全 文 ：欧洲越桔和笃斯越桔体外抗氧化活性比较
卢艳花1, 邹彦平1, 秦会玲2, 刘建文1, 魏东芝1Ξ , 於洪建3
(11 华东理工大学生物工程学院 生物反应器国家重点实验室, 上海　200237; 21 临沂市仁和堂医药有限公司,
山东 临沂　276003; 31 天津尖峰天然产物研究开发公司, 天津　300402)
　　越桔类植物属杜鹃花科越桔属植物, 含多种活
性成分, 特别是花色苷类成分。国外对欧洲越桔
V accin ium m y rtillus L. 研究报道很多, 其总花色苷
对眼科疾病和心血管疾病有显著疗效, 目前已进入
临床试验阶段[1 ]。我国东北地区广布的笃斯越桔V .
u lig inosum L. 亦富含花色苷类成分, 但目前并未被
充分地开发药用, 仅在当地被酿成葡萄酒上市。为了
开发利用我国的药用植物资源, 挖掘笃斯越桔的药
用价值, 寻找欧洲越桔的替代品, 本实验对欧洲越桔
和笃斯越桔的标准植物提取物 (原花色苷 25% ,
UV 检测) 进行了清除自由基和体外抗氧化活性比
较, 发现笃斯越桔清除 O 2÷自由基、D PPH 自由基、
抗小鼠微粒体膜脂氧化的能力优于欧洲越桔。
1　材料
111　药物与试剂: 欧洲越桔和笃斯越桔标准提取
物: 深紫色粉末, 由天津尖峰天然产物公司提供 (原
花色苷 25% , UV 检测) , 以缓冲液配成不同浓度的
供试液。还原性辅酶É (NADH )、酚嗪二甲基硫酸
盐 (PM S)、四氮唑蓝 (NBT )、1, 1 二苯基222苦基苯
肼 (D PPH ) 为 Sigm a 产品; 维生素 E、特丁基对苯
二酚 (TBHQ ) 为 F luka Bochem ika 产品; 乙醇、硫
代巴比妥酸 (TBA )、三氯乙酸 (TCA )、硫酸亚铁
(FeSO 4)、抗坏血酸 (V c) 等均为国产分析纯, 中国
医药集团上海化学试剂公司。
112　动物: 昆明种小鼠, 18～ 22 g, 雄性, 由上海西
普尔必凯实验动物有限公司提供。
2　方法与结果
211　对 O 2÷生成的影响: O 2÷由 NADH 2PM S2NBT
系统 (16 mmo löL , pH 8. 0 的 T ris2HC l 缓冲液, 内
含 NADH 73 Λmo löL , PM S 15 Λmo löL , NBT 50Λmo löL ) 产生, 空白管不加 PM S, 对照管不加供试
样品, 均以等体积的缓冲液代替。供试样品的终浓度
分别为 91375, 18175, 3715, 75, 150 ΛgöL , 总反应体
积为 3 mL , 于波长 560 nm 测定吸光度 (A ) 值, 并
计算抑制率。结果显示, 欧洲越桔和笃斯越桔皆能明
显清除NADH 2PM S2NBT 系统产生的O 2÷, 且呈量
效关系, 笃斯越桔清除O 2÷的能力略优于欧洲越桔,
IC 50值分别为 13172, 21173 ΛgömL。两者的效果皆明
显优于阳性对照V c ( IC 50为 782 ΛgömL ) , 见表 1。
抑制率= [1- (A 样品- A 空白) öA 对照 ]×100%
表 1　欧洲越桔和笃斯越桔对 O 2÷的清除作用 (x±s, n= 3)
Table 1　Scaveng ing of V. myrtillus and V. u lig inosum
on superox ide radica l (x±s, n= 3)
组　别 剂量ö(Λg·mL - 1) A 样品- A 空白 抑制率ö%
对照 - 　　01491±01004 -
V c 770 01372±010053 3 24124
780 01247±010033 3 3 49169
790 01141±010043 3 3 71128
810 01088±010013 3 3 82108
830 01058±010023 3 3 88119
欧洲越桔 91375 01374±010083 3 23183
18175 01228±010063 3 3 53156
3715 01131±010073 3 3 73132
75 01057±010063 3 3 88130
150 01003±010013 3 3 99145
笃斯越桔 91375 01287±010073 3 3 41155
18175 01193±010063 3 3 60169
3715 01096±010083 3 3 80130
75 01042±010023 3 3 91139
150 01007±010023 3 3 98157
　　与对照组比较: 3 3 P < 0101　3 3 3 P < 01001
　　3 3 P < 0101　3 3 3 P < 01001 vs con tro l group
212 　对 D PPH 的清除能力: 参照 L arrau ri 和
Yokozaw a 等[2, 3 ]方法进行修改。利用D PPH 的醇溶
液在 517 nm 有最大吸收峰的特征, 以分光光度法
测定加抗氧化剂或植物提取物后A 517的下降来表示
其对D PPH 清除能力。反应体积 5 mL ,D PPH 溶于
少量甲醇后, 以 50% 乙醇配制为 200 Λmo löL , 植物
提取物以 50% 乙醇配制不同浓度, 反应时加 215
mL 提取液及 215 mL D PPH。室温放置 30 m in 后
于波长 517 nm 测定A 值变化。计算抑制率。结果
见表 2, 笃斯越桔对 D PPH 自由基的清除能力优于
欧洲越桔, IC 50值分别为 5186, 11187 ΛgömL。其中
·476· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 6 期 2004 年 6 月
Ξ 收稿日期: 2003209219
作者简介: 卢艳花 (1968—) , 女, 山东省青岛市人, 1999 年毕业于中国药科大学, 获理学博士学位, 主要从事中药活性成分、药理药效、质
量标准方面的研究工作, 已发表论文 20 余篇。3 通讯作者　
笃斯越桔的清除能力优于阳性对照 V E ( IC 50 为
12160 ΛgömL ) , 而欧洲越桔的作用效果和V E 相当。
抑制率= [1- (A 样- A 样空) öA 1 ]×100%
A 1为未加样品的D PPH (215 mL D PPH + 215 mL 50%
乙醇) 的吸光度, A 样为样品与 D PPH 反应后的吸光度, A 样空
为未加 D PPH 的样品 (215 mL 样品+ 215 mL 50% 乙醇)
的吸光度。
表2　欧洲越桔和笃斯越桔对D PPH 的清除作用 (x±s, n= 3)
Table 2　Scaveng ing of V. myrtillus and V. u li-
g inosum on D PPH (x±s, n= 3)
组　别 剂量ö(Λg·mL - 1) A 样- A 样空 抑制率ö%
对照 - 　　11063±01011 -
V E 6125 01768±010073 3 3 27175
1215 01456±010073 3 3 57120
25 01204±010033 3 3 81100
50 01149±010033 3 3 85198
100 01127±010063 3 3 88105
欧洲越桔 6125 01754±010043 3 3 29107
1215 01467±010063 3 3 56106
25 01109±010053 3 3 89175
50 01070±010043 3 3 93141
100 01018±010033 3 3 98130
笃斯越桔 6125 01575±010033 3 3 45191
1215 01310±010063 3 3 70184
25 01143±010043 3 3 86155
50 01105±010033 3 3 90112
100 01061±010053 3 3 94126
　　与对照组比较: 3 3 3 P < 01001
　　3 3 3 P < 01001 vs con tro l group
213　对小鼠肝微粒体膜脂氧化的抑制作用: 参照文
献方法[4 ] , 选用 18～ 22 g 雄性小鼠, 饥饿过夜, 断颈
处死, 迅速取出肝脏放入冰浴 PBS 中, 剪碎洗净, 加
入 3 倍 PBS 匀浆后, 9 800 röm in 4 ℃ 离心 20 m in,
取上清液以 PBS 配成 5% 肝脏匀浆液, 4 ℃ 保存备
用。计算样品对小鼠肝微粒体膜脂氧化的抑制率。结
果见表 3, 笃斯越桔对小鼠肝微粒体膜脂氧化的抑
制作用强于欧洲越桔, IC 50分别为 1218, 1513 Λgö
mL。略弱于阳性对照 TBHQ ( IC 50为 415 ΛgömL )。
抑制率= [1- (A 样- A 样空) öA 1 ]×100%
A 1为未加样品的反应液 (1195 mL 肝脏匀浆+ 0125 mL
样品+ 011 mL 4 mmo löL FeC l2+ 0. 2 mL 6 mmo löL V c) 的
吸光度, A 样为加样品的吸光度, A 样空为样品的空白 (1195
mL 肝脏匀浆+ 0125 mL 样品+ 013 mL PBS) 的吸光度。
3　讨论
　　自由基是一类反应性强、寿命短、包含一个未成
对电子的原子或原子团。活性氧自由基 (RO S) 包
括超氧阴离子自由基、羟自由基、过氧化氢、烷氧自
由基及一氧化氮自由基等。自由基可通过氧化还原
反应而产生, 并被特定的酶如过氧化氢酶、超氧化物
歧化酶、谷光甘肽过氧化物酶所清除。机体内过量的
表 3　欧洲越桔和笃斯越桔对小鼠肝微粒体
膜脂氧化的抑制作用 (x±s, n= 3)
Table 3 Inh ibition of V. myrtillus and V. u lig inosum on m i-
ce l iver m icrosome l ip id perox idation (x±s, n= 3)
组　别 剂量ö(Λg·mL - 1) A 样- A 样空 抑制率ö%
对照 　　　- 　　01852±01024 -
TBHQ 　　　1156 01673±010113 21101
3113 01469±010093 3 44195
6125 01171±010033 3 3 79193
1215 01093±010043 3 3 89108
25 01034±010023 3 3 96101
欧洲越桔 6125 01695±010183 18142
1215 01523±010163 3 38162
25 01204±010043 3 3 76106
50 01068±010023 3 3 92102
100 01040±010033 3 3 95131
笃斯越桔 6125 01640±010173 3 24188
1215 01421±010113 3 49115
25 01126±010043 3 3 85121
50 01041±010033 3 3 95119
100 01024±010023 3 3 97118
　　与对照组比较: 3 P < 0105　3 3 P < 0101　3 3 3 P < 01001
　　3 P < 0105　3 3 P < 0101　3 3 3 P < 01001 vs con tro l group
自由基可导致生物大分子如蛋白质、酶等变性和失
活, 作用于生物膜上的不饱和脂肪酸引起脂质过氧
化而导致生物膜结构和功能改变。许多病理生理现
象如衰老、癌症、心血管疾病、辐射损伤等都与体内
过剩的自由基有关。因此, 体内自由基的生成与清除
保持平衡状态对于机体的正常生命活动具有重要意
义。由于合成抗氧化剂有不良反应, 从植物活性成分
中寻求天然抗氧化剂已受到越来越广泛的重视。
越桔类植物大多含花色苷类活性成分。国外对
欧洲越桔研究报道很多。我国东北地区广布的笃斯
越桔亦富含花色苷类成分。本实验对笃斯越桔和欧
洲越桔在清除自由基、体外抗氧化方面的活性作了
比较研究, 发现笃斯越桔在清除O 2÷自由基、D PPH
自由基、抗小鼠微粒体膜脂氧化方面的能力优于欧
洲越桔。所以, 国产的笃斯越桔有望作为欧洲越桔的
替代品, 成为治疗眼科疾病和心血管系统疾病的新
药, 值得进一步研究开发。
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·576·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 6 期 2004 年 6 月