全 文 ：中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第10期2005年lo月
甘草黄酮对s，。。和H：：荷瘤小鼠肿瘤细胞DNA和RNA的影响
季宇彬1，姜薇2，尚 明1，王宏亮2
(1．哈尔滨商业大学生命科学与环境辩学研究中心，黑龙江略尔滨150075；2．哈尔滨商业大学
药物研究所博士后科研工作站，黑龙江哈尔滨150076)
摘要：目的观察甘草黄酮对Sm和Hz。荷瘤小鼠肿瘤细胞DNA及RNA的影响。方法Sm和H。荷癌小鼠随
机分为甘草黄酮高、中、低剂量(25、11．25、5．58mg／kg)组，阳性对照(环磷酰胺25mgIkg)组和阴性对照(生理
盐水)组，各组均sc给药。运用激光扫描共聚焦显微镜技术与吖啶橙(Ao)荧光探针技术结合检测单一肿瘤细胞
DNA和RNA的变化情况。结果不同剂量甘草黄酮组和环磷酰胺组的DNA及RNA荧光强度较生理盐水组有
不同程度的减弱；甘草黄酮高、低剂量组RNA／DAN值与生理盐水组比较差异无显著性；甘草黄酮中剂量组、环瞬
酰胺组RNA／DNA值较生理盐水组有非常显著提高(P
关键词；甘草黄酮；肿瘤细胞；激光扫描共聚焦显微镜；吖啶橙(AO)
中圈分类号：R286．91 文献标识码：A 文章编号；0253—2670(2005)10—1518—03
EfleetofGlycyrrhizaflavonoidsoilDNAandRNAintumorcell
ofS180andH22tumor—bearingmice
JIYu-binl，jlANGWei2，SHANGMin91，WANGHong—lian92
(1-CenterofR searchandDevelopmentOBLifeSciencesandEnvironmentalSciences．HarbinUniversity
ofCommerce，Harbin150076·China·2．PostdoctoralProgramme．InstituteofMateriaMedica，
HarbinUniversityofCommerce，Harbin150076，China)
Abstract：ObjectiveToobserveeffectsofGlycyrrhizaflavonoidsonDNAandRNAintumorce|lof
S180andH22tumor—bearingmice．MethodsS180andH22micewererandomlydividedintoGlycyrrhiza
flavonoids(25，11．Z5，and5．58mg／kg)groups，positivecontrol(cytoxan25mg／kg)group，andnega—
tivecontr01(NS)group，whomweregivendrugsbySC．DNAandRNAintumorcellswereexamined。re—
speetivelybyI，aserScanningConfocalMicroscopeandfluoreseentprobeofacridineorange(Ao)technolo—
gy．ResultsAlldifferentdosageofGlycyrrhizaflavonoids，cytoxanreducedthehrighmessoffluores—
cenceofDNAandRNAl lowandhighdosageofGlycyrrhizaflavonoidshadno ignificanteffectontheflu—
orescencepix lsofRNA／DNA}BothmiddledosageofGlycyrrhizaflavonoidsancytoxanh dsignificant
effectonthefluorescenceplxelsofRNA／DNA(尸<0．01)．ConclusionTheduplicationndsy thesisof
DNAandRNAintumorceilsarerestrainedaft rGlycyrrhizaflavonoidsb ndingwiththem．Thiseffect
maybeoneofthemechanismsofantitumoreffectofGlycyrrhizaflavonoids．
Keywords：Glycyrrhizaflavonoids#tumoreel】；I，aserScanningConfocalMicroscope(LSCM)l
acridineorange(AO)
甘草黄酮(Glycyrrhizaflavonoids)是从豆科
甘草属植物胀果甘草GlycyrrihizainflataB t．的
根和根茎中提取分离出的总黄酮。据报道其有抗氧
化、抗肿瘤、保肝、抗溃疡、抗心律失常和抑制HIV、
抗血栓、抗动脉硬化等作用o]。文献报道甘草黄酮类
混合物G“；具有抗促癌、抗致突变作用o“。但甘草
黄酮抗肿瘤的作用机制至今尚未见报道。本实验室
前期研究发现甘草总黄酮能显著延长s。和H。。荷
瘤小鼠的生存时间，其抑瘤率与生理盐水组比较差
异显著。为迸一步探讨甘草黄酮抗肿瘤作用机制，本
实验研究了甘草黄酮对肿瘤细胞核酸的影响。
1材料
l。l实验动物；昆明种小鼠(20d：2)g，雌雄各半，
哈尔滨医科大学动物中心提供，许可证号SCXK
(黑)20020001。
1．2瘤株：S．。H。。瘤株(黑龙江省肿瘤医院，由本
收藕日期：2005—03一Z5
箨喜薷舁浑李皂嚣凳篱篱垦￡靛嚣茹娑端?捌缔裟佩警龋?踮⋯。
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第lo期2005年lo月·1519·
实验室移植传代)。
1．3药物与试剂：甘草黄酮(质量分数96％，哈尔
滨商业大学药物研究所博士后工作站提供){环磷酰
胺(江苏恒瑞医药股份有限公司，批号05062611)；
吖啶橙(AO，Sigma公司产品)。
I．4仪器：细胞计数板；激光扫描共聚焦显微镜
(1eica)；HH—s恒温水浴箱(江苏省金坛市医疗仪
器厂)；I．D。一2A型台式低速离心机(北京医用离心
机厂)}QL～861型涡旋混合振荡器(上海博停经贸
有限公司)。
2方法
2．1接种、分组和给药：将实验小鼠按《全国抗肿瘤
药物体内筛选规程》方法腹腔接种H。。腹水型瘤株
(s。操作相同)。于接瘤24h后将小鼠随机分成5
组，分别为甘草黄酮高、中、低剂量组，环磷酰胺阳性
对照组和生理盐水阴性对照组，每组10只小鼠。甘
草黄酮各组分别SC甘草黄酮25、11．25、5．58rag／
kg，阳性对照组SC环磷酰胺25mg／kg，阴性对照组
SC同体积生理盐水。无菌连续给药7d。
2．2样本制备：停药次日，在冰台上处死小鼠，取出
肿瘤细胞，加培养液洗涤离心(800r／min)一次。弃
上清渡，用培养液将下层细胞制备成一定浓度的细
胞悬液。
2．3黏附细胞：均匀滴加1％明胶液至载玻片一
面，于37c培养箱中干燥，将细胞悬液滴加其上，
放置37C培养箱中贴壁10～15min，同时以光学
显微镜观察贴壁情况，培养液洗去未贴壁细胞。
2，4荧光染色：滴加0．01％A0染料12pL，避光
37℃孵育15min，用培养液洗去多余染料。
2．5观察方法：将载玻片倒置于激光共聚焦显微镜
上，使用488nm氩离子激光激发荧光染料AO，在
高倍镜(x40，NA0．55)和7％中性滤光镜下进行
检测。进入Z—Image程序，直接在光学显微镜下寻
找贴壁良好的细胞。扫描参数为：，J、孔孔径225pm，
x轴扫描点数200。Y轴扫描点数150，扫描步径
0．3“m，Z轴扫描次数l，镜扫描速度20mm／s，扫
描强度50％，激光强度4．2mW，每点采样次数24，
检测器1和检测器2灵敏度均为45％。激光沿Z轴
扫描，获得细胞断层的扫描信息o“3。
2．6统计学方法：数据用SPSSll．0进行方差分
析，数据用z±5表示。
3结果
本实验结果显示不同剂量甘草黄酮及环磷酰胺
组s。和H：。荷瘤小鼠肿瘤细胞DNA、RNA荧光强
度较生理盐水组有不同程度的减弱。甘草黄酮中剂
量组、环磷酰胺组RNA／DNA值较生理盐水组明
显升高，差异显著(P
(尸>0．05)，结果见表1。
衰1首簟冀一对S,x和H。荷■小鼠肿瘤细胞
RNA和DNA比擅的影响
Table1 EffectofGlycyrrhizaflavonoldsOUtratio
ofRNAandDNAtntumorcellofSm
andH2ltumor—bearingmice
与生理盐_】Ic组比较{一P<0．Ol
～P
DNA是一切生物遗传的主要物质基础，遗传
信息通过DNA转录成RNA，然后由RNA翻译成
特定的蛋白质，通过蛋白质执行各种生命功能。肿瘤
细胞DNA和RNA是体内抗癌药物作用的主要靶
标，药物与肿瘤细胞DNA和RNA结合后抑制其
进一步复制与合成，从而抑制癌细胞的恶性生长。
激光扫描共聚焦显微镜是在荧光显微镜成像的
基础上附加了激光扫描装置，使用紫外线或可见光
激发荧光探针，对细胞进行非创伤性扫描，可在亚细
胞水平观察细胞内物质代谢的变化。本实验所采用
的荧光探针AO是一种三杂环芳香类染料，常用于
细胞内DNA和RNA的定量测量，低浓度的AO
与核酸有较好的结合力，其浓度在1 t 500～1：
10000可以对活细胞内DNA和RNA进行双重染
色。AO与核酸的结合方式有两种n]：一种是嵌入核
酸双链的碱基对之间，形成AO—DNA复合物发出
黄绿色和绿色荧光l另一种是与单链核酸的磷酸发
生静电问相互作用，形成AO—RNA复合物发出橙
色和红色荧光。药物与AO可能会出现竞争络合反
应，抑制AO—DNA和AO—RNA的形成，从而降低
复合物荧光强度，跟踪此体系的荧光变化，可以推测
药物与核酸作用情况，从而对药物是否具有抗癌活
性做出判断。激光共聚焦显微镜技术与荧光探针技
术结合可以使单一细胞核酸变化的观测更为直观、
快速、简便”]。
本实验结果显示，各剂量组的甘草黄酮作用于
万方数据
·1520· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第10期2005年10月
s。80和H。：小鼠肿瘤细胞均可使DNA和RNA荧光
强度较生理盐水组有不同程度的降低。说明药物已
经与肿瘤细胞DNA和RNA产生了不同程度的结
合，抑制了AO与DNA和RNA的结合，导致AO
与核酸结合的复合物荧光强度有不同程度的降低；
甘草黄酮低剂量组对RNA／13NA无影响(P>
0．05)；甘草黄酮中剂量组的RNA／DNA值较生理
盐水组明显升高，可能是DNA损伤严重，合成量减
少，而RNA合成抑制程度较轻，DNA减少的程度
超过RNA；甘草黄酮高剂量组RNA／DNA值较生
理盐水组无显著差异，分析原因可能是随剂量增加
RNA损伤加重，致使RNA／DNA值与生理盐水组
接近。提示药物作用后可能是肿瘤细胞DNA先受
损，随后RNA由于没有模板合成才开始下降。环磷
酰胺组DNA和RNA荧光强度较生理盐水组降
低；RNA／DNA值较生理盐水组显著升高。有研究
报道环磷酰胺对体外淋巴细胞AO—DNA荧光抑制
率很低‘9j。结合起来看这与环磷酰胺的作用机制是
非常吻合的。环磷酰胺原无烷化活性，需在体内经代
谢成有活性的磷酰胺氮芥后发挥烷化作用。磷酰胺
氮芥性质活泼，能与DNA发生交叉联结，抑制
DNA合成+干扰DNA和RNA功能。从丽达到很
好的抗肿瘤作用。综上所述，甘草黄酮可明显抑制
S。。。和H”荷瘤小鼠肿瘤细胞DNA和RNA复制与
合成，这可能是其抗肿瘤作用的机制之一。
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轮叶婆婆纳中二萜类化学成分的体外抗癌活性研究
张富赓1，胡人杰2，张韶瑜3，张彦文3，高文远1，段宏采”
(1．天津大学药物科学与技术学院，天津300072·2．天津医药科学研究所．天津300070
3，天津医科大学药学院，天津300070)
摘要：目的研究轮叶婆婆纳Veronicasibirica中二萜类成分的体外抗癌作用。方法以TJ905和HeLa细胞为
研究对象，采用MTT{去对获得的化合物进行抗癌括性初筛并对初筛活性高的化合物进行剂量依赖性实验，测定
其Ic*值。结果对轮叶婆婆纳石油醚及醋酸乙酯提取物中的7个二萜共化台物：二氢丹参酮I(I)、丹参酮I
(I)、丹参酮ⅡA(Ⅱ)，隐丹参酮(IV)、婆婆纳对醌A(V)、婆婆纳对醌B(Ⅵ)、弥罗松酚(Ⅶ)进行了体外抗肿瘤活性
考察，表明化合物1和IX／具有显著的抗癌活性．化合物I对TJ905及Hel。a细胞生长的1cs。值分别为3．038、1．816
／tg／mL。化合物IV对TJ905及HeLa细胞生长的Ic5。值分别为3，637、4．391,ug／mL。结论轮叶婆婆纳中的二氢
丹参酮【和隐丹参酮对TJ905及HeLa细胞具有较强的生长抑制括性。
关麓词t轮叶婆婆纳；二萜类化合物}抗癌活性
中图分类号：R286．1 文献标识码：A 文章缡号：0253—2670(2005)10—1520—04
鉴銎是智：癸嚣盖并吴学科研基金资助
*通讯作者段宏泉Tel：(022)23542838Fax：(028)23528891E—mail{duanhq@tijmu．educa
万方数据
甘草黄酮对S180和H22荷瘤小鼠肿瘤细胞DNA和RNA的影响
作者： 季宇彬， 姜薇， 尚明， 王宏亮， JI Yu-bin， JIANG Wei， SHANG Ming， WANG Hong-
liang
作者单位： 季宇彬,尚明,JI Yu-bin,SHANG Ming(哈尔滨商业大学,生命科学与环境科学研究中心,黑龙
江,哈尔滨,150076)， 姜薇,王宏亮,JIANG Wei,WANG Hong-liang(哈尔滨商业大学药物研究
所,博士后科研工作站,黑龙江,哈尔滨,150076)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(10)
被引用次数： 6次
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