全 文 :中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第8期2005年8月·1233·
药方的时候都直接写成粉葛;另外,可供大量开发利
用的野生葛根资源有限,同时又可能造成对生态环
境的破坏。因此,对粉葛进行多倍体育种是有必要
的。通过染色体加倍后得的多倍体植株往往根、茎、
叶变大,即表现为产量增加,同时往往表现出有效化
学成分明显高于二倍体的基因调控的正选择结果,
还可能产生新的物质。如四倍体的曼陀罗和月见草
的药效都比二倍体好。并且葛根主要药用部分是根
部,主要通过营养繁殖繁殖,多倍化所带来的育性下
降、不能结实等负效应并不会影响其利用,通过多倍
体育种可望筛选出产量高、药效好的葛根新品种。本
实验所得到的四倍体的有效成分含量还有待测定。
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9种“藏茵陈”原植物中的7种有效化学成分研究
杨慧玲1’2,刘建全¨
(1.中国科学院西北高原生物研究所青藏高原生物进化与适应开放实验室,青海西宁810001;
2.中国科学院研究生院,北京 100039)
摘要:目的研究藏药市场上9种“藏茵陈”植物中有效化学成分,根据所含成分的差异及其生理活性,确定这些
植物的药用价值。方法采用HPLC法测定7种成分的量。结果9种植物的有效成分差异很大。结论针对不
同的化学成分用途,选择不同的植物,有效利用资源。
关键词:藏茵陈;成分;HPLC
中图分类号:R282.6 文献标识码:A 文章编号:0253—2670(2005)08—1233一05
SevenconstituentsinninespeciesusedasTibetanmedicine“Zangyinchen
YANGHui—lin91”,LIUJian—quanl
(1.LaboratoryofQinghai—TibetPlateauBiologicalEvo utionandAdaptation,NorthwestInstituteofPlateau
Biology,ChineseAcademyofSciences,Xining810001,China;2.GraduateSchoolofChin se
AcademyofSciences,Beijing100039,China)
Keywords:Zangyinchen;activeconsti uents;HPLC
“藏茵陈”的原植物是龙胆科川西獐牙菜Swer-
tiamussotiiFranch.[1],在藏药中用途较广,用于治
疗肝炎、胆结石、消炎、清热、抗病毒和细菌引起的各
种疾病等[2’3]。从“藏茵陈”类植物中分离出的化学物
质主要有齐墩果酸、獐牙菜苦苷、芒果苷、当药黄素
和各种劬酮类物质[1]。齐墩果酸被证明在治疗多种
肝中毒具有显著作用口],还发现其通过降低毒性代
谢产物来保护急性肝损伤,提高葡萄糖酶增加解毒
作用,是“藏茵陈”治疗肝炎的主要活性成分[4]。獐牙
菜苦苷经检验主要具有清热、消炎等生理作用[5~8]。
当药黄素虽然具有保肝作用,但最重要的是其对
CCl。引起的转氨酶升高有降低作用[3’8’9]。芒果苷主
要具有抗氧化[9’1“、抗结核[1妇和抗菌作用[12’13|。讪
酮、1,8一二羟基一3,5一二甲氧基劬酮、1,5,8一三羟基一
收稿日期:2004—10—12
基金项目:归国留学人员重点科研项目;中国科学院知识创新工程方向性项目(KSCX—SW一106);中国科学院“西部之光”人才培养计划
和全国优秀博士论文专向基金资助
*通讯作者刘建全E—mail:ljqdxy@public.xn.qh.cn
万方数据
·1234· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第8期2005年8月
3一甲氧基劬酮及1,8一二羟基一3,7一二甲氧基Ⅱ山酮和
上述化合物有相似的生理作用;各种柚酮的总提取
物经常一起用来治疗上述疾病[14~16|。但这些成分是
否在使用的每一种“藏茵陈”植物种类中都存在,或
者量相当,仍然不清楚。本实验主要比较这些化学成
分在各植物种类中是否存在及其量;为治疗疾病和
开发新药时根据活性成分的有无和量的多少来选择
有关特定种类提供科学依据。
1仪器和实验材料
1.1 仪器:Waters高效液相色谱仪系列,Waters
600E液相色谱仪,Waters486紫外检测器,Waters
746数据处理系统,Millipore溶剂过滤系统。
1.2试剂:对照品(均来自中国药品生物制品检定
所),实验用水为纯净水(杭州娃哈哈集团公司),甲
醇(色谱纯),其他试剂均为分析纯,试剂使用之前均
通过Millipore溶剂滤过系统滤过。
1.3药材样品:除尼泊尔獐牙菜以外,其余的药材
样品均是笔者在2002年7月一9月野外采集,分别
采自青海和西藏的高海拔地区;物侯期均为各种植
物的花期、全草,阴干;尼泊尔獐牙菜购自药材市场
(西藏尼泊尔经贸公司,花期)。凭证标本存中国科学
院西北高原生物研究所,由刘建全鉴定种类。研究的
种类样品详细情况见表1。
表1样品详情列表
Table1 Informationofsamples
名称 采集地点 采集时期 海拔/m
2方法与结果
2.1 色谱条件:色谱柱:PhenomenexkromasicC18
柱(250mm×460mm,5弘m);流动相:甲醇和水加
入少量1%H。PO。,甲醇的体积分数分别为:獐牙菜
苦苷28%,芒果苷32%,当药黄素45%,齐墩果酸
96%,口山酮78%。检测波长分别为:獐牙菜苦苷227
am,芒果苷254am,当药黄素254nm,齐墩果酸
220rim,柚酮254nm。体积流量:1mL/min。温度均
为室温。HPLC色谱图见图1(其中样品的色谱图以
川西獐牙菜为代表)。
2.2对照品储备液的制备:分别准确称取獐牙菜苦
苷、芒果苷、当药黄素、齐墩果酸、1,5,8一三羟基一3一
甲氧基曲酮(S,)、1,8一二羟基~3,7一二甲氧基劬酮
(S。)和l,8一二羟基一3,5一二甲氧基曲酮(S。)的对照
品适量,用70%甲醇(獐牙菜苦苷、芒果苷)、甲醇
(当药黄素、S。、S。、S。)、50oA甲醇(齐墩果酸)溶解并
配制成一定质量浓度的对照品储备液,精密吸取对
照品储备液适量,分别用相应的甲醇溶液稀释成质
量浓度分别为:獐牙菜苦苷0.0051mg/mL、芒果苷
0.0025mg/mL、当药黄素0.045mg/mL、齐墩果酸
0.472mg/mL、讪酮分别为S16.2mg/L、Sz6.3
mg/L、S。5.4mg/L的对照品溶液,备用。
2.3样品溶液的制备:取植物全草,阴干,粉碎,准
确称取1.000g(其中测定齐墩果酸为2.000g),加
70%甲醇(含0.04%磷酸)、齐敦果酸加乙醇、汕酮
类化合物加甲醇40mL,超声提取30min,滤过,滤
液定容至50mL,过0.45肛m滤膜,即为各自的样品
溶液。
2.4标准曲线的制备:分别精密吸取上述各对照品
溶液4、8、10、12、16肛L进样,按照上述各自的色谱
条件进样测定峰面积,各峰面积经统计处理,求得各
自的回归方程:獐牙菜苦苷回归方程为Y=
870.46+1106482.03X,r=0.9997,线性范围
1.5~8.2pg;芒果苷回归方程为Y一85.04+
193068.40X,r一0.9997,线性范围0.5~2.5肛g;
当药黄素回归方程为:Y一31.34+133.52X,r一
0.9994,线性范围18~90弘g;齐墩果酸回归方程
为:Y一一203.10+43927.77X,r一0.9997,线性
范围180.8~755.2g-g;Ⅱ山酮类化合物S。回归方程
为:Y=47.49+1136.49X,r=0.9992,线性范围
1.86~9.3P-g;S2回归方程为:Y一一40.23+
10661.46X,r=0.9993,线性范围1.89~9.45
弘g;S3回归方程为:Y一一36.89+121 5.32X,r一
0.9991,线性范围1.62~8.1p-g。
2.5精密度试验:分别精密吸取各对照品溶液,在
各自对应的上述色谱条件下,将质量浓度为0.0051
mg/mL獐牙菜苦苷,0.0025mg/mL芒果苷,
0.045mg/mL当药黄素,0.472mg/mL齐墩果酸
和混合对照品溶液(同2.2的S,,S:,S。)的对照品溶
液分别吸取10肛L连续进样5次,测定峰面积,计算
RSD值分别为1.02%獐牙菜苦苷、0.54%芒果苷、
1.15%当药黄素、1.23%齐墩果酸,0.79%、0.71%、
0.80%(S】、S2、S3)(行一5)。
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第8期2005年8月·1235·
卜—■r—{广矗
A
1..............1..............【......_J
0 5 10 15
B
I...............J...............jL........_J
0 10 20 30
:b
I................J【................J.........一
0 5 10 15
C
1......、......J..............1......._一
0 5 10 15
d
争—古—1}弓
E
A、B、C、D分别是獐牙菜苦苷、芒果苷、当药黄素、齐墩果酸对照品的色谱图;E中的5、6、7分别是1,5,8-三羟基一3一甲氧基咄酮、1,
8一二羟基一3,7-二甲氧基汕酮和1,8-二羟基一3,5-二甲氧基曲酮对照品的色谱图;a、b、C、d、e都是以JII西獐牙菜为代表的7种化合物
的色谱图,1、2、3、4、5、6、7分别代表化合物獐牙菜苦苷、芒果苷、当药黄素、齐墩果酸、1,5,8-三羟基一3一甲氧基咀【|酮、1,8-二羟基一3,
7一二甲氧基柚酮和1,8-二羟基一3,5-二甲氧基mff酮
HPLCchromatogramsfcontrolsamplesswertiamarin(A),mangiferin(B),swertisin(C),oleanolicacid(D);Erepresents
HPLCchromatogramsofst ndardsof1,5,8-trihydroxy一3一methoxyxanthone(5),1,8-dihydroxy一3,7-dimethoxyxanthone(6)
and1,8-dihydroxy一3,5-dimethoxyxanthone(7)respectively,chromatogramsofsev nconsti uentsforS.mussotiia ea,b,C,d,
ande,respectively;constituentsofswertiamarin,mangiferin,swertisin,oleanolicacid,1,5,8-trihydroxy一3一methoxyxanthone,
1。8-dihydroxy一3,7-dimethoxyxanthone,and1,8-dihydr xy一3,5-dimethoxyxanthoneares wedin1,2,3,4,5,6,and7,
respectively
图1 HPLC图谱
Fig.1HPLCchromatogramsofcontrolsamples
2.6稳定性实验:取同一供试品溶液(以川I西獐牙
菜为例),分别在制备后0、2、6、12、24h进样,分别
测定獐牙菜苦苷、芒果苷、当药黄素、齐墩果酸、1,5,
8一三羟基一3一甲氧基汕酮、1,8一二羟基一3,7一二甲氧基
劬酮和1,8一二羟基一3,5一二甲氧基Ⅱ山酮峰面积,计算
得其RSD分别为1.25%、0.65%、1.21%、1.45%、
0.87%、0.82%和0.76%(咒一5)。表明供试品溶液
在24h内稳定。
2.7重现性试验:取同一材料样品5份(以川西獐
牙菜为例),按供试品溶液制备方法制备及测试条件
测定,计算獐牙菜苦苷、芒果苷、当药黄素、齐墩果
酸、1,5,8一三羟基一3一甲氧基劬酮、1,8一二羟基一3,7一
二甲氧基劬酮和1,8一二羟基一3,5-二甲氧基咄酮的
量,得其RSD分别为1.73%、1.64%、1.36%、
0.970A、0.68%、1.24%、0.540A(咒一5)。
2.8 加样回收率试验:分别取含獐牙菜苦苷
(0.0051mg/mL)、芒果苷(O.0025mg/mL)、当药
黄素(O.045mg/mL)、齐墩果酸(o.472mg/mL)和
口山酮分别为S16.2mg/L、Sz6.3mg/L、S35.4rag/
L的川I西獐牙菜样品溶液,分别精密吸取1mL,置
5mL量瓶中,分别精密加入一定量的獐牙菜苦苷、
芒果苷、当药黄素、齐墩果酸、3种毗n酮S。、S:、S。对
照品,加甲醇溶解,并稀释至刻度,摇匀,各取10肛L
进样,测定各自的峰面积,计算回收率(以川西獐牙
菜为例)。结果平均回收率分别为100.260/、RSD为
0.98%(獐牙菜苦苷);99.98%、RSD为1.13%(芒
果苷);100.14%、RSD为1.08o/(当药黄素);
99.58%、RSD为0.98%(齐墩果酸);98.87%、RSD
为0.89%(S1);99.24%、RSD为0.92%(S2);
98.96%、RSD为0.76%(S3)(,z=5)。
2.9样品的测定:在上述对应的色谱条件下分别吸
取各种制备好的供试品储备液10弘L重复进样3次
测定,测得獐牙菜苦苷、芒果苷、当药黄素、齐墩果
酸、1,5,8一三羟基一3一甲氧基曲酮、1,8一二羟基一3,7一
■■Ⅲ—蛋■■■H1●l
警
万方数据
·1236· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第8期2005年8月
二甲氧基口山酮和1,8一二羟基一3,5一二甲氧基mn酮的行,利用One—wayANOVA,Posthoc—LSD。9种植
各种药材样品。所有的统计分析在SPSS10.0下进 物的7种化学成分结果见表2。
表2 9种植物中7种化合物测定结果(一一3)
Table2 Determinationofsevecompoundsin inepecies(一一3)
3讨论
3.1检测波长的选择:分别将对照品獐牙菜苦苷、
芒果苷、齐墩果酸、当药黄素、Ⅱ血酮的甲醇溶液,在
190~400nm进行扫描,结果獐牙菜苦苷在227
am,芒果苷在254nm,齐墩果酸在220nm,当药黄
素254nm,础酮在254nm处其线稳定,波形较好,
故选择上述波长为最佳,不但基线平稳而且峰与峰
分离完全。
3.2提取方法的选择:精密称取各种药材粉末适量
(过40目筛)于50mL锥形瓶中,加甲醇40mL,分
别采用冷浸1、2和3h;超声10、20和30min;滤过,
然后用甲醇定容至50mL,过微孔滤膜0.45tim,进
样10肛L,测定,结果用超声提取30min效果最好。
3.3提取溶剂的选择:精密称定一定量的各种药材
粉末,分别加入70%甲醇、甲醇、无水乙醇、70%乙
醇40mL于50mL锥形瓶中,超声提取30rain,然
后滤过定容,过微孔滤膜测定,结果70%甲醇对獐
牙菜苦苷、芒果苷和当药黄素的提取率最高,无水乙
醇对齐墩果酸、劬酮的提取率最高。
3.4 比较了9种在市场上用作“藏茵陈”龙胆科植
物的7种有效成分。齐墩果酸被认为是“藏茵陈”治
疗肝炎的重要活性成分之一[4]。该成分在每一种植
物中都有发现,可能也是所检查的9种植物都能用
作“藏茵陈”来治疗肝炎并有一定效果的主要依据;
该成分最高的为尼泊尔獐牙菜,其次是大籽獐牙菜、
川西獐牙菜、祁连獐牙菜。由于其他成分也被认为具
有各种药效作用,如獐牙菜苦苷具有清热、消炎等生
理作用[5~8],当药黄素对CCl。引起的转氨酶升高有
降低作用[8’9],芒果苷主要具有抗氧化[9’1⋯、抗结
核‘113和抗菌作用‘12’131。但是这些成分在比较的9种
龙胆科植物中存在显著区别,如抱茎獐牙菜中的獐
牙菜苦苷是其他“藏茵陈”种类如川西獐牙菜的近
70倍,是肋柱花的5倍;而川西獐牙菜的芒果苷是
抱茎獐牙菜的6倍以上,是尼泊尔獐牙菜的2倍以
上。这些研究结果表明今后在使用“藏茵陈”药材治
疗不同的疾病,或者利用“藏茵陈”药材中各种不同
有效化学成分开发单一成分新药时,应选择不同的
“藏茵陈”植物种类,使每种植物都能最为有效地发
挥其作用。
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青海栽培秦艽中龙胆苦苷的影响因素考察
李向阳1,李福安2,李建民3,魏全嘉2
(1.青海医学院药学教研室,青海西宁810001;2.青海医学院中医系,青海西宁810001;
3.青海师范大学生物系,青海西宁810001)
秦艽为龙胆科秦艽Gentianamacrophylla
Pall.、麻花秦艽G.stramineaMaxim.、粗茎秦艽
G.crassicaulisDut aieexBurkill或小秦艽G.
dahuricaFisch.的干燥根[1],主产于青海、甘肃、陕
西、内蒙古、东北、四川I等地,是临床上用于祛风除
湿、和血舒筋、清热利尿的常用中药材[2]。青海省是
秦艽的主产地之一,但在最近几年,由于用药需求量
猛增,过度采挖,致使秦艽野生资源临近频危状态,
现已被国家列为三级重点保护的野生药材,因此为
保证和扩大药源,大量繁殖和引种栽培已成为急需
解决的问题。本研究以秦艽的主要成分龙胆苦苷为
指标,采用RP—HPLC法考察了不同产地、不同生长
年限、不同采收季节和使用肥料等因素对栽培秦艽
中龙胆苦苷含量的影响,以期为评价栽培秦艽的质
量、开发利用秦艽资源和确保人工种植的品质提供
科学的依据。
1实验材料
高效液相色谱仪:LC一10AT泵和SPD一10A
紫外检测器(日本岛津公司),N2000型色谱工作站
(浙江大学智能信息工程研究所);FZl02微型植物
粉碎机(天津泰斯特仪器有限公司);XW一80A旋
涡混合器(2z海精科有限公司);色谱纯甲醇(山东禹
王实业有限公司),分析纯甲醇(沈阳试剂L厂);龙
胆苦苷对照品(中国药品生物制品鉴定所提供);秦
艽药材采于各栽培基地,经魏全嘉教授鉴定为麻花
秦艽G.stramineaMaxim。
2方法
2.1 RP~HPLC色谱条件:色谱柱:LichrospherC18
(250mm×4.6mm,5肚m);流动相:甲醇一水
(1:2);体积流量:1.1mL/min;检测波长254nm。
2.2对照品溶液的配制:精密称取龙胆苦苷对照品
5.4mg置于10mL量瓶中,加甲醇制成0.54mg/
mL的溶液。
2.3供试品溶液的制备及测定:取秦艽药材粉碎,
过40目筛,精密称取细粉约0.5g,加甲醇20mL,
加热回流30rain,滤过,滤液回收至干,残渣用适量
甲醇溶解,滤过,滤液移至50mL量瓶中,混匀后精
密吸取1mL于5mL量瓶中,加甲醇至刻度,涡旋
混匀即得供试品溶液。精密吸取10pL进样分析,按
外标法计算龙胆苦苷的含量。
2.4标准曲线制备:精密吸取对照品溶液1、2、4、
6、8、10pL,按上述色谱条件进样分析,记录峰面积。
以龙胆苦苷峰面积(A)对进样量(M)进行回归计
算,得回归方程:A一260358M一37681,r一
0.9994,线性范围为0.54~5.40big。
2.5精密度试验:精密吸取上述对照品溶液8弘L,
收稿日期:2004—10一16
基金项目:国家科技攻关项目(2001BAT01A60—06);青海省重大科技攻关项目(2001一N一107—03)
作者简介:李向阳(1974一),男,甘肃省会宁县人,硕士,讲师,主要从事药物分析工作。
Tel:(0971)6104046E—mail:yangl03@sina.com
万方数据
9种藏茵陈原植物中的7种有效化学成分研究
作者: 杨慧玲, 刘建全, YANG Hui-ling, LIU Jian-quan
作者单位: 杨慧玲,YANG Hui-ling(中国科学院西北高原生物研究所,青藏高原生物进化与适应开放实验
室,青海,西宁,810001;中国科学院研究生院,北京,100039), 刘建全,LIU Jian-quan(中国
科学院西北高原生物研究所,青藏高原生物进化与适应开放实验室,青海,西宁,810001)
刊名: 中草药
英文刊名: CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年,卷(期): 2005,36(8)
被引用次数: 16次
参考文献(16条)
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