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槲皮素抑制纤维蛋白纤维蛋白原降解产物诱导
小鼠腹腔巨噬细胞释放白细胞介素-1
周　斌 1 ,张俊平 1 ,刘　宏 2 ,钱定华 1
( 1. 第二军医大学药学院 药理教研室 ,上海　 200433; 2. 第二军医大学长海医院 ,上海　 200433)
摘　要: 目的　研究槲皮素对纤维蛋白纤维蛋白原降解产物 ( FFDP)诱导的小鼠腹腔巨噬细胞释放白细胞介素 -1
( IL-1)的作用及其机制。方法　采用小鼠胸腺细胞增殖法测定 IL-1。结果　 FFDP ( 0. 2～ 1 g / L)能促使小鼠腹腔
巨噬细胞分泌 IL-1,槲皮素 ( 5～ 20μmol /L)可抑制 FFDP的作用 ,其作用可能与蛋白激酶 C有关。结论　槲皮素
对 FFDP诱导的小鼠腹腔巨噬细胞释放 IL-1有抑制作用 ,对心脑血管疾病的防治具有一定意义。
关键词: 槲皮素 ;纤维蛋白纤维蛋白原降解产物 ( FFDP);白细胞介素 -1;腹腔巨噬细胞
中图分类号: R286. 26　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 03 0247 03
Effects of quercetin on release of interleukin-1 from peritoneal macrophages
of mice induced by fibrin fibrinogen degradation products
ZHOU Bin
1
, ZHANG Jun-ping
1
, L IU Hong
2
, QIAN Ding-hua
1
( 1. Depar tment o f Pha rmacolog y , Colleg e o f Pharmacy , Second M ilita ry Medica l Univ er sity , Shanghai 200433,
China; 2. Changhai Hospita l, Second M ilitar y Medical Univ e rsity , Shanghai 200433, China)
Key words: quercetin; fibrin fibrinogen deg radation products ( FFDP) ; interleukin-1; peri toneal
macrophage
　　心脑血管疾病是威胁人类健康的重大疾病。近
年来研究表明 ,高水平血浆纤维蛋白原是一重要的、
独立的心脑血管疾病危险因素。 动脉粥样硬化斑块
中有大量纤维蛋白原降解相关抗原 ,且其存在形态
与斑块发展程度相关。 纤维蛋白纤维蛋白原降解产
物 ( fibrin fibrinogen deg radation products, FFDP)
在斑块中的出现甚至早于氧化低密度脂蛋白 [ 1, 2]。白
细胞介素 -1 ( IL-1) 通过其自身及其诱生的其他因
子的作用 ,在心脑血管疾病发生中发挥着重要的作
用 [3, 4 ]。槲皮素 ( quercetin, Qer )是提取的植物黄
酮 ,具有抗氧化、抗肿瘤、抗血小板聚集等多方面的
作用 [5, 6 ]。前期研究发现其对多种炎症因子的产生也
有抑制作用。本研究旨在观察槲皮素对 FFDP诱导
IL-1产生的作用。
1　材料与方法
1. 1　试剂与动物: 槲皮素 (纯度 > 98% , HPLC
法 ) ,纤维蛋白 ,纤溶酶 ,抑肽酶 , PM A: 美国 Sigma
公司产品。ICR小鼠 ,由第二军医大学实验动物中心
提供。
1. 2　 FFDP的制备 [7 ]: 在含 1 mmol /L CaCl2条件
下 ,用纤溶酶消化纤维蛋白 ,每克蛋白用 10单位纤溶
酶 , 6 h后用抑肽酶 ( 200 kU /cu纤溶酶 )终止反应。
1. 3　小鼠腹腔巨噬细胞的制备 [8 ]: ICR小鼠 ip 3%
硫代乙醇酸钠培养液 1. 5 mL, 4 d后颈椎脱臼处
死 ,用磷酸缓冲液充分洗出腹腔细胞 ,经离心 ,破红
细胞 ,洗涤后 ,种入培养板 , 37℃ , 5% CO2孵育 2 h,
·247·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 3期 2003年 3月
收稿日期: 2002-10-18基金项目:国家自然科学基金资助项目 ( 39370798和 30200344)作者简介:周　斌 ( 1969— ) ,男 ,博士 ,讲师。 研究方向:老年性疾病发病机制及药物防治研究。
Tel: ( 021) 25074470　 E-mail: zhou bin@ smmu. ed u. cn
贴壁细胞即是。
1. 4　 IL-1的测定 [9 ]: 取制备的腹腔巨噬细胞加入
含 FFDP的无血清培养基孵育 ,收集上清液 ,观察
药物作用时 ,将药物与 FFDP同时加入共同孵育。
采用本室建立的 ConA诱导的 ICR小鼠胸腺细胞
增殖法测定上清液中 IL-1的活性。
1. 5　统计学处理:数据用 x± s表示 ,显著性检验采
用方差分析。
2　结果
2. 1　 FFDP对小鼠腹腔巨噬细胞释放 IL-1的作
用: FFDP与小鼠腹腔巨噬细胞共同孵育 ,能诱导小
鼠腹腔巨噬细胞释放 IL-1。 IL-1释放量随 FFDP刺
激时间的延长而增加 , FFDP 0. 5 g /L作用 24 h时
与对照组相比 , IL-1略有增加 [ ( 9. 4± 2. 1) vs ( 6. 8±
1. 8) kU /L,n= 4, P> 0. 05] , 48 h时则有明显增加
[ ( 81. 4± 9. 1) vs ( 19. 6± 3. 1) k U /L, n= 4, P <
0. 01 ]。 作用 48 h后 , IL-1释放量亦随 FFDP剂量
的增加而增加 ,见图 1。
与空白对照组相比: * * P < 0. 01
* * P < 0. 01 vs cont rol g roup
图 1　 FFDP对小鼠腹腔巨噬细胞产生
IL-1的作用 (x± s, n= 4)
Fig. 1　 Effect of FFDP on IL-1 release from peritoneal
macrophages of mice (x± s, n= 4)
2. 2　槲皮素对 FFDP诱导小鼠腹腔巨噬细胞释放
IL-1的作用:在 FFDP ( 0. 5 mg /mL) 与巨噬细胞
孵育的同时加入槲皮素 , 48 h后测定上清液中 IL-1
活性 ,槲皮素 5. 0～ 20μmol /L对 FFDP有抑制作
用 ,见图 2。
2. 3　蛋白激酶 C激活剂 ( PM A)对 FFDP诱导小
鼠腹腔巨噬细胞释放 IL-1的作用: PMA ( 5 mg /L)
与巨噬细胞共同孵育 48 h,再加入 FFDP ( 0. 5 g /L )
孵育 48 h,测定上清液中 IL-1的含量 ,与对照组相
比 IL-1含量有显著降低 [ ( 49. 4± 6. 1) vs ( 81. 4±
9. 1) kU /L, n= 4, P < 0. 01 ]。
3　讨论
与空白对照组相比: * P < 0. 05
* P < 0. 05 vs cont rol g roup
图 2　槲皮素对 FFDP ( 0. 5 g /L)刺激小鼠腹腔
巨噬细胞释放 IL-1的作用 (x± s , n= 4)
Fig. 2　 Ef fect of quercetin on FFDP ( 0. 5 g /L)
induced IL-1 release from peritoneal
macrophages of mice (x± s, n= 4)
　　心脑血管疾病的发生是多原因、多层次的 ,是各
种因素和细胞成分相互作用的结果。炎症机制在心
脑血管疾病的发生中亦发挥重要作用。 IL-1是细胞
因子网络的中心环节 ,具有多方面的作用 ,通过诱导
细胞分化、组织重建、诱导其他因子的产生甚至诱导
细胞死亡等途径参与心脑血管疾病的发生。 FFDP
促进腹腔巨噬细胞释放 IL-1,从一个侧面证明 ,
FFDP能通过该途径参与心脑血管疾病的发生。
文献报道槲皮素在预防和治疗心血管疾病方面
具有应用价值。 本研究表明槲皮素亦能抑制 FFDP
诱导的腹腔巨噬细胞释放 IL-1,提示槲皮素在心脑
血管疾病的防治中有一定的意义。 纤维蛋白原有多
种生理作用 ,如与血小板膜糖蛋白结合而介导的血
小板聚集反应等 ,都与蛋白激酶 C的激活有关。 槲
皮素对蛋白激酶 C、酪氨酸蛋白激酶和钙内流等都
有抑制作用。实验中用蛋白激酶 C激活剂 PM A与
巨噬细胞预孵 48 h ,耗竭细胞蛋白激酶 C活性 ,再
用 FFDP刺激 ,则 IL-1释放有明显降低。提示抑制
蛋白激酶 C可能是槲皮素抑制 FFDP诱导小鼠腹
腔巨噬细胞释放 IL-1的作用环节。
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蜜环菌激发子诱导猪苓细胞活性氧产生的信号途径
夏洪燕 ,郭顺星
(中国医学科学院 中国协和医科大学 药用植物研究所 ,北京　 100094)
摘　要: 目的　阐明蜜环菌激发子诱导猪苓细胞活性氧的产生机制。 方法　用 Luminol化学发光法测定活性氧产
生量。结果　在猪苓细胞活性氧产生过程中 ,含乙二醇双 (β -氨乙基 )四乙酸 ( EGTA)的缺钙培养基能抑制其活性
氧产生 ,而加入钙 ,则可起促进作用。钙离子载体 A23187单独可诱导含钙介质活性氧的产生 ,说明活性氧的产生有
钙离子的参与。 蛋白丝酶抑制剂苯甲烷碘酰氟 ( PM SF) 可以抑制活性氧形成。磷酯酶 C ( PLC)的抑制剂硫酸新
霉素及磷酸肌醇磷酸酶的抑制剂氯化锂均可促进活性氧的产生。结论　猪苓细胞活性氧的产生与 Ca2+ 、蛋白磷酸
化有关。
关键词: 猪苓 ;活性氧 ;激发子 ;钙离子
中图分类号: R285. 5　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 03 0249 03
Signal transduction pathway of active oxygen species inPolyporus
umbellatus induced by elicitor from Armillaria mellea
X IA Hong-yan, GUO Shun-x ing
( Institute of Medicina l Plant Development, CAM S& PUM C, Beijing 100094, China )
Key words: Polyporus umbel lata ( Pers. ) Fr. ; activ e oxygen species ( AOS) ; elicitor; Ca
2+
　　活性氧 ( H2O2 , O÷2 ,· OH) 是生物在有氧条件
下产生的毒性氧化剂 [1 ]。动物吞噬细胞如多形核白
细胞能产生活性氧 ( O÷2及 H2O2 ) [2 ] ,且其产生的活
性氧在抵御病原菌侵染过程中起重要的作用。
Schw ack等 [3 ]认为不同生物之间在建立共生关系初
期也会引起防卫反应 ,但这种防卫反应能够被精确
地控制 ,以允许两种生物建立有效的共生体系。用来
源于外生菌根真菌 Amanita muscaria和 Hebeloma
crustuliniforme的激发子处理云杉细胞 ,发现同来
源于病原真菌 Heterobasidion annosum 激发子处理
一样 ,均可诱导活性氧的产生。关于活性氧产生的信
号机制认为有 Ca2+及蛋白磷酸化的参与。但关于两
种真菌共生初期是否伴随着活性氧的产生及其产生
的机制和意义尚未见报道。猪苓、密环菌属特殊的菌
与菌共生关系 ,对两者共生机制的研究仅限于解剖
学 ,作者曾报道来源于蜜环菌的激发子可以诱导猪
苓活性氧产生 [ 4] ,本实验旨在探讨其活性氧产生的机
制 ,从而为阐明猪苓与蜜环菌的共生机制奠定基础。
1　材料与方法
1. 1　菌株来源:猪苓 Polyporus umbel latus ( Pers. )
Fries菌株由本所真菌室提供。
1. 2　蜜环菌激发子:参考文献方法制备 [4 ]。
1. 3　猪苓菌丝细胞活性氧释放量的测定
1. 3. 1　将培养 3周的猪苓菌丝细胞用试验介质洗
涤 3遍 , 试验介质组成: 2% 蔗糖 , 1 mmol /L
NaH2 PO4 , 1 mmo l /L ( N H4 ) 2 SO4 , 1 mmol /L
Mg SO4 , 1 mmol /L CaCl2 , 25 mmol /L KNO3 ,
5 mmo l /L 2-[N-吗啡 ]乙磺酸 ,用 NaOH调 pH至
·249·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 3期 2003年 3月
收稿日期: 2002-06-11作者简介:夏洪燕 ( 1973— ) , 2001年毕业于中国医学科学院中国协和医科大学药用植物研究所 ,获理学博士学位。主要从事药用真菌生物技术研究工作。
* 通讯作者　 Tel: ( 010) 62899729　 E-mai l: sxguo@ ho tmail. com