全 文 ：定该波长为检测波长。
3. 3　使用了①甲醇 -水 ( 60∶ 40)、②甲醇 -水-醋酸
( 300∶ 200∶ 3)、③甲醇 -水 -醋酸 ( 25∶ 70∶ 30)和④
乙腈 -0. 1%磷酸-三乙胺 ( 80∶ 919∶ 1) 4种流动相 ,
发现以②及④较理想 ,考虑到试剂价格问题 ,选择②
作为流动相。 对流动相的流速 ,开始采用 1 mL /
min,结果保留时间不太满足 ,后改用 0. 3 mL /min。
3. 4　曾用氯仿 -水萃取提取咖啡因 ,发现有絮状物
粘于器皿壁 ,影响萃取效果 ,用氯仿作溶剂进行连续
提取咖啡因 ,时间太长。以本法提取 ,含量测定结果
准确 ,平均回收率为 97. 97%。对样品分析结果表明
阴性对照液基本不干扰咖啡因的测定。
　　从实验结果来看 ,本法灵敏度高、稳定性好、重
现性好、精密度、回收率都较满意 ,因此可作为解热
镇痛栓的质量控制方法。
References:
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青风藤单提及与其他药味共提对青藤碱提取率的影响
潘林梅 ,陈丹丹 ,董　洁 ,郭立玮
(南京中医药大学 植物药深加工工程中心 ,江苏 南京　 210029)
　　一常用抗内风湿关节炎的验方中含有青风藤、
雷公藤、 莶草 3味中药 ,该方用于治疗风湿痹痛、
关节肿胀等病证 ,临床疗效显著。青风藤为本方的君
药 ,青藤碱为青风藤中的主要有效成分之一。为了对
该方剂进行更深入地开发 ,本实验对青风藤药材进
行了含量测定研究 ,并考察了该复方中青风藤单提
及与雷公藤、 莶草共提时的青藤碱提取率的变化 ,
为该方提取工艺路线的制定提供依据。
1　实验材料
高效液相色谱仪: Waters 515泵 , Waters 2487
可调节紫外-可见检测器 , Wa ters U6K进样器 ,中
国科学院大连物理化学研究所 WDL-95色谱工作
站 , H66025超声清洗机 (无锡市超声电子设备厂 )。
药材均购自南京市药材公司 ,经南京中医药大
学中药鉴定教研室吴启南副教授鉴定 ,青风藤为防
己科植物青藤 Sinomenium acutum ( Thunb. ) Re-
hd. et Wils.的干燥藤茎 ;雷公藤为卫矛科植物雷公
藤 Tripterygium wil fordii Hook. f.的干燥根及根
茎 ; 莶草为菊科植物 莶 Siegesbeckia orientalis
L.、腺梗 莶 Siegesbeckia pubescens Makino或毛
梗 莶 Siegesbeckia g labrescens Makino的干燥地
上部分。
　　青藤碱对照品 (批号 0774-9904,供含量测定
用 ) ,经检测其纯度在 99%以上 ,由中国药品生物制
品检定所提供。
甲醇为色谱纯 ,水为重蒸水 ,其余试剂均为分
析纯。
2　方法与结果
2. 1　色 谱 条件: 色 谱 柱: Kromasil 反 相 C18
( 4. 6 mm× 250 mm, 5μm) (淮阴汉邦科技 ) ;流动
相: 甲醇 -水 -乙二胺 ( 55∶ 45∶ 0. 2) ;检测波长: 262
nm;柱温: 室温 ;流量: 1. 0 mL /min; 灵敏度: 0. 5
AUFS;理论塔板数按青藤碱峰计算应不低于 2 000,
在此条件下 ,青藤碱与其他组分达到基线分离。
2. 2　对照品溶液制备:精密称取干燥至恒重的青藤
碱对照品 3. 40 mg ,置 10 mL量瓶中 ,加甲醇溶解并
至刻度 ,即得。
2. 3　线性关系考察:取对照品溶液依次加甲醇稀释
为 170, 85, 42. 5, 21. 25, 10. 626μg /mL, 5μL进样 ,
按上述色谱条件测定峰面积。 以青藤碱浓度为横坐
标 ,峰面积值为纵坐标绘制标准曲线 ,计算得回归方
程为 Y= 3. 973× 106X+ 8 720. 897, r= 0. 999 9。表
·1096· 中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 12期 2003年 12月
收稿日期: 2003-03-26作者简介:潘林梅 ( 1971— ) ,女 ,江苏扬州人 ,助理研究员 ,硕士 ,毕业于南京中医药大学 ,主要从事中药制剂及新品研发工作。
Tel: ( 025) 6798397　 E-mail: plml jc@ sohu. com
明青藤碱在 0. 053～ 1. 7μg具有良好的线性关系。
2. 4　药材含量测定
2. 4. 1　药材供试液制备:取青风藤药材粉末 (过 80
目筛 ) ,精密称取 0. 5 g置具塞锥形瓶中 ,精密加入
70%甲醇 20 mL,密塞 ,称重 ,超声处理 (功率 250
W ,频率 20 kHz) 20 min,放冷 ,再称定质量 ,用
70%甲醇补足减少的质量 ,摇匀 ,滤过 ,上清液过
0. 2μm微孔滤膜 ,作为药材供试液。
2. 4. 2　精密度考察:精密吸取对照品溶液 ,依法重
复进样 6次检测 ,测定青藤碱峰面积 ,结果其 RSD
为 1. 23% (n= 6)。
2. 4. 3　稳定性考察: 药材供试液间隔 1 h测定青藤
碱峰面积 1次 ,共测 6次 ,结果表明 ,供试品溶液中
青藤碱在 5 h内稳定 ,其 RSD为 2. 13% (n= 6)。
2. 4. 4　加样回收率试验:精密称取 6份已知青藤碱
含量 ( 0. 68% )的青风藤药材约 0. 1 g ,分别加入青藤
碱对照品适量 ,按上述方法提取并测定 ,计算加样回
收率 ,结果平均收率为 97. 05% , RSD为 1. 62%
(n= 6)。
2. 4. 5　药材含量测定结果: 精密称取药材粉末 0. 5
g 3份 ,依法制备并测定青藤碱的含量 ,结果青风藤
中青藤碱含量为 0. 67% 。
2. 5　不同配伍测定结果:遵照原处方中的各药味间
的量的比例 ,按以下方案进行实验: 青风藤单提 (方
法Ⅰ ) ;青风藤与雷公藤按 3∶ 1比例共提 (方法Ⅱ ) ;
青风藤与 莶草按 1∶ 1比例共提 (方法Ⅲ ) ;青风
藤、雷公藤与 莶草按 3∶ 1∶ 3比例共提 (方法Ⅳ ) ;
雷公藤与 莶草按 1∶ 3比例共提 (方法Ⅴ )。
　　以上几种组合 ,各称取青风藤 150 g、雷公藤 50
g , 莶草 150 g饮片 ,分别加 70%乙醇提取两次 ,第
1次加 6倍量的醇 ,回流提取 2 h,第 2次加 4倍量
的醇 ,回流提取 2 h,滤过 ,合并 ,浓缩 ,使提取液含
生药量 0. 1 g /mL。各取上述样品液 2 mL,离心 ,上
清液过 0. 2μm微孔滤膜 ,进样测定 ,结果见表 1和
图 1。
　　提取率= 配伍样品中青藤碱含量药材中青藤碱的含量 × 100%
表 1　青风藤及其不同配伍中青藤碱提取率测定结果 (n= 3)
Table 1　Extraction rate of sinomerine of Caulis S inomenii
and its diff erent combinations (n= 3)
样品液 提取率 /% 样品液 提取率 /%
原药材 100. 00 Ⅲ 68. 58
Ⅰ 88. 43 Ⅳ 64. 96
Ⅱ 92. 86 Ⅴ —
　　从结果可以看出 ,青风藤与雷公藤共提时 ,样品
中青藤碱的提取率达 92. 86% ,高于青风藤饮片单
独提取时的提取率 88. 43% ,而青风藤与 莶草及 3
味药共提时的提取率分别仅有 68. 58%和 64. 96% ,
有一定的下降 , 莶草与雷公藤共提药液中未检出
青藤碱的峰 ,说明在此处没有干扰成分。
* -青藤碱
* -sinomerin e
A-青藤碱对照品　 B-青风藤单提　 C-青风藤与雷公藤共提
D-青风藤与 莶草共提　 E-青风藤、雷公藤与 莶草共提
F-雷公藤与 莶草共提
A-sinomerine reference subs tance　 B-Caul is Sinomenii
C-Caul is Sinomenii and Rhizoma Tr ipteryg ii
D-Caul is S inomeni i and Herba S iegesbeckiae
E-Caul is Sinomenii , Rhizoma Trip ter ygii and Herba Sieges-
beckiae　 F-Rhizoma Trip ter ygi i and Herba S iegesbeckiae
图 1　青藤碱及各配伍的 HPLC图
Fig. 1　 HPLC chromatograms of sinomerine and Caulis
Sinomen ii with its dif ferent combinations
3　讨论
3. 1　本方中药材青风藤中主要有效成分以生物碱
为主 ,其中青藤碱 ( sinomerine)的含量较高 ,其基本
母核为吗啡烷 ,脂溶性较好 ,故选择溶媒时以不同浓
度的醇来比较 ,结果以 70%乙醇提取最好 ,有效成
分的转移率高。
3. 2　文献报道 [ 1] ,雷公藤中的有效成分较复杂 ,有
雷公藤甲素 ( t ripterifordine)等内酯成分 ,也有雷公
藤碱 ( wilfordine)等生物碱类成分 , 莶草中的主要
有效成分有萜内酯、苷类 ,并含有一定的酸性物质 ,
如 莶萜内酯 ( o rientin) , 莶酯酸 (ent-17-acetox y-
18-isobutyry loxy-16α-kauran-19-oic acid)、 莶醚
酸 (ent-17-ethoxy-16α-kauran-19-oic acid)、大花沼
兰酸 ( g randi flo ric acid)等 [2 ] ,这种配伍时的含量变
化可能与其中某些碱性或酸性成分反应变化有关 ,
方中雷公藤及 莶草的成分变化及相关的机制有待
·1097·中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 12期 2003年 12月
深入研究。
3. 3　根据实验结果 ,为提高君药青风藤中主要有效
成分青藤碱提取率 ,在制定本复方提取工艺路线时 ,
拟以青风藤与雷公藤共提 ,其他药味另行处置为好。
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HPLC法测定藤茶中双氢杨梅黄素和杨梅黄素的含量
李瑛琦 1 ,于治国 1 ,陆文超 2
( 1. 沈阳药科大学药学院 ,辽宁 沈阳　 110016; 2. 沈阳药科大学制药工程学院 ,辽宁 沈阳　 110016)
　　藤茶系葡萄科蛇葡萄属显齿蛇葡萄 Ampelopsis
grossedentata ( Hand. -M azz. ) W. T. Wang的嫩
茎叶经传统加工揉制、干燥而成 [1 ]。该植物主要分布
于湖南、湖北、广西、广东、云南、贵州、江西、福建等
省区 [2 ]。其主要成分为双氢杨梅黄素 ( DIH)和杨梅
黄素 ( MYR) [3 ]。DIH具有明显拮抗去甲肾上腺素和
高 K+ 所致的兔胸主动脉条收缩反应及钙拮抗作
用 ,且毒性很低 [ 4, 5] ,并有祛痰止咳 ,降血脂和保肝等
作用 [6 ]。 MYR有抗菌、抗癌、止咳、祛痰、利尿等作
用 [7 ]。目前已报道的该药材中黄酮醇类化合物含量
测定方法有薄层扫描法 [8 ]和分光光度法 [9 ]。 本实验
建立了一种同时测定药材中 DIH和 MYR的 HPLC
方法 ,并对不同产地的药材进行了含量测定 ,为今后
对藤茶的进一步研究及充分开发利用奠定了基础。
1　仪器、试剂与材料
岛津 LC— 10ATvp高效液相色谱仪 ,岛津
SPD— 10Avp紫外检测器 , AN ASTAR色谱工作
站 , DT— 100光电天平。 DIH和 MYR对照品自制 ,
经 HPLC归一化法检查纯度高于 99. 0% ;藤茶药材
经沈阳药科大学生药学教研室孙启时教授鉴定。甲
醇 ,乙腈为色谱纯 ,水为二次重蒸水 ,其他试剂为分
析纯。
2　方法与结果
2. 1　 色 谱 条 件: 色 谱 柱: Kromasi l ODS 柱
( 250 mm× 4. 6 mm , 5μm) ;流动相: 乙腈 -2%冰醋
酸 ( 23∶ 77) ;流速: 0. 8 mL /min;检测波长: 275 nm;
柱温:室温 ;进样量: 20μL。在此色谱条件下 ,对照品
与样品的色谱图见图 1。
2. 2　对照品溶液制备: 精密称取 DIH 50 mg和
1-双氢杨梅黄素　 2-杨梅黄素
1-dihydromy ricetin　 2-m yricetin
图 1　双氢杨梅黄素 (A)、杨梅黄素 (B)和
藤茶 (C)的 HPLC图谱
Fig. 1　 HPLC chromatograms of dihydromyricetin (A) ,
myricetin ( B) , and A. grossedentata ( C)
MYR 5 mg,分别置于 25 mL棕色量瓶中 ,用甲醇溶
解并稀释至刻度 ,摇匀 ,得到 2 mg /mL DIH储备液
和 0. 2 mg /mL MYR储备液。
精密称取 DIH 500 mg和 MYR 50 mg ,分别置
于 25 mL棕色量瓶中 ,用甲醇溶解并稀释至刻度 ,
摇匀 ,得到 20 mg /mL DIH储备液和 2 mg /mL
MYR储备液。
2. 3　供试品溶液的制备:精密称取 60℃干燥 4 h
的藤茶粉末 0. 5 g ,加水 25 m L煎煮 2 h,趁热抽滤 ,
滤渣加 95%乙醇 25 mL回流提取 2 h,趁热抽滤 ,合
并二次提取液 ,加 95%乙醇 50 mL放置过夜 ,抽滤 ,
减压回收溶剂 ,残渣用甲醇 25 mL溶解并稀释至刻
·1098· 中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 12期 2003年 12月
收稿日期: 2003-02-25作者简介:李瑛琦 ( 1977— ) ,女 ,吉林省吉林市人 ,沈阳药科大学英语药学专业毕业 ,现攻读药物分析专业硕士学位。
Tel: ( 024) 23843711-3366　 E-mail: 2000liyingqi@ sina. com. cn