结论　白藜芦醇和抗坏血酸能够保护预防非典型肺炎方剂Ⅰ 和Ⅵ 对小鼠外周血液淋巴细胞 DN A的损伤。
关键词: 白藜芦醇 ; 抗坏血酸 ; 预防非典型肺炎方剂 ; DNA损伤 ; 单细胞凝胶电泳
中图分类号: R285. 5　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 12 1114 04
Protective effect of resveratrol and ascorbic acid on lymphocyte DNA damage in mice
induced by prescriptionsⅠ andⅥ of Chinese materia medica against SARS
JIN Shun-ji
1 , DU AN Lian
1 , HU ANG M ei
1 , YANG Jing-yu
1 , YU Hai
1 , ZHAO Yu-qing
2 , WU Chun-fu
1
( 1. Depar tment o f Pharmaco lo g y, Shenyang Pharmaceutical Univ er sity , Shenyang 110016, China;
2. Resea rch Center o f New Drug , Liaoning Colleg e of TCM , Shenyang 110000, China)
Abstract: Object　 To evaluate the pro tectiv e effect o f resv erat rol and ascorbic acid on lymphocyte
DN A damage in mice induced by prescriptions Ⅰ and Ⅵ of Chinese ma teria medica against SARS.
Methods　 Resverat rol , asco rbic acid and tw o prescriptions against SARS w ere o rally administered to the
mice fo r three days. The effect on DN A damage w as measured in mice lymphocytes by means of single cell
g el elect ropho resis assay ( SCGE, o r Comet assay ) . Results　 Resverat rol ( 50, 100, 200 mg /kg× 3 d) o r
asco rbic acid ( 50, 100, 200 mg /kg× 3 d) could do se-dependently restore the DN A damage induced by
prescriptionⅠ and Ⅵ ( equivalent clinical do se× 3 d ) . Conclusion　 Resverat rol and asco rbic acid could
pro tect the lymphocyte DN A damage in mice induced by prescriptionsⅠ andⅥ o f Chinese ma teria medica
against S ARS.
Key words: resv era trol; asco rbic acid; prescriptions against SARS; DN A damage; sing le-cell g el elec-
trophoresis
　　为预防非典型肺炎在社会上进一步流行 ,经国
家卫生部非典型肺炎防治领导小组审定 ,国家中医
药管理局向社会推荐了 6个预防非典型肺炎的中
药方剂。这些方剂在社会上得到了较广泛的应用。前
期研究发现上述方剂中方剂Ⅰ ,Ⅴ ,Ⅵ 对小鼠外周血
液淋巴细胞 DNA具有明显的损伤作用 [1 ] ,提示健
康人服用某些中药来预防非典型肺炎应慎重。
多种因素可以引起 DNA的损伤 ,其中脱氧核
糖核酸的氧化是造成 DNA损伤的重要因素之一。
白藜芦醇和抗坏血酸具有显著的抗氧化活性。有文
献报道 ,白藜芦醇和抗坏血酸对氧化造成的 DNA
损伤具有一定的保护作用 [2, 3 ]。 为此 ,本实验应用国
际公认的单细胞凝胶电泳技术 ( single cell g el elec-
tropho resis assay , SCGE) ,又称慧星试验 ( Comet
·1114· 中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 12期 2003年 12月
收稿日期: 2003-07-17作者简介:金顺姬 ( 1975— ) ,女 ,吉林省通化市人 ,药理学硕士 ,主要从事中药药理研究。
* 通讯作者: Tel, Fax: ( 024) 23843567　 E-mail: w ucf@ syphu. edu. cn
assay ) 考察了白藜芦醇和抗坏血酸对预防非典型
肺炎方剂Ⅰ 和Ⅵ 所致的小鼠外周血液淋巴细胞
DNA损伤的保护作用 ,以期为因服用预防非典型肺
炎方剂所致不良反应提供有效的防治药物或手段。
1　材料
1. 1　方剂组成与煎煮方法: 方剂Ⅰ : 生黄芪 10 g、
败酱草 15 g、薏苡仁 15 g、桔梗 6 g、生甘草 3 g。方
剂Ⅵ :生黄芪 10 g、白术 6 g、防风 10 g、苍术 6 g、藿
香 10 g , 沙参 10 g、金银花 10 g、贯众 6 g。上述中
药饮片均购自沈阳市药材公司。 药材的植物基源由
沈阳药科大学药用植物教研室孙启石教授鉴定 [1 ]。
按照卫生部防治非典型肺炎领导小组公布的方法将
上述方剂用水煎煮、浓缩至 3倍临床等效量 ,临用
前用生理盐水稀释至临床等效量。
1. 2　主要试剂:淋巴细胞分离液 ( 991103)购于上
海恒 信化 学试剂 有限 公司 ; 低熔 点琼 脂糖
( BI0153)、正常熔点琼脂糖 ( 051363)、溴化乙啶
( BS0606)均购于华美生物工程公司。
1. 3　仪器: DYY— 6B型稳压稳流电泳仪 (北京市
六一仪器厂 )、 DYCP— 38B型水平电泳槽 (北京市
六一仪器厂 )、 VANOX型 O LYMPU S荧光显微镜
( Japan)、 LUCIA彗星实验分析软件系统 (捷克 )。
1. 4　动物:昆明种小鼠 ,雄性 ,体重 18～ 22 g ,沈阳
药科大学实验动物中心提供 ,动物合格证号:辽实合
字 047号。
2　方法
2. 1　给药方案:将小鼠分为生理盐水 ( N S)组和给
药组 ,每组 4只。给药组每天 ig预防非典型肺炎方
剂Ⅰ ( 6. 5 g /kg ) 或 Ⅵ ( 12. 4 g /kg ) , 30 min后 ig
白藜芦醇 ( 50, 100, 200 mg /kg )或抗坏血酸 ( 50,
100, 200 mg /kg ) ,生理盐水组 ig等量生理盐水 ,连
续 3 d。末次 ig白藜芦醇或抗坏血酸后 30 min取
血 ,进行单细胞凝胶电泳实验。
2. 2　单细胞凝胶电泳实验: 参照文献 [4 ]方法加以改
进 ,末次给予预防非典型肺炎方剂后 1 h取血 ,分离
外周血液淋巴细胞、制片 ,裂解 2 h,解旋 40 min,电
泳 30 min,中和染色 ,阅片。 每个样本随机观察 40
个细胞 ,使用 LU CIA软件分析。
2. 3　统计学处理: 以 N S组的各测定指标为
100% ,计算给药组各指标的变化百分率。实验数据
用 x± s表示 ,采用两因素方差分析 ( ANOV A) 判
断总体差异显著性 ,组间资料采用 Fisher s least-
significant dif ference ( FLSD)分析统计学差异。
3　结果
3. 1　白藜芦醇对预防非典型肺炎方剂Ⅰ和Ⅵ 所致
小鼠外周血液淋巴细胞 DNA损伤的保护作用: 见
表 1和表 2。结果表明 ,单独给予白藜芦醇 ( 50, 100,
200 mg /kg ) 对小鼠外周血液淋巴细胞 DNA没有
明显影响。 单独给予方剂Ⅰ ( 6. 5 g /kg ) 或方剂Ⅵ
( 12. 4 g /kg )均可致小鼠外周血液淋巴细胞 DNA
损伤。而白藜芦醇对预防非典型肺炎方剂Ⅰ 和Ⅵ 引
起的外周血液淋巴细胞 DNA含量、尾长、尾矩、椭
圆矩及尾面积的改变有显著改善作用 ,并呈一定量
效关系 ,提示白藜芦醇对预防非典型肺炎方剂Ⅰ 和
Ⅵ 致小鼠外周血液淋巴细胞 DNA损伤有明显的保
护作用。
3. 2　抗坏血酸对预防非典型肺炎方剂Ⅰ和Ⅵ 所致
小鼠外周血液淋巴细胞 DNA损伤的保护作用: 见
表 3和表 4。结果表明 ,单独给予抗坏血酸 ( 50 mg /
kg ) 对小鼠外周血液淋巴细胞 DNA没有明显影
响 ,而单独给予抗坏血酸 ( 100, 200 mg /kg ) 能不同
程度地降低小鼠外周血液淋巴细胞尾 DNA含量、
尾长、尾矩、椭圆矩及尾面积 ,提示抗坏血酸能够降
低自发的细胞 DNA损伤。单独给予方剂Ⅰ ( 6. 5
表 1　白藜芦醇对预防非典型肺炎方剂Ⅰ 所致小鼠外周血液淋巴细胞 DNA损伤的保护作用 (x± s , n= 4)
Table 1　 Protective ef fect of resveratrol on lymphocyte DNA damage in mice
induced by prescript ionⅠ against SARS (x± s, n= 4)
组　别 剂量 / ( g· kg- 1) 尾 DNA含量 /% 尾长 /% 尾矩 /% 椭圆矩 /% 尾面积 /%
N S 　　 - 100. 00± 14. 80 100. 00± 6. 41 100. 00± 19. 09 100. 00± 20. 20 100. 00± 13. 31
白藜芦醇 　　 0. 050 111. 06± 23. 37 116. 36± 21. 87 149. 65± 52. 93 119. 09± 35. 67 110. 05± 18. 47
　　 0. 100 119. 49± 6. 71 98. 95± 6. 94 130. 31± 3. 18 120. 87± 4. 85 109. 22± 4. 50
　　 0. 200 108. 21± 9. 15 89. 45± 8. 76 104. 96± 13. 70 110. 03± 12. 94 114. 84± 10. 23
方剂Ⅰ 　　 6. 5 809. 64± 86. 02* * * 213. 98± 3. 03* * * 1 682. 98± 172. 67* * * 886. 89± 124. 67* * * 574. 51± 55. 87* * *
白藜芦醇+ 方剂Ⅰ 0. 050+ 6. 5 312. 85± 46. 85# # # 177. 44± 6. 94# # 571. 28± 86. 85# # 321. 84± 63. 48# # 247. 62± 50. 90# #
0. 100+ 6. 5 256. 10± 25. 15# # # 127. 66± 10. 51# # # 338. 30± 27. 86# # # 257. 28± 17. 73# # # 240. 20± 25. 75# #
0. 200+ 6. 5 151. 61± 30. 87# # # 113. 04± 7. 14# # # 176. 06± 34. 04# # # 140. 29± 17. 82# # # 137. 69± 23. 92# # #
　　　与生理盐水组比较: * * * P < 0. 001; 与方剂Ⅰ 组比较: # # P < 0. 01　# # # P < 0. 001
　　　* * * P < 0. 001 vs N S group; # # P < 0. 01　# # # P < 0. 001 vs prescript ion groupⅠ
·1115·中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 12期 2003年 12月
表 2　白藜芦醇对预防非典型肺炎方剂Ⅵ 所致小鼠外周血液淋巴细胞 DNA损伤的保护作用 (x± s , n= 4)
Table 2　 Protective ef fect of resveratrol on lymphocyte DNA damage in mice
induced by prescript ionⅥ against SARS (x± s, n= 4)
组　别 剂量 / ( g· kg- 1) 尾 DNA含量 /% 尾长 /% 尾矩 /% 椭圆矩 /% 尾面积 /%
N S 　　 - 100. 00± 10. 90 100. 00± 11. 78 100. 00± 12. 88 100. 00± 7. 25 100. 00± 4. 30
白藜芦醇 　 　 0. 050 81. 31± 6. 15 75. 30± 20. 23 64. 70± 21. 89 78. 43± 13. 30 71. 70± 22. 16
　 　 0. 100 65. 30± 12. 50 72. 06± 2. 06 46. 57± 12. 20 55. 88± 11. 81 47. 40± 11. 12
　 　 0. 200 60. 16± 3. 49 69. 15± 5. 42 43. 14± 5. 83 60. 78± 6. 79 68. 00± 10. 90
方剂Ⅵ 　　 12. 4 484. 19± 29. 96* * * 230. 71± 11. 28* * * 1 010. 78± 92. 49* * * 553. 92± 47. 51* * * 403. 75± 44. 88* * *
白藜芦醇+ 方剂Ⅵ 0. 050+ 12. 4 361. 81± 67. 75# # # 189. 49± 9. 50# # 644. 12± 141. 72# # 413. 72± 87. 38# # 319. 59± 52. 76# #
0. 100+ 12. 4 194. 66± 24. 42# # # 140. 62± 13. 35# # # 264. 22± 16. 84# # # 186. 76± 16. 49# # # 165. 71± 10. 35# # #
0. 200+ 12. 4 85. 01± 4. 14# # # 109. 64± 12. 24# # # 90. 20± 10. 28# # # 84. 80± 5. 27# # # 83. 63± 8. 26# # #
　　　与生理盐水组比较: * * * P < 0. 001; 与方剂Ⅵ 组比较: # # P < 0. 01　# # # P < 0. 001
　　　* * * P < 0. 001 vs N S group; # # P < 0. 01　# # # P < 0. 001 vs prescript ion groupⅥ
表 3　抗坏血酸对预防非典型肺炎方剂Ⅰ 所致小鼠外周血液淋巴细胞 DNA损伤的保护作用 (x± s , n= 4)
Table 3　 Protective eff ect of ascorbic acid on lymphocyte DNA damage in mice
induced by prescriptionⅠ against SARS (x± s, n= 4)
组　别 剂量 / ( g· kg- 1) 尾 DNA含量 /% 尾长 /% 尾矩 /% 椭圆矩 /% 尾面积 /%
N S 　　 - 100. 00± 18. 08 100. 00± 17. 32 100. 00± 28. 32 100. 00± 20. 22 100. 00± 18. 17
抗坏血酸 　　 0. 050 99. 50± 14. 08 97. 96± 9. 99 87. 89± 14. 52 96. 48± 18. 89 86. 90± 10. 86
　　 0. 100 62. 38± 11. 11 67. 13± 4. 48 36. 64± 6. 46 58. 98± 10. 60 74. 24± 12. 95
　　 0. 200 38. 78± 12. 24* 49. 29± 2. 33* 15. 53± 4. 10* 30. 86± 7. 98* 32. 36± 3. 74*
方剂Ⅰ 　　 6. 5 283. 17± 46. 50* 176. 55± 4. 07* * 416. 46± 68. 24* * 303. 52± 51. 16* 278. 29± 41. 22* *
抗坏血酸+ 方剂Ⅰ 0. 050+ 6. 5 133. 50± 35. 32# 120. 10± 11. 38# # 147. 52± 44. 81# 123. 44± 31. 23# 131. 86± 27. 63#
0. 100+ 6. 5 39. 44± 7. 77# # 78. 73± 8. 86# # # 31. 05± 8. 38# # 41. 80± 8. 66# # 52. 58± 9. 77# #
0. 200+ 6. 5 26. 90± 5. 12# # 50. 49± 2. 95# # # 11. 49± 1. 55# # 22. 66± 3. 75# # 26. 88± 3. 17# # #
　　　与生理盐水组比较: * P < 0. 05　* * P < 0. 01; 与方剂Ⅰ 组比较: # P < 0. 05　# # P < 0. 01　# # # P < 0. 001
　　　* P < 0. 05　* * P < 0. 01 vs NS group; # P < 0. 05　# # P < 0. 01　# # # P < 0. 001 vs p rescription g roupⅠ
表 4　抗坏血酸对预防非典型肺炎方剂Ⅵ 所致小鼠外周血液淋巴细胞 DNA损伤的保护作用 (x± s , n= 4)
Table 4　 Protective eff ect of ascorbic acid on lymphocyte DNA damage in mice
induced by prescriptionⅥ against SARS in mice (x± s, n= 4)
组　别 剂量 / ( g· kg- 1) 尾 DNA含量 /% 尾长 /% 尾矩 /% 椭圆矩 /% 尾面积 /%
N S 　 　 - 100. 00± 5. 31 100. 00± 4. 11 100. 00± 5. 89 100. 00± 4. 53 100. 00± 5. 87
抗坏血酸 　　 0. 050 84. 44± 21. 24 86. 10± 6. 36 77. 12± 22. 93 77. 90± 22. 27 84. 31± 19. 14
　　 0. 100 60. 19± 13. 91* 75. 09± 7. 13* 50. 67± 14. 82* 58. 87± 14. 74* 70. 11± 18. 99
　　 0. 200 84. 83± 12. 27 77. 08± 7. 77* 71. 62± 11. 03 83. 24± 13. 87 94. 81± 15. 79
方剂Ⅵ 　　 12. 4 231. 30± 49. 11* 119. 49± 9. 98 291. 23± 82. 24* 221. 52± 52. 31* 233. 37± 29. 05* *
抗坏血酸+ 方剂Ⅵ 0. 050+ 12. 4 109. 85± 23. 79 108. 79± 15. 29 134. 03± 35. 46# 110. 67± 24. 37 117. 31± 22. 00#
0. 100+ 12. 4 53. 20± 6. 81# 77. 22± 8. 14# 43. 39± 4. 44# 54. 10± 6. 13# 61. 53± 9. 58# #
0. 200+ 12. 4 69. 56± 9. 97# 65. 86± 6. 54# # 49. 03± 9. 26# 54. 48± 6. 93# 63. 87± 12. 92# #
　　　与生理盐水组比较: * P < 0. 05　* * P < 0. 01; 与方剂Ⅵ 组比较: # P < 0. 05　# # P < 0. 01
　　　* P < 0. 05　* * P < 0. 01 vs NS group; # P < 0. 05　# # P < 0. 01 prescript ion groupⅥ
g /kg )或方剂Ⅵ ( 12. 4 g /kg ) 均可致小鼠外周血液
淋巴细胞 DNA损伤 ,而给予方剂后再给予抗坏血
酸 ,小鼠外周血液淋巴细胞尾 DNA含量、尾长、尾
矩、椭圆矩及尾面积与单独给予方剂Ⅰ 和Ⅵ 组相比
有显著性改善 ,并呈一定的量效关系 ,提示抗坏血酸
对预防非典型肺炎方剂Ⅰ和Ⅵ 致小鼠外周血液淋巴
细胞 DNA损伤有明显的保护作用。
4　讨论
　　前期研究结果表明 ,预防非典型肺炎方剂Ⅰ 和
Ⅵ (临床等效量× 3 d)有明显的致小鼠外周血液淋
巴细胞 DNA损伤的作用 ,提示预防非典型肺炎方
剂Ⅰ 、Ⅵ 可能具有遗传毒性 [1 ]。本研究发现 ,在给予
上述方剂的同时给予白藜芦醇或抗坏血酸 ( 50,
100, 200 mg /kg× 3 d)能够明显地剂量依赖性地减
轻由方剂Ⅰ 和Ⅵ 造成的小鼠外周血液淋巴细胞
DNA损伤 ,说明抗氧化剂能够减轻预防非典型肺
炎方剂Ⅰ 和Ⅵ 造成的遗传毒性。文献报道 ,白藜芦醇
具有非常强大的自由基的捕获能力 ,其作用与经典
·1116· 中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 12期 2003年 12月
的抗氧化剂 ,如抗坏血酸或生育酚类似 [5, 6 ]。 这些抗
氧化剂能够保护 DNA免受氧化造成的损伤 [2, 3 ]。因
此 ,本实验结果提示 ,预防非典型肺炎方剂Ⅰ和Ⅵ 中
的某些成分在体内可能引发或促进了氧化反应 ,从
而造成了机体细胞 DNA的损伤。
机体在某些疾病状态时存在着较明显的氧化应
激现象 ,诸如抗氧化酶活性的降低 ,氧自由基的增多
等。在治疗这些疾病的同时往往辅以抗氧化剂以增
强机体的抵抗能力。其中抗坏血酸就是一种常用的
抗氧化剂。本研究发现某些预防非典型肺炎方剂能
够引起细胞 DNA损伤 ,但尚无法确定这种毒性作
用是否与其治疗作用直接相关 ,因而也无法确定抗
氧化剂 ,如白藜芦醇和抗坏血酸 ,对抗这些方剂的毒
性作用的同时是否也会降低方剂的疗效 ,还有待进
一步深入研究。
总之 ,本研究结果表明白藜芦醇或抗坏血酸与
预防非典型肺炎方剂Ⅰ 和Ⅵ 合用能降低方剂对细胞
DNA的损伤 ,为临床上提高服用预防非典型肺炎
方剂的安全性提供了一种可选择的思路。
致谢:沈阳药科大学 2003届毕业生吴波峰、王
大方参加部分工作。
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992-1 000.
夏天无胶囊剂及口服液与夏天无片剂镇痛作用比较
张慧灵 ,顾振纶 ,曹　奕 ,张　煜
(苏州大学医学院药理教研室、苏州中药研究所 ,江苏 苏州　 215007)
摘　要: 目的　观察夏天无胶囊剂及口服液的镇痛作用 ,并与夏天无片剂进行比较。方法　采用小鼠热板法及扭体
法 ,观察夏天无胶囊剂、口服液及夏天无片剂的镇痛作用。结果　与对照组比较 ,夏天无胶囊剂、口服液及夏天无片
剂均能显著延长小鼠热板反应痛阈值 (P < 0. 05, 0. 01) ,其作用于 ig后 30～ 60 min达高峰 ,维持 120 min; ig后 30
min镇痛的 ED50分别为 18. 85 ( 13. 98～ 20. 94) mg /kg , 19. 98 ( 11. 45～ 25. 58) mg /kg及 54. 61 ( 41. 71～ 71. 50)
mg /kg。与对照组比较 ,夏天无胶囊剂 、口服液及夏天无片剂亦能明显抑制小鼠扭体反应 (P < 0. 01) , ig后 30～ 40
min 镇痛的 ED50分别为 13. 99 ( 7. 60～ 19. 27) mg /kg , 15. 53 ( 7. 30～ 20. 08) mg /kg及 44. 05 ( 25. 32～ 76. 65)
mg /kg。 结论　夏天无胶囊剂及口服液具有与夏天无片剂相似的镇痛作用 ,且镇痛作用强于夏天无片剂。
关键词: 夏天无 ; 镇痛 ; 热板法 ; 扭体法
中图分类号: R286. 1　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 12 1117 03
Analgesic effects of Xiatianwu Capsule and Oral Liquid in comparison with its Tablet
ZHANG Hui-ling , GU Zhen-lun, CAO Yi, ZHANG Yu
( Institute o f Chinese Materia Medica, M edical Colleg e o f Su zhou Univ ersity, Suzhou 215007, China)
Key words: Xiatianw u; analg esia; ho t plate method; w ri thing method
　　夏天无为罂粟科紫堇属植物伏生紫堇 Cory-
dalis decumbens ( Thunb. ) Pers. 的块茎 ,是一种常
用民间草药 ,具有通络、活血祛瘀、行气止痛的功效。
夏天无中有效成分为生物碱 ,目前夏天无已制成多
·1117·中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 12期 2003年 12月
收稿日期: 2003-03-09作者简介:张慧灵 ( 1965— ) ,女 ,内蒙古人 ,硕士 ,副教授 ,苏州大学药理学专业在读博士 ,主要从事药理学教学及精神神经药理学的研究工作 ,发表论文 30余篇。 Tel: ( 0512) 65190599