全 文 ：RP-HPLC法测定开胸理气冲剂中大黄素和大黄酚的含量
陶　涛 ,邢贞建
(广州市胸科医院 ,广东 广州　 510095)
　　开胸理气冲剂由大黄、槟榔、枳实、山楂、木香、
乌药、厚朴、莱菔子、青皮、甘草 10味中药组成 ,具有
消积导滞、开胸顺气的作用。大黄为方中君药 ,大黄
素、大黄酚为有效成分。本实验采用 RP-HPLC法同
时测定大黄素、大黄酚的含量 ,为产品的定量提供手
段 [1 ]。
1　仪器与试药
Waters 600E泵 , Rheodyne 77251进样器 , Wa-
ters PAD996,二极管阵列检测器 , Waters M22色谱
工作站 , Shimadzu Libro r AEL40SM万分之一天平
(日本岛津 ) ; KQ— 50B超声波清洗机 (昆山市超声
设备有限公司 )。 乙腈、甲醇 (色谱纯 )、水 (重蒸水 ) ,
大黄素 (批号: 0756-9908)、大黄酚 (批号: 0796-
9302)对照品由中国药品生物制品检定所提供 ,开胸
理气冲剂及缺大黄的阴性样品由白云山制药厂提供。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件: 色谱柱: Diamonsil C18柱 ( 150
mm× 4. 6 mm, 5μm);流动相: 乙腈 -0. 1%磷酸溶液
( 70∶ 30) ;检测波长: 287 nm;体积流量: 1. 0 mL /
min;柱温: 35℃ ;进样量 20μL。理论塔板数按大黄
素、大黄酚峰计算均不低于 1 500。
2. 2　供试品溶液的制备: 取本品约 0. 6 g ,精密称
定 ,置 50 mL圆底烧瓶中 ,加 2. 5 mol /L硫酸溶液
20 mL,超声处理 5 min,再加氯仿 15 mL,加热回流
1 h,放冷 ,移至分液漏斗中 ,用少量氯仿洗涤容器 ,
并入分液漏斗中。 分取氯仿层 ,酸液用氯仿提取 2
次 ,每次约 15 mL,合并氯仿液 ,以无水硫酸钠脱水 ,
氯仿液移至 100 mL锥形瓶中 ,挥去氯仿。残渣精密
加甲醇 25 mL,称定质量 ,置水浴中微热使溶解 ,放
冷后 ,再称定质量 ,用甲醇补足减失的质量 ,摇匀 ,微
孔滤膜 ( 0. 45μm)滤过 ,取续滤液 ,即得。 同法制得
缺大黄的阴性对照溶液。
2. 3　对照品溶液的制备: 精密称取大黄素对照品
6. 25 mg、大黄酚对照品 4. 75 mg ,分别置 50 mL量
瓶中 ,用甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀。 分别精密量
取大黄素溶液 1 mL、大黄酚溶液 2 mL,置同一 25
mL量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,摇匀 ,即得。
2. 4　空白试验:取对照品溶液、阴性对照溶液和供
试品溶液进样 ,结果阴性对照在与大黄素、大黄酚相
同保留时间处未显色谱峰 ,故认为无干扰 ,见图 1。
1-大黄素　 2-大黄酚
1-emodin　 2-chrys oph anol
图 1　混合对照品 ( A)、开胸理气冲剂 (B)和缺大黄的阴性对照 (C)的 HPLC图谱
Fig. 1　HPLC of mixed reference substance ( A) , Kaixiong Liqi Granules (B) , and negative sample (C)
2. 5　线性关系考察: 精密吸取对照品溶液 10、 15、
20、 30、 35、 50μL进样 ,测定。以峰面积为纵坐标 ,进
样量为横坐标 ,绘制标准曲线 ,计算得回归方程 ,大
黄素为 Y= 5 751 X - 18 064, r= 0. 999 9,线性范
围: 50～ 250 ng;大黄酚为 Y= 2 903 X- 16 067, r=
0. 999 9,线性范围: 76～ 380 ng。
·767·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 35卷第 7期 2004年 7月
收稿日期: 2003-10-13
2. 6　精密度试验: 精密吸取对照品溶液 20μL,重
复进样 5次 ,测得大黄素峰面积 RSD为 0. 97% ;大
黄酚峰面积 RSD为 0. 80% 。
2. 7　重现性试验:取同一批 (批号: 20030728)样品
5份 ,制备供试品溶液 ,精密吸取 20μL,测定 ,测得
大黄素质量分数为 0. 149 mg /g , RSD为 2. 25%
(n= 5) ;大黄酚质量分数为 0. 478 mg /g , RSD为
2. 33% (n= 5)。
2. 8　稳定性试验: 取同一供试品溶液 ,精密吸取 20
μL,分别于 0、 5、 13、 24、 28 h测定大黄素、大黄酚的
峰面积 ,计算得 RSD分别为 0. 78% 、 0. 29% 。说明
供试品溶液在 28 h内基本稳定。
2. 9　回收率试验:采用加样回收法。取本品 5份 (批
号: 20030728,含大黄素 0. 149 mg /g、大黄酚 0. 478
mg /g ) ,每份约 0. 4 g精密称定 ,分别精密加入大黄
素、大黄酚对照品溶液 (含大黄素 0. 076 mg /mL、大
黄酚 0. 167 mg /mL) 1 mL,按供试品溶液制备方法
制备 ,测定 ,计算回收率 ,结果大黄素回收率为
100. 2% , RSD为 1. 1% ;大黄酚回收率为 99. 4% ,
RSD为 0. 8% 。
2. 10　样品测定: 对 3批样品进行测定 ,结果见表
1。 本品以大黄素和大黄酚的总量计 ,不得少于 0. 5
mg /g。
表 1　开胸理气冲剂中大黄素和大黄酚
的含量测定结果 ( n= 3)
Table 1　 Contents of emodin and chrysophanol
in Kaixiong Liqi Granules (n= 3)
批号 大黄素
/ ( mg· g- 1)
大黄酚
/ ( mg· g- 1)
大黄素+ 大黄酚
/ ( mg· g- 1)
20030728 0. 149 0. 478 0. 627
20030809 0. 180 0. 469 0. 649
20030816 0. 163 0. 495 0. 658
3　讨论
　　《中华人民共和国药典》 2000版一部“大黄”项
下对大黄素、大黄酚的 HPLC定量所用检测波长为
254 nm,本实验使用检测时 ,结果干扰很大。 经摸
索 ,用乙腈 -0. 1%磷酸溶液 ( 70∶ 30)做流动相 ,检测
波长改为大黄素、大黄酚均有吸收峰的 287 nm ,避
开杂质干扰 ,大黄素、大黄酚分离效果好。
　　在样品处理时 ,若先用甲醇提取 ,再用氯仿回流
提取 ,杂质太多 ,干扰测定结果 ,后直接用氯仿回流
提取 ,再用 2. 5 mol /L硫酸溶液超声震荡提取 5
min,测量结果回收率高、重现性好 ,干扰小。
Reference:
[1 ]　 Chang J M , Gao H, Zhang X, et al . Determination of emodin
and ch rys oph nol in Rheum rhizastachyum Sch renk by HPLC
[ J ]. West China J Pharm Sci (华西药学杂志 ) , 2003, 18( 1):
57-58.
RP-HPLC测定小儿感冒退热糖浆中连翘苷的含量
黄诺嘉 ,杨文红 ,郑剑红
(汕头市药品检验所 ,广东 汕头　 515041)
　　小儿感冒退热糖浆是由连翘、大青叶、紫苏叶、
桑枝等 7味中药制成的中药制剂 ,具有清热解毒、疏
风解表之功效 ,临床上用于治疗伤风感冒 ,畏冷发
热 ,咽喉肿痛 ,头疼咳嗽。原有的《广东省药品标准》
仅规定了 3个理化反应作为定性鉴别来控制质量 ,
尚未有定量指标。连翘是该制剂的主药 ,连翘中的有
效成分连翘苷具有较强的抗菌、抗炎作用。本实验以
连翘苷为该制剂的质量控制指标 ,建立了 RP-
HPLC法测定小儿感冒退热糖浆中连翘苷含量的方
法。该法简单、结果准确 ,重现性好 ,可用于该药的质
量控制。
1　仪器与试药
TSP— 2000A高效液相色谱仪 (美国 TSP) ,
UV— 6000检测器 , P— 2000泵 , PC— 1000色谱工
作站。连翘苷对照品由中国药品生物制品检定所提
供 ,批号: 0821-9602,供含量测定用。 小儿感冒退热
糖浆、缺连翘阴性对照均由汕头市时代制药厂提供。
乙腈为色谱纯 ,水为重蒸馏水 ,其他试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件: 色谱柱: ODS柱 ( 150 mm× 4. 6
mm , 5μm,大连依利特科学仪器有限公司 ) ;流动
相: 乙腈 -水 ( 22∶ 78) ;体积流量: 1 mL /min;柱温:
·768· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 35卷第 7期 2004年 7月
收稿日期: 2003-11-22作者简介:黄诺嘉 ( 1956— ) ,广东汕头人 ,副主任药师 ,主要从事药物分析和质量标准研究工作 ,发表论文 50余篇。 Tel: ( 0754) 8392240