全 文 ：14. 77 min,可见随着丸剂颗粒本身的减小 ,溶出速
率也不断加快。
中药的疗效与其有效成分的溶出速度密切相
关 ,而溶出速度往往与药物的粉末细度有关 ,若能改
善药物的粉末细度 ,提高中药有效成分的溶出速率 ,
会提高临床疗效。中药材经超细处理后 ,由于其粒度
细微均匀 ,比表面积增大 ,孔隙率增加 ,吸附性增强 ,
溶解性增强 ,亲和力变大 ,化学反应速率增加 ,能使
药物较好地分散、溶解在胃液里 ,且与胃粘膜的接触
面积变大 ,更易被胃肠道吸收 ,提高治疗效果。
参考文献:
[1 ]　金万勤 ,黄　芳 ,郭立玮 . 苍术、黄柏及二妙丸超细微粉的生物
药剂学的研究Ⅰ . 扫描电子显微镜技术对超细微粉的表征
[ J ].中草药 , 2001, 32( 4): 306-309.
[2 ]　中国药典 [ S] , 2000年版 .二部 .
[3 ]　杨基森 . 中药制剂设计学 [ J ] . 贵阳: 贵州科学技术出版社 ,
1992.
[4 ]　朱芳海 ,奚念朱 . 优选最佳数学模型用于固体制剂体外溶出实
验数据处理程序的设计 [ J] .药学学报 , 1994, 29( 6): 459-463.
[ 5 ]　李全忠 . 用威布尔函数求溶出度参数 [ J] . 中国医院药学杂
志 , 1991, 11( 1): 30-31.
RP-HPLC测定人血清中阿魏酸浓度的改进方法
黄敬群 ,黄　熙* ,张　莉　徐　睿* * ,任　平* *
(第四军医大学西京医院中医药研究中心 中药临床药理研究室 ,陕西 西安　 710032)
摘　要:目的　建立改良的 RP-HPLC测定人血清中阿魏浓度的分析方法。方法　 RP-HPLC法 ,采用 Kromasil-C18
柱为分析柱 ,甲醇 -水 -冰醋酸 ( 36. 4∶ 63∶ 0. 6)为流动相 ,流速 1. 0 m L /min,检测波长 322 nm,内标物为对羟基苯
甲醛。用乙腈既去除人血清中的蛋白 ,又提取血清中的阿魏酸。结果　阿魏酸在 9. 94～ 159. 04 ng /m L与峰面积呈
良好线性关系 (r= 0. 992 5) ,日内和日间 RSD均 < 10% ,平均回收率为 99. 77% ,最低检测浓度为 5 ng /m L。结论　
该法简便、快速、灵敏、重现性好 ,低毒 ,适用于人血清中阿魏酸的定量分析。
关键词: 阿魏酸 ;血清 ;高效液相色谱
中图分类号: R285. 61; R286. 02　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 09 0792 03
Improved RP-HPLC method for determination of ferulic acid concentration in human serum
HUANG Jing-qun, HU ANG Xi, ZHANG Li , XU Rui , REN Ping
( Resear eh Center of TCM , Xijing Hospital, Four th Milita ry Medica l Univ ersity, X i an 710032, China)
Abstract: Object　 To develop an improved RP-HPLC method fo r determining ferulic acid in the hu-
man serum. Methods　 The determination w as ca rried on RP-HPLC, using Kromasi l-C18 co lumn,
methano l-w ater-acetic acid ( 36. 4∶ 63∶ 0. 6) as mobile phase wi th a flow ra te of 1. 0 mL /min and at the
detection w aveleng th of 322 nm , and p -hydroxybenzaldehyde w as used as inter nal standard. The serum
sample w as deproteinized wi th acetoni t rile to ex tract ferulic acid. Results　 The calibration curv e showed
good linearity ov er the range of 9. 94-159. 04 ng /mL (r= 0. 992 5) . RSD was less than 10% within day and
day-to-day , the average recovery w as 99. 77% and the minimal concentration in serum was 5 ng /mL. Con-
clusion　 This method, w hich is simple, rapid, sensi tiv e, reproducible and low toxic, is appropriate fo r
the quantitativ e determination of ferulic acid in the human serum.
Key words: ferulic acid; serum; HPLC
　　阿魏酸是川芎等中药的有效成分之一 ,具有抗
氧化和自由基清除作用 ,及抑制血小板聚集和血栓
形成。 现已有人工合成品 ,用于抗动脉粥样硬化治
疗 [1 ]。 阿魏酸血药浓度的测定虽已有 HPLC方法报
道 [ 1～ 6] ,但尚不理想 ,如所用化学试剂毒性大 ,方法检
出限较高等。因此 ,本研究对其检测方法进行了改进。
1　仪器、试药和受试对象
1. 1　仪器: 美国 Waters高效液相色谱系统 ( 7725
手动进样器 , 600泵 , 996二级管阵列检测器 , M32数
据处理系统 ) , TGL 16G台式高速离心机。
·792· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 9期
收稿日期: 2002-01-31基金项目:国家自然科学基金资助项目 ( No. 30070912) ;高等学校骨干教师资助计划作者简介:黄敬群 ( 1970-) ,男 ,黑龙江哈尔滨人 ,住院医师 , 1994年毕业于河北中医学院 ,现为第四军医大学中西医结合专业 2000级硕士研究生 ,研究方向为证与方剂的药物动力学。 Tel: 029-2554090　 E-mai l: t cmw sh@ fmmu. ed u. cn
* 通讯作者　 Tel: 029-3224474
* * 本院老年病科
1. 2　药物与试剂:阿魏酸对照品 (中国药品生物制
品检定所提供 ,批号: 773-9203) ,对羟基苯甲醛内标
物由西安市化学试剂厂出品 (化学纯 ) ,乙腈、甲醇、
冰醋酸等有机试剂均为分析纯 ,水为自制双蒸水 ,健
康人空白混合血清由本院血库提供。 川芎、红花、降
香、赤芍、丹参药材从陕西省药材公司统一购买 ,组
成冠心Ⅱ号方剂。
1. 3　受试对象: 健康自愿者 6名 (来自陕西省合阳
县 ) , 3男 3女 ,年龄 20～ 58岁 ,平均年龄 34. 8± 15. 4
岁 ,体重 50～ 67. 5 kg ,平均体重 ( 57. 9± 5. 5) kg。受
试者受试前经常规化验和查体均正常 ,无心、肝、肾和
胃肠道等疾患。服药前 14 h未饮含酒精饮料 ,未吸烟 ,
受试期间少量饮水。 试验方案经西京医院医学伦理委
员会批准通过 ,试验前均签署知情同意书。
2　方法和结果
2. 1　色谱条件: 色谱柱:中国科学院大连化学物理
研究所 KF系列 HPLC柱 , Kromasil C18柱 ( 250
mm× 4. 6 mm , 5μm);流动相: 甲醇 -水 -冰醋酸
( 36. 4∶ 63∶ 0. 6) ;检测波长: 322 nm ,流速: 1. 0
m L /min;柱温: 室温。
在上述色谱条件下 ,血样中阿魏酸和内标物分
离完全 ,空白血清无干扰 ,通过二维、三维色谱图对
其吸收峰定性 ,其保留时间均与对照品一致 (图 1)。
a-阿魏酸　 b-对羟基苯甲醛
A-空白血清　 B-加入对照品的血清　 C-口服后的血清样品
图 1　HPLC图谱
2. 2　对照品溶液的制备: 精密称取阿魏酸对照品
0. 994 mg ,置于 100 mL容量瓶中 ,甲醇溶解并定容
至刻度 ,摇匀 ,即得对照品贮备液。同法配制对羟基
苯甲醛 ,浓度为 23. 94μg /mL。临用前 ,取阿魏酸贮
备液适量 ,用甲醇按倍数稀释法稀释至所需浓度 ,即
得阿魏酸标准工作液。
2. 3　口服冠心Ⅱ号汤剂的制备:采用临床煎煮方法。
川芎、红花、降香、赤芍、丹参药材按 1∶ 1∶ 1∶ 1∶ 2
的质量比配制成冠心Ⅱ号成方 ,总量为 1 500 g。 充
分混匀后放入不锈钢锅内 ,加水 3 000 mL浸泡 30
min,煮沸 30 min,过滤药渣再加水 1 500 mL,煮沸
30 min,过滤 ,滤液合并。多次重复上述步骤 ,将所得
全部滤液混在一起 ,加热浓缩得每毫升药液内含有
川芎、红花、降香、赤芍各 0. 5 g,丹参 1. 0 g。 - 4℃
冰箱冷藏待用。
2. 4　样品制备:受试者空腹 14 h后 ,按 3 g /kg剂
量 (其中川芎为 0. 5 g /kg )服用冠心Ⅱ号汤剂 ,分别
于服药前及服药后 5, 10, 15, 30, 60, 90, 120 min从
肘静脉取血 3 mL,离心血清 ,置 - 20℃冰箱保存
待测。
2. 5　血样预处理: 用微量加样器吸取 1. 0 m L血
清 ,置于 5 mL塑料高速离心管中 ,准确加入对羟基
苯甲醛内标液 10μL,电动混匀器充分混匀 45 s,然
后加入乙腈 3. 5 mL后再次混匀 5 min, 10 000
r /min离心 10 min,取上清液置 5 m L一次性塑料试
管中 ,在 57℃水浴上通氮气流挥干后用 100μL流
动相复溶 ,再次 10 000 r /min离心 10 min,取上清
液 50μL进样。
2. 6　标准曲线制备: 取空白血清 1. 0 mL于 5 mL
塑料高速离心管中并编号 ,加入不同体积的阿魏酸
对照品溶液 ,其中阿魏酸浓度分别为 9. 94, 19. 88,
39. 76, 49. 70, 79. 52, 159. 04 ng /mL,每管加入对羟
基苯甲醛内标液 10μL,充分混匀后按 2. 5项下方
法处理 ,测定 ,以阿魏酸和内标物的峰面积比与其浓
度作线性回归 ,得到此色谱条件下阿魏酸的回归方
程为: Y= 0. 001 02+ 0. 012 47X , r= 0. 992 5,阿魏
酸在 9. 94～ 159. 04 ng /mL线性关系良好。以信噪
比为 3时计算 ,阿魏酸的最低检测限为 0. 596 ng ,血
清中阿魏酸的最低检测浓度为 5 ng /mL。
2. 7　回收率及精密度: 取线性范围内不同浓度 ,分
别测定其回收率和日内及日间精密度 ,平均回收率
为 99. 77% , RSD= 1. 23% (n= 5) ,平均日内精密度
RSD为 2. 44% ,平均日间精密度 RSD为 3. 80% 。
回收率和精密度均较好。
2. 8　样品血药浓度测定:取已制备的血清样品在室
温下融化后 ,按 2. 5项下方法处理后 ,测定 ,由标准
曲线计算出阿魏酸的血药浓度。结果见表 1。
表 1　健康人口服冠心Ⅱ号后血清中各时点的阿魏酸浓度 ( n= 6)
时　间 (min) 5 10 15 30 60 90 120
阿魏酸浓度 ( ng /m L) 7. 66± 1. 80 16. 55± 4. 85 23. 01± 7. 69 27. 49± 6. 37 23. 03± 10. 89 11. 38± 2. 27 6. 525± 0. 95
·793·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 9期
3　讨论
3. 1　本方法的主要优点是通过对前处理方法的改
进 ,克服了以前方法中化学试剂毒性大 ,方法检出限
较高等缺点。文献 [5 ]用乙腈 -磷酸缓冲液做流动相 ,
我们观察到磷酸盐在实验结束后需用大量水冲洗 ,
如果冲洗不干净 ,容易有晶体析出 ,对色谱系统产生
不利影响。 用甲醇 -水 -冰醋酸做流动相 ,组成简单 ,
容易调配 ,一般对色谱系统无明显不良影响。另外乙
腈的毒性较大 ,而甲醇-水 -冰醋酸毒性低 ,用甲醇 -
水 -冰醋酸做流动相可以在具体的操作过程中减轻
对实验者的身体危害。
3. 2　复方效应成分药动学假说 ( PK) [7～ 11 ]认为复方
进入体内成分能定性定量。 本室曾应用建立的血样
预处理方法—— 水浴法 [ 10]成功地测定了健康人口
服川芎汤后经时变化的血清中阿魏酸浓度 ,并直接
测定了健康人口服冠心Ⅱ号 (五味药分煎 )后经沸水
浴处理过的血清样品中的阿魏酸 [10 ]。本实验结果一
方面进一步证明了“复方进入体内成分能定性定量”
的科学性:其体内成分不但可以测 ,而且还可以根据
具体的实际情况 (经费、检测限要求等 )而采用不同
方法测定 ;另一方面由于本实验中测定健康人口服
冠心Ⅱ号 (五味药合煎 )后体内阿魏酸的浓度变化的
条件和实际的临床应用冠心Ⅱ号方时体内阿魏酸的
浓度变化条件几乎完全一致 ,所以此次成功地测定
人口服冠心Ⅱ号合煎液后体内阿魏酸的浓度更为直
接和有意义 ,为进一步研究冠心Ⅱ号方剂体内成分
谱及治疗中的药物监测 [11 ]提供了依据。
3. 3　作为新方法 ,本实验仅为初步实践。本法预处
理复方血清成分 ,广泛应用性如何?不同动物血清中
复方来源的阿魏酸 ,用本法提取的规律性如何?同水
浴法相比 ,对色谱柱的污染如何? 需要进一步研究。
参考文献:
[1 ]　常明向 ,徐莲英 ,陶建生 . 阿魏酸钠大鼠体内药物动力学研究
[ J] . 西北药学杂志 , 1995, 10( 2): 81-83.
[ 2 ]　扬　敏 ,林曙光 ,吴　桐 . 阿魏酸钠药代动力学研究 [ J] . 中
药药理与临床 , 1988, 4( 4): 28.
[3 ]　 Fujiw ara S, Noumi K, Sugimoto I, et al . Mass f ragm ento-
graphic d etermination of ferulic acid in plasma af ter oral ad-
minis t ration of gamma-oryzanol [ J ] . Chem pharm Bul l,
1982, 3: 973.
[ 4 ]　 Fu jiwara S. Hamada T, Sugimoto I, et al . High-performance
liquid chromatographic d etermination of ferulic acid in plasma
[ J ]. Ch em pharm Bull , 1983, 31: 1079-1081.
[5 ]　 Wen A D, Huang X, Jiang Y P, et al . High-perfo rmance liq-
uid ch romatog raphic determination of f ree ferulic acid in
s erum of rabbi ts wi th blood s tasis [ J ] . Acta Pharm Sin,
1995, 30( 10): 762-767.
[ 6]　黄　熙 ,任　平 ,张　莉 ,等 . HPLC直接测定血清阿魏酸 -方
剂血样预处理新方法 (Ⅰ ) [ J] . 中草药 , 1999, 30 ( 3): 175-
179.
[7 ]　黄　熙 ,陈可冀 ,任　平 .“复方效应成分动力学”新假说的科
学证据、要素、意义及前景 [ J] . 中国中药杂志 , 1997, 22 ( 4):
250-252.
[ 8]　 Huang X, jiang Y P, Wen A D, et al . Is i t possible to s tudy
the pharmacokinetics of chemical component of decoction?
[ J ]. C JIM , 1995, 1( 4): 297.
[ 9]　黄　熙 ,蒋永培 ,臧益民 ,等 .方剂化学成分药代动力学的研
究进展 [ J ]. 中草药 , 1995, 26( 10): 546-549.
[ 10]　黄　熙 ,陈可冀 ,任　平 ,等 .高效液相色谱直接测定沸水浴
处理人血清中冠心Ⅰ 号来源的阿魏酸 [ J ] . 中国中西医结合
杂志 , 1999, 19( 2): 71-73.
[ 11]　任　平 ,黄　熙 . 治法药理学突破口:研究方剂体内成分谱、
靶成分及其治疗药物监测 [ J] . 成都中医药大学学报 , 2000,
23( 2): 4-6.
大孔树脂对栀子苷分离效果的研究
吕茂平 ,乔庆彬 ,庞春燕 ,王 琦
(北京中医药大学 ,北京　 100029)
摘　要: 目的　优选分离栀子苷的大孔树脂。方法　将栀子粗提液置大孔树脂中吸附 ,并以水、 70%乙醇分别洗脱 ,
以 HPLC法测定洗脱液中栀子苷含量。结果　 D301R、 D396、 D296和 AB-8四种型号大孔树脂效果差异较大。结论
　 D301R型大孔树脂用作栀子苷的分离效果较好。
关键词: 栀子苷 ;大孔树脂 ;分离 ;高效液相色谱
中图分类号: R284. 2; R286. 02　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 09 0794 03
Effect of macroporous resin in separation of gardenoside
LU
¨
Mao-ping , QIAO Qing-bin, PAN G Chun-yan, W ANG Yue-qi
( Beijing Univ er sity o f TCM , Beijing 100029, China)
·794· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 9期
收稿日期: 2001-12-28基金项目:国家中医药管理局中医药科学技术研究基金资助项目 (国中医药科 00-01KZ01号 )作者简介:吕茂平 ( 1976-) ,男 ,江西广丰人 , 1998年毕业于江西中医学院 ,现在北京中医药大学攻读硕士学位 ,研究方向为中药成分及制剂技术的研究。 Tel: ( 010) 64286851　 E-mail: Lv mp@ sina. com