全 文 ：必要在质量标准中增加对连翘苷含量的控制。
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HPLC法测定升血灵片中大黄素的含量
王曙东 ,费建红 ,腾英博 ,谢虞 ,陈安兰
(南京军区南京总医院 ,江苏 南京 210002)
升血灵片是我院制剂科与血液科共同研制的用
于升血小板的中药制剂。本方由牛西西、黄芪、黄精、
生地、熟地、肿节风等 10味中药组成 ,具有益气生
血、补肾摄血 ,用于血小板减少及其引起的紫癜、皮
肤、黏膜、牙龈出血等症。方中牛西西具有活血止血
之功效 ,主治血小板减少症、内出血、跌打损伤等症。
临床有较好的疗效。大黄素为牛西西中活性成分。为
更好地控制药品质量 ,本实验采用 HPLC法对大黄
素进行了含量测定。
1 仪器与试剂
1525— 2996高效液相色谱分析仪 (美国 Waters
公司 ) ,大黄素 (中国药品生物生物品检定所 ,批号:
0756-200110) ,所用试剂除甲醇为色谱纯外均为分
析纯 ,升血灵片 (本院制剂科提供 ,批号: 001212、
010702、 020309)。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件: 色谱柱 Lich ro spher C18 ( 150 mm×
4. 6 mm , 5μm);流动相:甲醇-0. 1%磷酸溶液 ( 85∶
15) ;检测波长: 439 nm;体积流量: 1. 0 mL /min;进
样量: 10μL。
2. 2 对照品溶液的制备:精密称取大黄素对照品适
量 ,加甲醇溶解并稀释成 0. 5 mg /mL溶液 ,备用。
2. 3 供试品溶液的制备:取供试品 20片 ,去糖衣 ,
烘干 ,研细 ,精密称取约 4 g ,加乙醇 100 mL,加热回
流 1 h ,放冷 ,滤过 ,滤液蒸干 ,残渣加水 40 mL,氯仿
40 m L,盐酸 ( 1∶ 1) 6 m L,加热回流 1 h,冷却 ,分取
氯仿液 ,水溶液再用氯仿萃取 3次 ( 20、 15、 15 mL) ,
合并氯仿液 ,蒸干 ,残渣加甲醇至 1 m L,摇匀 ,备用。
2. 4 阴性对照溶液的制备: 按处方称取除牛西西以外
的药材相应量。 加水煎煮 2次 ,每次 100 mL,煎煮 1
h,合并煎煮液 ,浓缩至 30 mL,加乙醇至 100 mL,放
置过夜 ,滤过 ,滤液挥至约 4 mL,余同供试品溶液的制
备项下“加水 40 mL,氯仿 40 mL……”操作 ,即得。
2. 5 干扰试验:取供试品溶液、大黄素对照品溶液
和缺牛西西的阴性对照溶液各 10μL分别进样 ,记
录见图 1。可见 ,升血灵片中其他成分对大黄素的含
量测定无干扰。
* -大黄素
* -emodin
图 1 大黄素对照品 ( A)、升血灵片 (B)和缺
牛西西阴性对照 ( C)的 HPLC图谱
Fig. 1 HPLC of emodin (A) , Shengxueling
Tablet (B) , and negative sample (C)
2. 6 线性关系考察:精密量取大黄素对照品溶液适
量 ,加甲醇制成 0. 5、 0. 4、 0. 2、 0. 1、 0. 05 mg /mL的
系列溶液 ,在选定的色谱条件下 ,取 10μL进样 ,记
录。 以峰面积 ( A )对质量浓度 (C )进行线性回归 ,得
线性方程: A = 2. 43× 107 + 6. 06× 104 C , r =
0. 999 7。可见大黄素在 0. 5～ 0. 05 mg /mL与峰面
积线性关系良好。
2. 7 稳定性试验: 取供试品溶液 ,室温下连续 3 d
测定峰面积 ,结果大黄素峰面积 RSD为 1. 24%
(n= 3)。
2. 8 精密度试验:取同一供试品液进行 6次进样 ,
测定峰面积 ,结果大黄素峰面积 RSD为 0. 87%
(n= 6)。
2. 9 回收率试验: 精密称取已知大黄素含量 (含大
黄素约 0. 09 mg /g )的样品 2 g,分别加 0. 108 mg /
mL大黄素对照品溶液 1. 4、 1. 6、 1. 8、 2 mL,按供试
·770· 中草药 Chinese T raditional and Herbal Drug s 第 35卷第 7期 2004年 7月
收稿日期: 2003-11-13
品溶液制备项下方法操作 ,计算回收率 ,结果平均回
收率为 96. 1% , RSD为 0. 5% (n= 4)。
2. 10 样品含量的测定:取 3个批号的升血灵片 ,按
供试品溶液制备方法 ,依法操作 ,在选定的条件下 ,
进样 10μL,测定结果见表 1。
3 讨论
3. 1 经紫外吸收图谱扫描 ,大黄素在 288、 439 nm
处有吸收 ,但在实验中发现 288 nm处杂质对大黄
素干扰较大 ,故选用 439 nm波长。
表 1 升血灵片中大黄素的含量测定结果 (n= 3)
Table 1 Emodin in Shengxueling Tablet (n= 3)
批 号 大黄素 / (μg· 片 - 1 ) RSD /%
001212 26. 28 0. 25
010702 27. 15 0. 17
020309 27. 63 0. 12
3. 2 通过 HPLC定量大黄素能较好地控制质量 ,
可供升血灵片制定质量标准参考。
HPLC法测定妇科止带片中盐酸小檗碱的含量
任孝德 1 ,屠万倩 1 ,翟乙娟 1 ,侯文峰 2
( 1. 河南省中医药研究院 ,河南 郑州 450004; 2. 郑州市电信医院 ,河南 郑州 450000)
妇科止带片是《中华人民共和国卫生部药品标
准》 ( W S3 -B-0077-89)收载的中成药 ,由黄柏、椿皮、
五味子、龟板、茯苓、阿胶、山药 7味药材加工制成 ,
具有清热燥湿、收敛止带的功效 ,用于慢性子宫炎、
子宫内膜炎、阴道黏膜炎等引起的湿热型赤白带症
的治疗。原标准中未收载含量测定项。本实验采用
HPLC法对该制剂中的盐酸小檗碱进行了含量测
定 ,为更好地控制本品的内在质量提供了依据。
1 仪器与试药
岛津 LC— 10Avp系列高效液相色谱仪 ,岛津
SPD— M10Avp紫外检测器 , C LASS— LC10Avp色
谱工作站。盐酸小檗碱对照品 (中国药品生物制品检
定所 ,批号: 0713-9605) ;妇科止带片 (河南省奥林特
制药厂 ,批号: 020311、 020318、 020326) ;甲醇为色谱
纯 ,水为重蒸水 ,其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件: 色谱柱: Hypersil ODS C18柱 ( 250
mm× 4. 6 mm , 5μm);流动相:甲醇-2%磷酸二氢钠
( 30∶ 70,磷酸调 pH 3) ;体积流量: 1. 0 m L /min;柱
温: 40℃ ;检测波长: 346 nm。 理论板数按盐酸小檗
碱计算应不低于 3 000。
2. 2 供试品溶液制备:取本品 10片 ,除去包衣 ,精
密称定 ,粉碎成细粉 ,取 0. 5 g ,精密称定 ,置具塞三
角瓶中 ,精密加入甲醇 25 mL,密塞 ,称定质量 ,超声
处理 30 min,取出 ,放冷 ,再称定质量 ,用甲醇补足
减失的质量 ,摇匀 ,滤过 ,取续滤液作为供试品溶液。
2. 3 对照品溶液的制备:精密称取盐酸小檗碱对照
品 6. 12 mg ,置 10 mL量瓶中 ,加甲醇溶解 ,并稀释
至刻度 ,摇匀。精密量取 1 mL,置 10 mL量瓶中 ,加
甲醇溶解 ,并稀释至刻度 ,摇匀 ,制成 0. 061 2 mg /
mL的溶液 ,即得。
2. 4 空白试验:取缺黄柏的阴性对照 ,按供试品溶液
制备方法制备空白对照溶液 ,进样 ,测定 ,结果空白对
照溶液色谱中无盐酸小檗碱相对应的色谱峰 ,见图 1。
图 1 盐酸小檗碱对照品 (A)、妇科止带片 (B)和阴性对照 ( C)的 HPLC色谱图
Fig. 1 HPLC of berberine hydrochloride (A) , Fukezh idai Tablet (B) , and negat ive sample (C)
2. 5 线性范围的考察:分别精密吸取盐酸小檗碱对
照品溶液 2、 4、 6、 8、 10μL,按上述色谱条件进样测
定。以盐酸小檗碱的量 ( X )为横坐标 ,峰面积积分值
( A )为纵坐标 ,作线性回归 ,得回归方程 A= 3. 61×
106 X - 202. 53, r= 0. 999 1,结果表明盐酸小檗碱
在 0. 122 4～ 0. 612 0μg与峰面积线性关系良好。
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收稿日期: 2003-11-13