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高效液相色谱法测定叶下珠中槲皮素的含量
田　密 1 ,钟长平 1 ,江铁军 2
( 1. 广州奇星药业有限公司 ,广东 广州　 510310;　 2. 广州陈李济药厂 ,广东 广州　 510290)
　　叶下珠为大戟科叶下珠属植物叶下珠 Phyllan-
thus urinaria L. 的干燥全草 ,具有清热、解毒、明目
等功效 ,主要用于治疗腹泻下痢、尿路感染、肝炎等
病症 [1, 2 ]。药理研究表明具有很强的抑制乙肝表面抗
原 ( HBsAg )的活性 ,保护大鼠肝细胞 CCl4损伤 [3 ]等
作用。叶下珠含黄酮类、木脂素类、生物碱类、鞣质等
多种成分 [ 4～ 8] ,其中黄酮类化合物具有较明显抗病
毒活性 [9 ]。槲皮素是叶下珠中黄酮类化合物的主要
成分之一 ,具有抗自由基、抗氧化、抗癌防癌、抗菌、
抗病毒等多种生物活性及药理作用 [ 10]。目前尚未见
叶下珠中化学成分含量测定的报道 ,本实验建立了
测定叶下珠中槲皮素含量的方法 ,以控制叶下珠药
材的质量。
1　实验材料
Ag lent 1100型高效液相色谱仪 (美国安捷伦 )、
AG- 204电子天平 (瑞士 Mett ler Toledo ) ;甲醇为
色谱纯 ;水为去离子双蒸水 ;其他试剂为分析纯。槲
皮素对照品 (中国药品生物制品检定所 ) ;叶下珠经
广州中医药大学丁平副教授鉴定为大戟科叶下珠属
植物叶下珠 P . urinaria L. 的全草。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件: 色谱柱: Hypersi l ODS柱 ( 4. 0
mm× 250 mm, 5. 0μm);流动相:甲醇-0. 4%磷酸溶
液 ( 1∶ 1) ,流速: 1. 0 mL /min;柱温: 40℃ ;检测波
长: 360 nm;进样量: 20μL。 HPLC图谱见图 1。
2. 2　对照品溶液的制备: 精密称定槲皮素对照品
2. 0 mg ,置 10 mL量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻
度 ,制成含槲皮素 0. 2 mg /mL的对照品溶液。
2. 3　供试品溶液的制备:取叶下珠粉末 2. 5 g ,精密
称定 ,置索氏提取器中 ,加甲醇适量和 0. 4%硫酸溶
时间 t /min
a-槲皮素　 a-quercetin
图 1　槲皮素对照品 ( A)和叶下珠供试品 (B)的 HPLC图谱
Fig. 1　HPLC chromatograms of quercetin ( A)
and sample of P . urinaria (B)
液 20 mL,水浴加热提取至无色 ( 6 h) ,提取液挥至
约 30 mL,放冷 ,转移至 50 m L容量瓶中 ,加甲醇至
刻度 ,摇匀 ,用 0. 4μm微孔滤膜滤过 ,取续滤液作
供试品溶液。
2. 4　标准曲线: 精密吸取对照品溶液 1, 2, 4, 6, 8
μL,进样 ,测定槲皮素的吸收峰峰面积 ,以进样量为
横坐标 ,吸收峰峰面积为纵坐标作图 ,得回归方程
为: Y = 5. 1+ 3 723. 3X , r = 0. 999 9,线性范围为
0. 2～ 1. 6μg。
2. 5　精密度试验:同一供试品溶液 ,取相同体积 ,重
复进样 6次 ,按上述条件进行测定 ,其相对保留时间
稳定 ,峰面积 RSD= 0. 28%。
2. 6　重现性试验:同一批样品 ,按供试品溶液制备
方法平行制备 5份 ,按上述条件进行测定 ,其相对保
留时间稳定 ,峰面积 RSD= 1. 79% 。
2. 7　稳定性试验:在室温条件下 ,将本品按测定方
法处理后 ,每隔 1 h测定一次 ,得峰面积的 RSD=
1. 26% (n= 5)。结果表明在 4 h内溶液的含量基本
保持不变。
2. 8　回收率试验: 取已知含量的叶下珠粉末 1 g ,精
密称定 ,加入一定量的槲皮素对照品 ,按供试品溶液
·1141·中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 12期 2003年 12月
收稿日期: 2003-04-12作者简介:田　密 ( 1976- ) ,女 ,四川省江安县人 ,助理工程师 ,学士 (双专业 )学位 , 1999年毕业于广州中医药大学中药学院 ,现在广州奇星药业有限公司 ,主要从事中药药学工作。 　 Tel: 84206877
制备方法处理并进行测定 ,结果平均回收率为
96. 82% , RSD= 1. 38% (n= 5)。
2. 9　样品分析: 按确定方法对 3批叶下珠样品进行
测定 ,结果见表 1。
表 1　叶下珠槲皮素测定结果 ( n= 5)
Table 1　 Determinat ion of quercetin in P . urinaria ( n= 5)
样品批号 槲皮素含量 / ( mg· g- 1) RSD /%
1 0. 419
2 0. 420 3. 65
3 0. 417
3　讨论
3. 1　提取条件的选择:曾采用 70%乙醇提取 [11 ] ,酸
水解后用醋酸乙酯萃取 ,甲醇定容的方法 ,结果槲皮
素提取率低 ,难分离 ;后改用甲醇提取 ,酸水解后直
接定容的方法 ,结果槲皮素提取率高且易于分离。
3. 2　检测波长的选择:曾有人采用 254[ 12] , 360[13 ] ,
370 nm
[ 14] 3个波长测定槲皮素含量 ,作者对 3个波
长进行了筛选。槲皮素在 254 nm处有最大吸收 ,但
槲皮素出峰前的杂质吸收峰较大 ;波长在 360 nm
处杂质吸收峰降到最低 ,而槲皮素仍有较大吸收 ,因
而在确保分离度的情况下 ,选择了吸收较大的波长
360 nm进行测定。
3. 3　流动相的选择: 实验选用甲醇 - 0. 4%磷酸溶
液作流动相。甲醇量增大 ,可使出峰较好 ,减少拖尾 ;
但量太大 ,分离效果下降。流动相中加入一定量的磷
酸 ,可改善峰形和分离度 ,在保证分离度的情况下应
尽量减少磷酸的用量 ,这样可以增加柱的稳定性和
使用寿命。
3. 4　柱温的选择:柱温对样品的出峰时间及分离效
果有明显影响 ,曾采用室温 , 30℃ , 40℃的柱温 ,结
果柱温为 40℃时出峰时间适宜且分离效果较好。
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分光光度法测定白花蛇舌草中的钛含量
陈悦娇
(仲恺农业技术学院 食品科学系 ,广东 广州　 510225)
　　白花蛇舌草 Hedyotis dif fusa Willd. 系茜草科
耳草属植物 [1 ] ,广泛分布于亚热带地区。民间常用此
草药内服治疗小儿疳疾、毒蛇咬伤、癌肿及肠道疾
病。近年来临床上用于治疗多种恶性肿瘤 [2 ]。白花蛇
舌草对淋巴细胞具有明显地刺激作用 ,而且能刺激
巨噬细胞产生白细胞介素 -6和肿瘤坏死因子 ,说明
其有明显的免疫增强作用 [3 ] ,还能促进辐射损害的
白细胞恢复 [4 ]。 在微量元素定性和半定量分析结果
·1142· 中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 12期 2003年 12月
收稿日期: 2003-01-26作者简介:陈悦娇 ( 1970- ) ,女 ,广东潮阳人 ,实验师 ,在职硕士研究生 ,主要从事食品化学与分析及保健食品研究开发工作。 　
Tel: 89003180　 E-mail: cyuejiao@ 263. net